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非洲猪瘟病毒结构蛋白p54的优化表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

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国外畜牧学（猪与禽） 2022年第2期42卷 35-42页

作者：张皓淳辽宁省农业发展服务中心辽宁沈阳110034

为了实现非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54基因在大肠杆菌中的高效表达,同时建立以ASFV-p54重组蛋白为抗原的间接ELISA抗体检测方法,本试验根据GenBank(序列号:NC_044943.1)公布的ASFV p54的基因序列,设计一对特异性引... 详细信息

为了实现非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54基因在大肠杆菌中的高效表达,同时建立以ASFV-p54重组蛋白为抗原的间接ELISA抗体检测方法,本试验根据GenBank(序列号:NC_044943.1)公布的ASFV p54的基因序列,设计一对特异性引物,扩增构建pGEX-6P-1-p54原核表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行复制,经IPTG诱导表达,对重组蛋白利用SDS-PAGE分析和免疫印迹鉴定正确后,进行表达条件优化,并纯化重组蛋白。随后用ASFV-p54重组蛋白为包被抗原,通过条件优化、特异性试验、敏感性试验和重复性试验,建立一种稳定的血清ASFV抗体检测方法。结果显示,ASFV p54基因成功克隆到pGEX-6P-1原核表达载体中,得到pGEX-6P-1-p54原核表达质粒;转化***菌株BL21(DE3)中,经诱导表达得到重组蛋白,大小为46 kDa;成功建立测定ASFV抗体的间接ELISA方法,优化后确定最佳包被浓度为1.2μg/mL,待检血清最佳稀释倍数1∶100,最佳封闭液为1%BSA,酶标抗体最佳稀释度为1∶4000,经验证此方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,可初步应用于ASFV抗体的检测。

关键词：非洲猪瘟病毒 p54基因重组蛋白原核表达间接ELISA

非洲猪瘟病毒p30蛋白卵黄抗体的制备及生物活性检测

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国外畜牧学（猪与禽） 2022年第1期42卷 32-36页

作者：张皓淳辽宁省农业发展服务中心辽宁沈阳110034

为了制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p30蛋白卵黄抗体,研究卵黄抗体的生物活性。试验构建了pET-32a-p30原核表达载体,制定了科学的免疫程序和样本采集方法。提取卵黄液,进行二次盐析,得到对应的卵黄抗体。用酶联免疫... 详细信息

为了制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p30蛋白卵黄抗体,研究卵黄抗体的生物活性。试验构建了pET-32a-p30原核表达载体,制定了科学的免疫程序和样本采集方法。提取卵黄液,进行二次盐析,得到对应的卵黄抗体。用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定卵黄抗体效价,用免疫印迹(Western blotting)技术对其生物活性进行鉴定。ELISA试验表明:首次免疫p30蛋白7 d后,能够在蛋鸡的血清中检测出抗体(IgY),14 d后在卵黄中能够提取到IgY,35 d后IgY效价达到最高值。IgY具备和哺乳动物产生的IgY不同的生物活性,并可具有较高的特异性和稳定性,在免疫学研究中具有重要的价值。利用IgY进行实验检测,具有突出优势。通过抗原即ASFV p30蛋白免疫蛋鸡,分离提纯免疫蛋白,检测其生物活性,可用于鉴定非洲猪瘟。

关键词：非洲猪瘟病毒抗原蛋白卵黄抗体生物活性 IgY

抗菌肽NZ2114对奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌杀菌效果的研究

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中国畜禽种业 2023年第4期19卷 113-116页

作者：张皓淳辽宁省农业发展服务中心辽宁沈阳110034

为研究抗菌肽NZ2114对奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌的杀菌效果,本试验通过细胞活性检测、流式细胞术和电镜观察等方法检测在抗菌肽NZ2114作用下金黄色葡萄球菌的细胞膜完整性、细胞形态和细胞耐药程度的变化。试验结果表明葡萄球菌细胞... 详细信息

为研究抗菌肽NZ2114对奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌的杀菌效果,本试验通过细胞活性检测、流式细胞术和电镜观察等方法检测在抗菌肽NZ2114作用下金黄色葡萄球菌的细胞膜完整性、细胞形态和细胞耐药程度的变化。试验结果表明葡萄球菌细胞膜可被抗菌肽NZ2114损坏,同时在电镜下细胞体积萎缩,且耐药性明显降低。证明抗菌肽NZ2114针对金黄色葡萄球菌有一定的抑制杀菌效果。

关键词：金黄色葡萄球菌抗菌肽NZ2114 流式细胞术细胞耐药

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奶牛乳房炎关联微生物群落结构及多样性检测

现代农业 2021年第3期 66-67页

作者：张皓淳辽宁省农业发展服务中心辽宁沈阳110034

通过高通量测序法对奶牛乳房炎进行检测,能够对引起乳房炎的病原菌源头进行追溯。本文阐述了高通量测序技术及运用此种技术检测奶牛乳房炎的重要意义,介绍了检测所需的全部材料与具体流程,根据微生物群落样本测序及多样性指数实验结果... 详细信息

通过高通量测序法对奶牛乳房炎进行检测,能够对引起乳房炎的病原菌源头进行追溯。本文阐述了高通量测序技术及运用此种技术检测奶牛乳房炎的重要意义,介绍了检测所需的全部材料与具体流程,根据微生物群落样本测序及多样性指数实验结果对微生物群落结构及多样性进行了分析,结果显示奶牛患乳房炎后,乳房内外的微生物构成会发生变化,内、外源病原菌均有可能引发乳房炎。

