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刚地弓形虫RH株ROP11基因真核表达载体的构建及核酸疫苗免疫保护作用的研究

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刚地弓形虫RH株ROP11基因真核表达载体的构建及核酸疫苗免疫保护...

作者：张晓磊河北北方学院

学位级别：硕士

刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种专性有核细胞内寄生原虫，能感染所有的恒温动物，据估计1/3的人口感染过弓形虫。因其能导致视网膜瘢痕，脑损伤和孕妇流产后感染而成为引起人类疾病的一个主要原生物。弓形虫棒状体蛋白由其分泌... 详细信息

刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种专性有核细胞内寄生原虫，能感染所有的恒温动物，据估计1/3的人口感染过弓形虫。因其能导致视网膜瘢痕，脑损伤和孕妇流产后感染而成为引起人类疾病的一个主要原生物。弓形虫棒状体蛋白由其分泌器官棒状体分泌，在虫体入侵宿主细胞时具有重要的作用，尤其是与纳虫空泡的形成和修饰过程密切相关。本课题构建了刚地弓形虫RH株ROP11基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-ROP11，将重组质粒转染HeLa细胞，间接免疫荧光法检测细胞内蛋白表达情况;将重组质粒肌肉注射免疫BALB/C小鼠，检测小鼠血清IgG，细胞因子IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ水平并记录弓形虫感染小鼠后的存活时间评价其免疫保护力，以期为进一步研究弓形虫ROP11基因核酸疫苗提供理论和物质基础。首先提取弓形虫RH株速殖子总RNA，根据TgROP11基因全长编码序列（登录号为DQ077905）的开放阅读框设计引物并进行逆转录PCR（RT-PCR）扩增，将扩增的目的片段ROP11基因克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+)上，构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-ROP11，之后将PCR产物经EcoR I和Not I酶切后与同样经EcoR I和Not I酶切的pcDNA3.1(+)真核表达载体连接，对重组质粒做菌落PCR、EcoR I和Not I双酶切和测序鉴定。结果显示，RT-PCR扩增产物约为1548bp，菌落PCR及双酶切结果正确，序列测序结果与GenBank上报告的ROP11序列相比，8个核苷酸存在变异，导致5个氨基酸发生改变，其中在第56个氨基酸位置多了一个天冬酰胺。证明成功构建了弓形虫ROP11的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-ROP11。确定表达质粒成功构建后，将pcDNA3.1(+)-ROP11重组质粒转化到制备好的感受态大肠埃希菌（***）XL-Blue内，筛选阳性克隆后扩大培养，提取质粒，之后通过Lipofector阳离子脂质体转染试剂将pcDNA3.1(+)-ROP11重组质粒转染至HeLa细胞内。间接免疫荧光法检测发现重组质粒转染的HeLa细胞胞浆观察到黄绿色荧光，对照组无荧光，证明了构建的真核表达质粒能够在体外真核细胞内表达目的蛋白。最后碱裂解法大量提取质粒，免疫小鼠。将40只8周龄BALB/C小鼠随机分为4组，每组10只：实验组、空质粒对照组、PBS对照组和空白对照组，每组均通过股四头肌注射免疫小鼠，其中实验组注射pcDNA3.1(+)-ROP11重组质粒为100μg(1μg/μl)，空质粒对照组注射pcDNA3.1(+)质粒为100μg(1μg/μl)，PBS对照组注射无菌PBS缓冲液为100μl，空白对照组不注射，共免疫3次，每次间隔2周，末次接种量均加倍。分别于每次注射前和末次注射后第二周取小鼠血清检测抗体和细胞因子（IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10）。末次注射后2周各组小鼠腹腔攻击感染RH株弓形虫速殖子1×103个/只，观察其存活时间及免疫保护力。小鼠免疫接种后，实验组小鼠血清抗体IgG随着免疫次数的增加而明显增高，但空质粒对照组、PBS对照组和空白对照组相应的血清中均未出现明显升高，末次注射后实验组小鼠血清IgG与空质粒对照组、PBS对照组和空白对照组比较均有统计学意义（P<0.05）。实验组小鼠IFN-γ浓度均值为364.51pg/ml，较空质粒对照组（49.55pg/ml）、PBS对照组（46.24pg/ml）、空白对照组（47.52pg/ml）比较有统计学差异（P<0.05）;实验组小鼠IL-2浓度均值为151.54pg/ml，较空质粒对照组（49.40pg/ml）、PBS对照组（43.34pg/ml）、空白对照组（43.23pg/ml）比较有统计学差异（P<0.05）;实验组小鼠IL-4浓度均值为131.45pg/ml，较空质粒对照组（50.28pg/ml）、PBS对照组（53.17pg/ml）、空白对照组（49.14pg/ml）比较有统计学差异（P<0.05）;实验组小鼠IL-10浓度均值为159.82pg/ml较空质粒对照组（56.58pg/ml）、PBS对照组（52.18pg/ml）、空白对照组（49.29pg/ml）比较有统计学差异（P<0.05）。结果显示，实验组IgG抗体水平和细胞因子水平明显升高，与空质粒对照组、PBS对照组和空白对照组比较有统计学差异（P<0.05）。后经抗感染免疫攻击实验发现实验组、空质粒组、PBS组和空白对照组小鼠平均存活时间为236.3h、97.8h、96.3h、96.2h，实验组与三对照组比较，实验组小鼠存活时间明显延长（P<0.05）。说明用pcDNA3.1(+)-ROP11重组质粒

