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Inducing Expression and Reaction Characteristic of Nitrile Hydratase from Rhodococcus sp. SHZ-1

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Chinese Journal of Chemical Engineering 2007年第4期15卷 573-578页

作者：王超张根林徐小琳李春 Department of Environmental and Biochemical Engineering School of Chemistry and Chemical EngineeringShihezi University Shihezi 832003 China School of Life Science and Technology Beijing Institute of Technology Beijing 100081 China

Inducing expression and the reaction characteristic of nitrile hydratase （NHase） from Rhodococcus sp. SHZ-1 were investigated. The results showed that the expression of NHase was greatly enhanced with the cooperation of acrylonitrile and ammonium chloride as inducer in the medium and the specific activity of NHase was increased of 44%. Then the temperature, pH, concentration of acrylonitrile and acrylamide were evaluated, which affected the activity and reaction characteristic of NHase. It was found that the temperature and concentration of acrylarnide were the most important factors for the catalyzation of NHase. The optimal catalysis temperature of NHase from Rhodococcus sp. SHZ-1 was 30℃, and the activation energy of the hydration of NHase was 90.2kJ·mol^-1 in the temperature range from 5℃ to 30℃. Kmof NHase was 0.095mol·L^-1 using acrylonitrile（AN） as substrate, and NHase activity was inhibited seriously when acrylonitrile concentration was up to 40g·L^-1, the substrate inhibition constant Ki is 0.283mol·L^-1. Moreover, the NHase from Rhodococcus sp. SHZ-1 had very strong tolerance to acrylamide, in which the final concentration of acrylamide reached to 642g·L^-1 and the residual activity of NHase still maintained 8.6% of the initial enzyme activity.

关键词： nitrile hydratase biocatalysis acrylamide characteristic Rhodococcus sp. SHZ- 1

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供应中断情况下的库存控制模型研究

系统工程理论与实践 2006年第12期26卷 69-77页

作者：张根林谢洁陕西省电信有限公司西安710069 西安建筑科技大学西安710055

研究了按单装配系统中一个无时间界限的定期查看库存模型.针对该装配系统中,每个周期的总装配能力有限,产品由不同的组件装配而成,各组件的订货提前期确定,订货提前期的概率分布依赖于外生可观测的马尔可夫链的状态,组件的订货成本是线... 详细信息

研究了按单装配系统中一个无时间界限的定期查看库存模型.针对该装配系统中,每个周期的总装配能力有限,产品由不同的组件装配而成,各组件的订货提前期确定,订货提前期的概率分布依赖于外生可观测的马尔可夫链的状态,组件的订货成本是线性的,未能满足的需求全部按照缺货处理,首先提出了一种在给定的状态依赖基础库存策略的情况下,确定长期平均成本的方法,该方法考虑了所有基础库存策略的状态;之后,应用该方法分析了组件中断可能对企业库存状况和长期平均成本带来的影响.研究表明,状态不变的基础库存策略是最优的,并且组件供应中断时间的长短比组件供应中断概率的大小对组件库存策略的影响更大.该研究结果对企业和管理部门中的中断管理以及应急事件计划的制定有一定的参考价值.

关键词：库存模型马尔可夫链组件供应中断

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绿色营销中的进化博弈分析

统计与决策 2008年第13期24卷 51-53页

作者：张根林马果重庆大学经济与工商管理学院重庆400044

文章假设绿色营销中的企业和消费者为有限理性,运用进化博弈理论,分析了绿色营销中企业群体之间、企业和消费者群体之间不同策略的群体比例动态变化趋势以及进化稳定策略选择条件。并在此基础上提出了一些促进绿色营销的对策性建议。

关键词：绿色营销进化博弈复制动态

棉秆脱毒水解液发酵生产2,3-丁二醇的工艺优化

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农业工程学报 2011年第5期27卷 287-291页

作者：张根林江英兰班丽丽石河子大学化学化工学院新疆兵团化工绿色过程重点实验室石河子832003 石河子大学机械电气工程学院石河子832003

2,3-丁二醇是一种重要的化工产品,利用棉秆水解液替代淀粉原料制备2,3-丁二醇可保证粮食安全并降低成本。该文以棉秆稀酸水解液为基础,研究了其中糠醛和苯酚微波辅助加热-活性炭吸附的脱毒条件,优化结果为:活性炭用量1%、微波功率330W... 详细信息