关键词：高通量测序法奶牛乳房炎关联微生物群落结构多样性指数

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生猪饲养场猪瘟监测及分离毒株同源性分析

吉林畜牧兽医 2023年第12期44卷 39-40页

作者：张皓淳魏澍辽宁省农业发展服务中心辽宁沈阳110010

猪瘟是一种具有高度传染性和致死性的病毒性疾病,为了及时发现和控制猪瘟的传播,生猪饲养场需要进行有效的猪瘟监测,并对分离的毒株进行同源性分析。技术限制、样本获取困难以及数据处理和解读的复杂性是当前面临的主要问题。此外,监测... 详细信息

猪瘟是一种具有高度传染性和致死性的病毒性疾病,为了及时发现和控制猪瘟的传播,生猪饲养场需要进行有效的猪瘟监测,并对分离的毒株进行同源性分析。技术限制、样本获取困难以及数据处理和解读的复杂性是当前面临的主要问题。此外,监测网络和报告机制的完善性也亟待改进。本文旨在探讨生猪饲养场猪瘟监测及分离毒株同源性分析的重要性,并提出相关的研究问题。

关键词：生猪饲养场猪瘟监测分离毒株

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集约化种猪场猪伪狂犬病的诊断及净化措施

现代畜牧兽医 2019年第4期 40-42页

作者：张皓淳辽宁省农业发展服务中心辽宁沈阳110034

猪伪狂犬病是集约化种猪场较为常见的一种猪疾病,对养猪业发展有着较大危害,具有高度接触性、热性等特点。本文主要围绕集约化种猪场猪伪狂犬病诊断及净化策略等方面展开讨论,针对病毒特征、流行特点和发病机制等诊断猪狂犬病,并制定针... 详细信息

猪伪狂犬病是集约化种猪场较为常见的一种猪疾病,对养猪业发展有着较大危害,具有高度接触性、热性等特点。本文主要围绕集约化种猪场猪伪狂犬病诊断及净化策略等方面展开讨论,针对病毒特征、流行特点和发病机制等诊断猪狂犬病,并制定针对性净化措施,为养猪场良好发展提供借鉴。

关键词：集约化种猪场伪狂犬病净化措施

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矿山机电设备的维修与管理措施实践

硅谷 2014年第7期 196-196页

作者：张皓淳李健阜新矿业集团兴阜煤矿

机电设备是矿山生产的基础,对设备做好检修,加强质量管理,才能够证矿山的正常生产运行。在对矿山机电设备进行维修管理中,应定期进行设备检测,对设备的运转情况进行查明,采取有效合理的措施,保证设备不会发生突发事故,影响正常生产,这... 详细信息

机电设备是矿山生产的基础,对设备做好检修,加强质量管理,才能够证矿山的正常生产运行。在对矿山机电设备进行维修管理中,应定期进行设备检测,对设备的运转情况进行查明,采取有效合理的措施,保证设备不会发生突发事故,影响正常生产,这是确保设备高效运行的基础。矿山机电设备管理工作是一个系统的、长期的工作。应该谨小慎微,提高机械设备的安全性,从根本上保证矿山生产的运行与发展。

关键词：矿山机电设备维修管理

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猪流行性感冒诊断及防治措施

现代畜牧科技 2023年第3期 88-90页

作者：张皓淳魏澍辽宁省农业发展服务中心辽宁沈阳110034

随着人们生活水平的提高,对生猪的畜产品质量也变得越来越高,生猪养殖的发展也越来越科学化,但是在这一过程中,各种疾病的发生也是不断增多。猪流行性感冒是一种引起呼吸系统感染的疾病,在猪群中的传播速度较快,且人畜共患,若该病不能... 详细信息

随着人们生活水平的提高,对生猪的畜产品质量也变得越来越高,生猪养殖的发展也越来越科学化,但是在这一过程中,各种疾病的发生也是不断增多。猪流行性感冒是一种引起呼吸系统感染的疾病,在猪群中的传播速度较快,且人畜共患,若该病不能及时得到治疗,将会给生猪养殖业和人们的生活带来威胁,严重制约生猪的生长发育,给养殖场带来巨大的损失。该文将对猪流行性感冒从各个方面进行论述,希望能够对广大的养殖场带来一定的参考价值,降低疫病带来的损失,提高养殖场的生猪养殖效益。

关键词：猪流行性感冒传播诊断

辽宁省2012—2015年猪口蹄疫、猪瘟和高致病性猪蓝耳病免疫抗体监测分析

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黑龙江畜牧兽医（下半月） 2017年第10期 160-163页

作者：杨国丽王军郝运河周维魏圆圆王冰张皓淳吴新华辽宁省动物疫病预防控制中心沈阳110164 阜新市动物疫病预防控制中心辽宁阜新123000 朝阳市双塔区动物卫生监督所辽宁朝阳122000

目前病毒性传染病的控制主要依赖于生物安全、监测、检测、检疫、隔离、扑杀和疫苗免疫并辅助以药物防治和控制继发感染、减轻病症等措施,疫苗免疫依然是现阶段控制病毒性传染病的有效手段。

关键词：监测分析猪口蹄疫免疫抗体猪蓝耳病高致病性辽宁省病毒性传染病猪瘟