关键词：刚地弓形虫 ROP11 真核表达质粒核酸疫苗免疫反应

星星草PtDHAR及PtFer基因的克隆与表达分析

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星星草PtDHAR及PtFer基因的克隆与表达分析

作者：张晓磊东北林业大学

学位级别：硕士

星星草(Puccinellia tenuiflora)为禾本科碱茅属多年生草本植物,其耐盐、耐碱性均较强,在土壤pH值达到10以上、表土含盐量达到5%时,仍能生长良好,是进行植物耐盐碱机理研究的良好材料。在分子水平研究星星草耐盐碱机制对改良农作物耐盐... 详细信息

星星草(Puccinellia tenuiflora)为禾本科碱茅属多年生草本植物,其耐盐、耐碱性均较强,在土壤pH值达到10以上、表土含盐量达到5%时,仍能生长良好,是进行植物耐盐碱机理研究的良好材料。在分子水平研究星星草耐盐碱机制对改良农作物耐盐碱性状,提升盐碱土地利用价值具有重要的意义。有文献报道盐碱胁迫会诱发氧化胁迫,而提高植物清除活性氧的能力可以增强植物抵御盐碱胁迫的能力。本实验室对星星草的前期研究得到了星星草DHAR基因和Fer基因片段,它们都是植物抗氧化系统中的重要基因。本试验的目的是利用分子生物学技术对星星草DHAR基因和Fer基因的全长进行克隆,研究在不同盐碱处理条件下这两个基因的表达变化情况;利用生物信息学手段分析其基因序列、构建系统发生树,为进一步研究星星草耐盐碱胁迫的分子机理奠定基础。本研究的主要结果如下: 1.以在黑龙江省青冈县天然盐碱地(pH9.5)采集的星星草叶片为试验材料,构建了cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)cDNA文库。利用RACE技术,根据DHAR及Fer基因的EST片段设计基因特异性引物,从星星草中获得了基因全长序列,分别命名为PtDHAR和PtFer。 2.对获得的两个新基因的序列进行分析表明,PtDHAR和PtFer基因全长分别为987bp和751bp,其开放阅读框分别编码213、111个氨基酸;PtDHAR基因编码的蛋白含有两个保守区,分别为GST-N-family和GST-C-DHAR;通过系统发生树分析表明PtDHAR和PtFer基因与水稻、小麦等禾本科植物相应基因具有较高的同源性。 3.用温室培养的8周龄星星草为试验材料,用200 mmol/L NaCO分别处理0h,2h,6h,12h和24h,分别提取地上部和根的总RNA进行Northern杂交。结果表明,胁迫处理后,PtDHAR基因在地上部和根中的表达量与对照相比都有显著增加,PtFer基因在地上部的表达量与对照相比增加更为明显;分别用0 mmol/L、50 mmol/L、100mmol/L、150 mmol/L和200 mmol/L的NaCO对8周龄星星草进行处理24h,提取RNA后进行Northern杂交,结果表明,两个基因的表达量与对照相比均有所增加。以上结果暗示着PtDHAR和PtFer与星星草耐受盐碱胁迫密切相关。 4.将PtDHAR基因构建到pBI121植物表达质粒载体中,通过电转化将pBI121-DHAR重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404菌株中,通过农杆菌介导法转化了烟草。