2,3-丁二醇是一种重要的化工产品,利用棉秆水解液替代淀粉原料制备2,3-丁二醇可保证粮食安全并降低成本。该文以棉秆稀酸水解液为基础,研究了其中糠醛和苯酚微波辅助加热-活性炭吸附的脱毒条件,优化结果为:活性炭用量1%、微波功率330W、作用时间10min。在此工艺条件下,糠醛的去除率为81.2%,苯酚的脱除率为92.3%,总糖的损失为10.6%。脱毒棉秆水解液为底物发酵生产2,3-丁二醇研究表明,水解液浓度为40g/L时Klebsiella pneumoniae XJ-Li菌体浓度和2,3-丁二醇的产率最高,补料批式发酵可以缓解高浓度棉秆水解液对微生物生长与代谢的抑制作用。通过采用添加60mg/L维生素C和维持发酵液pH值于5.5的复合调控方法,2,3-丁二醇的质量浓度达到了45.1g/L,产率为0.45g/g。发酵试验表明脱毒的棉杆水解液作为碳源发酵制备2,3-丁二醇具有可行性。

关键词：水解脱毒发酵棉秆 2,3-丁二醇

*** XJPD-Li甘油脱水酶与复活因子的克隆表达及其复活关系研究

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作者：张根林石河子大学

学位级别：硕士

以自主筛选的产1,3-丙二醇菌株为基础,研究了甘油脱水酶的催化反应特性,通过克隆和表达甘油脱水酶与复活因子,定量研究了复活因子和其它因素与失活甘油脱水酶的复活关系。通过研究得到以下结果: 从新疆特殊环境土壤中筛选到在... 详细信息

以自主筛选的产1,3-丙二醇菌株为基础,研究了甘油脱水酶的催化反应特性,通过克隆和表达甘油脱水酶与复活因子,定量研究了复活因子和其它因素与失活甘油脱水酶的复活关系。通过研究得到以下结果: 从新疆特殊环境土壤中筛选到在厌氧条件下能够转化甘油生成1,3-丙二醇的菌株XJPDLi-2,经鉴定后命名为K. pneumoniae XJPD-Li（缩写XJPD-Li）。摇瓶发酵实验确定其最佳发酵条件为:温度40℃,pH8.0,硫酸铵6.0g·L-1,底物甘油20g·L-1和葡萄糖2.5 g·L-1。5L发酵罐批式发酵表明该菌在8h内可消耗20g·L-1甘油,1,3-丙二醇浓度达12.2 g·L-1,甘油的摩尔转化率达理论值0.75。补料批式发酵发现48h可消耗66.4g·L-1甘油合成38.1g·L-1的1,3-丙二醇,转化率达0.70,表明XJPD-Li菌是具高转化率的1,3-丙二醇生产菌株。以XJPD-Li菌甘油脱水酶为酶源研究了其酶促反应特性。结果表明该酶的表达合成与菌体生长呈现明显的耦合关系。催化反应的最适温度为40℃,且在40℃以下酶的稳定性较好。最适pH值为8.0,在6.0～8.0之间甘油脱水酶活性较高,稳定性也好。Na+、Mg2+、Mn2+和Fe2+对甘油脱水酶催化反应具有一定促进作用,而Ca2+、Co2+、Fe3+、Zn2+和Cu2+对其活性均有抑制作用。该酶分别以甘油和1,2-丙二醇为底物时最高反应浓度分别为0.15mol·L-1和0.3mol·L-1左右,动力学常数Km分别为5.57mmol·L–1和8.16 mmol·L–1。研究也表明该酶催化反应的活化能Ea为18.904kJ·mol– 1。利用PCR方法从XJPD-Li基因组DNA中分别克隆出甘油脱水酶基因dhaBCE和甘油脱水酶复活因子基因dhaFG片段。分别构建表达载体PET-28a（+）-dhaBCE和PET-28a（+）-dhaFG后转化*** BL21（DE3）,在25℃、OD600为0.6时用0.4mMIPTG诱导后均成功表达出具有生物活性的目标蛋白,诱导5小时后重组菌中甘油脱水酶活力达299U·mg-1,约为原始菌的300倍。重组菌中复活因子可使甘油和氧失活的脱水酶活力均恢复90%以上。重组菌中甘油脱水酶在以甘油为底物催化反应时,3min酶活就损失约35%,1h后活性仅剩2.7%;通氧时其活性损失更快,3min损失48%,1h后仅剩1.5%。通过定量研究甘油失活脱水酶的复活效果确定其最佳的复活条件为:ATP 50mmol·L-1、Mg2+10mmol·L-1、辅酶B123μmol·L-1、甘油脱水酶与复活因子的质量比4:1,在此条件下甘油和氧失活脱水酶的活力可分别恢复98.9%和97.3%。各因子对甘油脱水酶的复活贡献程度研究表明,脱水酶与复活因子质量比和ATP对脱水酶有效复活的贡献程度最大,但四种因子均是甘油脱水酶复活的必需因子。复活动力学研究表明在ATP、Mg2+和辅酶B12存在情况下,复活因子均能快速复活甘油和氧失活的脱水酶,且反应前10min复活速率较大,甘油失活脱水酶更易复活,复活反应60min后丙醛的积累量是氧失活脱水酶复活后的1.5倍。通过基因工程手段获得甘油脱水酶并进行催化失活与复活关系研究,将为构建新的甘油脱水酶体外催化与复活体系提供依据,也为1,3-丙二醇的生物合成调控提供理论指导,对促进生物法合成1,3-丙二醇的工业化进程具有重要意义。