关键词：星星草盐碱胁迫 DHAR Fer 转基因

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新型pH值响应的荧光染料设计合成及应用

新型pH值响应的荧光染料设计合成及应用

作者：张晓磊山东理工大学

学位级别：硕士

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华北高寒区地被植物的引种、评价及应用研究

华北高寒区地被植物的引种、评价及应用研究

作者：张晓磊河北农业大学

学位级别：硕士

城市园林绿化中多年生宿根类地被植物应用广泛,地被植物在维持生态平衡,丰富园林景观等方面发挥着重要作用。本研究以河北坝上地区为代表,面对高寒区城镇绿化中地被植物匾乏,绿期短、花季集中于夏季,春秋无花,以及冬春季节地面裸露导致... 详细信息

城市园林绿化中多年生宿根类地被植物应用广泛,地被植物在维持生态平衡,丰富园林景观等方面发挥着重要作用。本研究以河北坝上地区为代表,面对高寒区城镇绿化中地被植物匾乏,绿期短、花季集中于夏季,春秋无花,以及冬春季节地面裸露导致起沙扬尘等问题,在调研分析华北高寒区典型城市园林植物应用现状与存在的具体问题基础上,于2008年5月,由保定市安国县引入张北试验站单瓣芍药(Paeonia lactiflora)、重瓣芍药(Paeonia lactiflora)、大花萱草(Hemerocallis middendorffii)、金娃娃萱草(Hemerocallis fuava)、荷兰菊(Aster novi-belgii L.)、八宝景天(Sedum spectabile)、百合(Lilium brownii var. viridulum)、玉簪(Hosta plantaginea)、桔梗(Platycodon grandiforus)等9种多年生草本地被植物,重点观测了引种植物在华北高寒区的生长发育特征,分析比较了引种植物的抗寒适生能力,进一步以坝上地区传统城市园林绿化常用地被植物为对照,进行了区域可选地被植物的应用质量评价。研究结果表明:1.对华北高寒区典型城镇应用园林植物的调研表明,区域城市园林绿化采用植物约57种,分布于21科。各类绿地乔、灌、地被植物的面积比例为52.3%、16.0%和31.7%,乔木应用普遍,花灌木和地被配植比例偏低,形成以乔木为主的寡层片园林景观结构。河北坝上城市中道路、企事业单位的绿地率与绿化覆盖度接近国家最低标准,居民区低于国家标准达21.6和5.0个百分点,成为影响市民城市绿化满意度的主要方面。限于高寒气候,区域植被绿期只有110～140 d,花季3个半月;冬春季节植被覆盖度降至5%～12%。区域地被植物匮乏,直接影响了城市景观质量,减弱了固土减尘、保护环境的生态效果。2.通过对引种的9种地被植物材料在试验地近两年的生长发育观察,表明所引地被植物在露地栽培下均可以正常地生长,并表现出了较好的观赏性状,其物候期比引种地安国晚约35～60d。根据坝上高寒区气候特征,所引种植物中有早花型、中花型、晚花型等不同类型,且绿期长、覆盖能力强。所引9种地被植物对高寒环境的适应能力都很强,均表现初了良好的抗旱和抗寒性,在田间管理比较粗放的条件下,冬季不覆盖或简易覆盖即可顺利度过。3.通过对9种地被植物在华北高寒区自然生长条件下的越冬性与生育形态观测,及人工低温胁迫下根系抗寒生理指标变化与株体生长恢复验证研究,结果表明,0～-18℃低温处理过程中,9种地被植物的相对电导率、可溶性糖和游离脯氨酸含量均呈上升趋势;在-18℃～-36℃处理过程中,桔梗、金娃娃萱草可溶性糖和游离脯氨酸含量仍保持上升而后再下降,而玉簪、荷兰菊、百合则呈持续下降趋势。结合越冬性与低温胁迫下株体恢复生长性状判断,9种地被植物在华北高寒区均可良好越冬,其抗寒能力依次为桔梗>金娃娃萱草>大花萱草>单瓣芍药>重瓣芍药>八宝景天>玉簪>荷兰菊>百合。4.以地被植物生长发育特性与抗寒性为基础,结合区域特殊生境下的地被植物绿期、花季、生态等需求,应用层次分析法对坝上高寒区可选地被植物进行了定性与定量的应用质量评价。根据综合指数值,将20种地被植物的应用质量价值分为4个等级。第一等级包括多年生宿根草本植物如单瓣芍药、重瓣芍药、大花萱草、金娃娃萱草、八宝景天、蜀葵等,可作为华北高寒区最佳地被植物,进行大面积的推广应用。第二等级地被植物包括多年生宿根草本和可自播繁衍的一、二年生草花类,如荷兰菊、桔梗、百合、虞美人、波斯菊等,该等级可作为区域骨干型植物推广应用。第三等级地被植物以一、二年生草花为主,如万寿菊、矮牵牛、石竹等。第四等级地被植物主要是一、二年生人工越冬或育苗移栽类草花,如一串红、金盏菊、孔雀草、唐菖蒲、大丽花等,因其绿化成本较高,该等级可作为点缀型植物应用于节假日摆花、花坛,以及小面积的高档次游憩区应用。通过对区域可选地被植物的质量应用分级,为其在华北高寒区园林绿化应用提供了科学的理论依据。