关键词： 1,3-丙二醇甘油脱水酶甘油脱水酶复活因子失活复活 K. pneumoniae XJPD-Li

国有资本、融资约束与民营企业技术创新——基于混合所有制改革背景

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会计之友 2020年第2期 146-152页

作者：张根林段恬西安科技大学管理学院

为了更好地认清国有资本在民营企业中扮演的角色,基于混合所有制改革背景,以2014-2018年沪深两市民营上市公司为研究样本,运用面板数据双向固定效应模型和Heckman两阶段分析法,实证检验了民营企业中国有资本、融资约束与技术创新三者之... 详细信息

为了更好地认清国有资本在民营企业中扮演的角色,基于混合所有制改革背景,以2014-2018年沪深两市民营上市公司为研究样本,运用面板数据双向固定效应模型和Heckman两阶段分析法,实证检验了民营企业中国有资本、融资约束与技术创新三者之间的关系。研究表明:国有资本的加入抑制了民营企业技术创新,融资约束在两者的关系中起到了部分中介作用,即国有资本参股民营企业后并未发挥资源优势,反而加重了企业融资约束程度,进而抑制了民营企业技术创新。研究结果不仅弥补了已有研究的不足,还为混合所有制改革的深入推进提供了理论参考和实践指导。

关键词：国有资本融资约束民营企业技术创新混合所有制

消费者对绿色食品的态度及其影响因素研究——基于重庆地区消费者的实证分析

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消费者对绿色食品的态度及其影响因素研究——基于重庆地区消费者...

作者：张根林重庆大学

学位级别：硕士

我国的绿色食品在历经10多年的发展历程,正在变得广为人知。如今,绿色食品已经成为健康食品的代名词。伴随着中国加入WTO和全球经济的一体化发展,以及中国从“温饱”型社会向“小康”型社会的转轨,人们的生活方式在发生着变化,对农产品... 详细信息

我国的绿色食品在历经10多年的发展历程,正在变得广为人知。如今,绿色食品已经成为健康食品的代名词。伴随着中国加入WTO和全球经济的一体化发展,以及中国从“温饱”型社会向“小康”型社会的转轨,人们的生活方式在发生着变化,对农产品和食品质量的要求越来越高,尤其是对无公害食品、绿色食品的需求越来越大。尽管消费者对这一需求越来越大,但是从现有文献资料可以看到,绿色食品在市场上所占的份额仍然非常有限,绿色食品市场仍存在着严重的消费者不足。而绿色食品的消费市场主要取决于作为市场主体的消费者对绿色食品的认知、购买态度以及购买行为。消费者的购买态度直接影响其购买行为。那么消费者当前对绿色食品态度怎么样?主要受到哪些因素的影响?以及消费者对待购买绿色食品态度与购买意向之间的关系又怎样?从国内已有的文献来看,具体针对消费者购买绿色食品的行为理论研究不多,实证分析也较少,以消费者的生活方式为细分市场探讨对消费者的态度及其购买行为的影响的更少。从应用的角度讲,研究和准确的认识影响消费者购买绿色食品的态度及其行为的因素,能有助于企业更深入,更准确的去了解消费者的真正的需要,从而制定更有效的市场营销策略;同时,也能够为政府机构制定引导健康、科学的消费行为的政策与法规提供决策参考依据。本论文试图以实证研究的方法,主要从消费者生活方式、环境关切、生态认知、价格等多个视角,对消费者对绿色食品的态度和及其影响因素进行研究和探讨。本论文在对已有理论文献研究的基础上,借鉴和改编已有的相关态度测量量表,确定影响因素变量,以重庆市区的消费者为调研对象,通过问卷调查方式,获取消费者购买绿色食品态度行为以及生活方式的第一手数据,共收集样本314份。使用信度分析、因子分析、聚类分析、单因素方差分析、相关分析、回归分析等方法,对本论文提出的相关假设进行了实证分析,结果表明影响重庆市区消费者购买绿色食品态度的主要因素为:价格、方便性、健康意识、环保意识;研究结论也表明,积极的购买态度与积极的购买意向之间呈显著的正关系;基于生活方式进行分群的消费者群体中,以“休闲健康型”消费者对绿色食品购买最积极。最后,本文总结了相关研究结论以及不足。

关键词：绿色食品消费者态度生活方式影响因素