关键词：地被植物引种生长发育抗寒性应用质量评价

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方豪红学研究

方豪红学研究

作者：张晓磊中国艺术研究院

学位级别：硕士

以《红楼梦》中所提及的西洋物品为着眼点,通过考证西洋物品何时传入中国、由何人带入中国,由此推考《红楼梦》背后的故事——这就是方豪的《红楼梦》研究。方豪是著名的历史学家、天主教学人,红学不是他的主业,却也卓有成就。方豪研究... 详细信息

以《红楼梦》中所提及的西洋物品为着眼点,通过考证西洋物品何时传入中国、由何人带入中国,由此推考《红楼梦》背后的故事——这就是方豪的《红楼梦》研究。方豪是著名的历史学家、天主教学人,红学不是他的主业,却也卓有成就。方豪研究《红楼梦》,缘起于二十世纪四十年代教授中西交通史课程,其中所涉及的西洋物品与《红楼梦》中出现的有所交叉。方豪由此处获得灵感,他凭借一己史学及宗教知识方面的优势,查阅了大量天主教传华史和清史资料,一一考证《红楼梦》中西洋物品的来源,希望从细节处入手,得到有关《红楼梦》背后的真时代、真人物的相关信息。对《红楼梦》中西洋物品的涉及,前有古人、后有来者,但是方豪无疑是这其中最系统和最全面的。本文分为四部分：第一部分就前人对方豪的研究在汇总的基础上进行分门别类地梳理;第二部分简述方豪的生平,试析其《红楼梦》研究的时代学术背景;第三部分综述方豪的红学观点,对这些观点进行理性思辨,探讨方豪研红的特点;第四部分是对方豪《红楼梦》研究的学术地位和影响的评价。

关键词：红楼梦方豪西洋物品

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地应力对瓦斯压力及突出灾害的控制作用研究

采矿与安全工程学报 2013年第3期30卷 408-414页

作者：程远平张晓磊王亮中国矿业大学煤矿瓦斯治理国家工程研究中心安全工程学院江苏徐州221116 淮北矿业股份有限公司博士后科研工作站安徽淮北235000

为考察地应力对瓦斯压力与突出灾害的控制作用,通过理论分析和现场实例验证相结合的方法,分析了地应力的演化特征及构造应力对煤体结构、瓦斯压力和突出灾害的控制作用规律。研究结果表明:构造应力的演化对煤层瓦斯赋存及运移起主导控... 详细信息

为考察地应力对瓦斯压力与突出灾害的控制作用,通过理论分析和现场实例验证相结合的方法,分析了地应力的演化特征及构造应力对煤体结构、瓦斯压力和突出灾害的控制作用规律。研究结果表明:构造应力的演化对煤层瓦斯赋存及运移起主导控制作用,含煤地层在高构造应力作用下其煤层瓦斯压力梯度可能远超过静水压力梯度,形成高的瓦斯压力;在强烈构造运动作用下形成的构造煤具有煤体强度低、瓦斯吸附和放散能力强等特点。由于地应力对煤体结构和瓦斯压力均起到控制作用,可以认为地应力在突出灾害中起主导控制作用,是煤体破坏的主要动力,也是高压瓦斯存在的前提。最后文中以祁南煤矿72煤层的瓦斯突出灾害特征验证了构造应力对突出灾害的主导控制作用。

关键词：地应力构造应力煤体结构瓦斯压力煤与瓦斯突出

计及一次调频和惯量支撑的VSG储能单元配置及成本分析

维普期刊数据库

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计及一次调频和惯量支撑的VSG储能单元配置及成本分析

作者：张晓磊华北电力大学

学位级别：硕士

由于全球性能源短缺问题日益凸显,越来越多的分布式电源通过逆变器接入电网,电力系统呈现低惯性、低阻尼的发展趋势。为提高系统运行的稳定性,国内外学者提出了虚拟同步发电机的概念,即利用分布式电源逆变器模拟同步机外特性,从而为系... 详细信息

由于全球性能源短缺问题日益凸显,越来越多的分布式电源通过逆变器接入电网,电力系统呈现低惯性、低阻尼的发展趋势。为提高系统运行的稳定性,国内外学者提出了虚拟同步发电机的概念,即利用分布式电源逆变器模拟同步机外特性,从而为系统提供必要的阻尼和惯量支撑。作为虚拟惯量的物理基础和能量来源,虚拟同步发电机储能单元的配置直接影响着虚拟同步发电机的性能和成本。本文基于虚拟同步发电机的惯量支撑和一次调频两大基本功能对其储能单元的配置方法和成本进行了研究。首先介绍了虚拟同步发电机的拓扑结构和控制策略,基于典型控制策略建立了VSG小信号模型,构建了计及惯量支撑和一次调频的VSG储能单元出力的时域模型,并以此为基础得到了储能单元配置的功率约束和容量约束,进而分析了控制参数对储能单元出力变化和储能配置约束条件的影响。其次,对所建立的储能单元出力模型进行了拓展,将混合储能系统应用于虚拟同步发电机,对储能单元的总出力需求进行分频,根据储能介质性能的差异使其承担不同频段的出力任务,从而得到了不同储能介质的配置约束条件以及储能配置受控制参数影响的规律。最后,建立了虚拟同步发电机储能单元全寿命周期成本模型,并基于电网频率的实测数据对三种储能配置方案进行了成本分析,对比了不同储能方式在经济性上的优势和不足,明确了控制参数和储能容量配置对VSG储能成本的影响,为VSG储能方式和配置方案的选取提供了理论依据。

关键词：虚拟同步发电机储能单元惯量支撑一次调频配置约束成本分析

不同靶点生物制剂治疗银屑病有效性和安全性的临床研究

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不同靶点生物制剂治疗银屑病有效性和安全性的临床研究

作者：张晓磊苏州大学

学位级别：硕士

银屑病是一种由遗传和免疫共同介导的慢性、复发性、炎症性、系统性疾病,以角质形成细胞过度增殖、异常分化及多种炎性细胞浸润为主要特征。随着对银屑病发病机制研究的不断深入,用于治疗银屑病的靶向生物制剂层出不穷,如TNF-α拮抗剂... 详细信息

银屑病是一种由遗传和免疫共同介导的慢性、复发性、炎症性、系统性疾病,以角质形成细胞过度增殖、异常分化及多种炎性细胞浸润为主要特征。随着对银屑病发病机制研究的不断深入,用于治疗银屑病的靶向生物制剂层出不穷,如TNF-α拮抗剂阿达木单抗、IL12/23拮抗剂乌司奴单抗、IL-17拮抗剂司库奇尤单抗和依奇珠单抗、IL-23拮抗剂古塞奇尤单抗等。本文旨在真实世界中观察和探讨不同靶点生物制剂治疗银屑病的有效性和安全性,提供真实世界的数据,为银屑病患者生物制剂的治疗提供参考选择。目的:观察和探讨真实世界中TNF-α拮抗剂阿达木单抗、IL-17拮抗剂司库奇尤单抗和依奇珠单抗、IL-23拮抗剂古塞奇尤单抗、IL-12/23拮抗剂乌司奴单抗治疗银屑病的有效性和安全性。方法:纳入研究的病例为上海市第十人民医院、上海市皮肤病医院皮肤科门诊2019年6月至2020年12月期间收治的慢性中重度斑块型银屑病患者以及特殊类型银屑病患者。患者均知情同意接受生物制剂治疗,使用剂量同说明书,并定期随访。在第0、4、8、12、16、24周分别对患者的有效性进行评估,将第12周的PASI75应答率作为主要终点。有效性评估指标包括:银屑病面积和严重程度指数(PASI)、受累体表面积评分(BSA)、医生总体评价(PGA)、皮肤病生活质量指数(DLQI)。同时进行安全性观察,记录不良反应和不良事件。结果:本研究共纳入125例慢性中重度斑块型银屑病患者、5例特殊类型银屑病患者。1.阿达木单抗入组30人,第12周PASI75应答率为60%;10%患者出现不良反应。2.乌司奴单抗入组22人,第12周PASI75应答率为63.6%;9.1%患者出现不良反应。3.司库奇尤单抗组1(300mg剂量组)入组22人,第12周PASI75应答率为95.5%;组2(150mg剂量组)入组2人,第12周PASI75应答率为100%。组3(按需调整剂量组)入组2人,第12周PASI75应答率为100%;53.8%患者出现不良反应。4.依奇珠单抗入组26人,第12周PASI75应答率为100%;50.0%患者出现不良反应。5.古塞奇尤单抗入组21人,第12周PASI75应答率为81%;9.5%患者出现不良反应。6.五例病例:依奇珠单抗治疗脓疱型银屑病、掌跖脓疱病,司库奇尤单抗治疗反向型银屑病,阿达木单抗治疗红皮病型银屑病和联合MTX治疗关节病型银屑病均疗效显著。2例出现不良反应。结论:生物制剂治疗慢性中重度斑块型银屑病和特殊类型银屑病是真实有效的,不良反应可控,生物制剂更长期的有效性和安全性需要后续更大样本的研究证实。

关键词：银屑病生物制剂 TNF-α IL-12 IL-17 IL-23

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铁岭市农民专业合作社发展问题研究

铁岭市农民专业合作社发展问题研究

作者：张晓磊吉林农业大学

学位级别：硕士

我国的农业经营体制以改革开放为分界点,逐渐从单一的集体经营过渡到家庭承包、村集体服务的体系。在实际运作过程中,村集体的服务与村民的真实需求错位,双层经营体制难以充分发挥其优势,效果不甚理想,逐渐流于形式。这导致我国特色的... 详细信息

我国的农业经营体制以改革开放为分界点,逐渐从单一的集体经营过渡到家庭承包、村集体服务的体系。在实际运作过程中,村集体的服务与村民的真实需求错位,双层经营体制难以充分发挥其优势,效果不甚理想,逐渐流于形式。这导致我国特色的农业现代化进程相对滞后,加之我国农业处于粗放、分散阶段,与工业化、全球化不相适应,难以突破目前瓶颈。而事实表明发展农民专业合作社是推动农业走向现代化的重要措施。通过合作社内部机制,实现农户与合作社的分工协作,农户专注于农业生产或养殖,而将其他的经营活动交由合作社统一进行,农民生活改善的同时促进了农业产业化。当前,发展农民合作社也是党在促进农村经济发展的重要方针,党的十八大报告提出要创新合作形式,促进农业规模化发展,建立农民专业合作是行之有效的方法,党的十八届三中全会指出应鼓励农村发展合作经济,提高土地等农村资源的利用率,2015年中央一号文件提出推动示范合作社的发展。不可否认的是,目前我国农民专业合作社在发展中仍然存在一些问题,本文以铁岭市为样本进行分析,试图理清铁岭市农民专业合作社的发展路径。本文总体可分为五个部分。第一部分是绪论。内容涵盖了论文写作的基本背景,国内外研究情况及研究方法。第二部分,主要内容为农民专业合作社的基本理论,对相关概念进行界定,并对马克思列宁主义关于农民专业合作理论及在中国的运用进行了系统地阐述。第三部分,介绍了国内外典型农民专业合作社发展情况及有益经验,希望对解决铁岭市农民专业合作社发展问题有所裨益。第四部分,阐述了铁岭市农民专业合作社发展历程及在发展过程中存在的问题,分析了产生上述问题的主要原因。第五部分,提出了解决上述问题,完善铁岭市农民专业合作社运行机制的一些意见和建议。

关键词：铁岭市农民专业合作社发展