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枯草芽孢杆菌4种环脂肽抗猪δ冠状病毒的研究

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江苏农业科学 2024年第4期52卷 182-186,192页

作者：朱桃张双玉张路阳钟纯燕陈悦雯李基棕李彬罗楚平淮阴工学院江苏淮安223002 江苏省农业科学院兽医研究所江苏南京210014 黔西南民族职业技术学院生物工程系贵州兴义562400

为探究从枯草芽孢杆菌Bs 916中提取的表面活性素、罗克霉素、泛革素及杆菌霉素L 4种抗菌肽对猪δ冠状病毒(PDCoV)的抗病毒作用。首先采用CCK-8法确定抗菌肽对细胞无毒性的最佳浓度范围,随后分别采用RT-qPCR、Western blot及IFA 3种方法... 详细信息

为探究从枯草芽孢杆菌Bs 916中提取的表面活性素、罗克霉素、泛革素及杆菌霉素L 4种抗菌肽对猪δ冠状病毒(PDCoV)的抗病毒作用。首先采用CCK-8法确定抗菌肽对细胞无毒性的最佳浓度范围,随后分别采用RT-qPCR、Western blot及IFA 3种方法检测Bs 916中4种环脂肽对PDCoV的抗病毒效果。结果显示,4种环脂肽在浓度≤50μg/mL时对细胞无毒性,同时具有良好的抗病毒效果。相同条件下,罗克霉素抗病毒效果最佳,其次为表面活性素。本研究从枯草芽孢杆菌Bs 916中提取的表面活性素、罗克霉素、泛革素及杆菌霉素L可抑制PDCoV在细胞中的增殖,具有良好的抗病毒作用,其中以罗克霉素和表面活性素的抗病毒效果最佳,可为抗PDCoV药物研发提供理论支持。

关键词：表面活性素罗克霉素泛革素杆菌霉素L 猪δ冠状病毒

2023年江苏常州地区H9N2亚型禽流感病毒遗传演化与抗原性分析

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中国家禽 2024年

作者：李玉冬张海涛罗燕周勇董金泽陈洪壮束思成陈雪张双玉刘晓妹杨亚军李荣杰夏福芳蒲娟罗坚强中国农业大学动物医学院兽医公共卫生安全全国重点实验室农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室江苏立华牧业股份有限公司常州市动物疫病预防控制中心

试验旨在调查H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）在江苏省常州市的流行情况。2023年3—12月，在常州市所有辖区的交易平台、散养户、活禽市场、屠宰场等7种场所类型的147个采样场点开展H9N2亚型AIV流行病学调查，试验采... 详细信息

试验旨在调查H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）在江苏省常州市的流行情况。2023年3—12月，在常州市所有辖区的交易平台、散养户、活禽市场、屠宰场等7种场所类型的147个采样场点开展H9N2亚型AIV流行病学调查，试验采集鸡、鸭、鹅、鸽等咽拭子、组织样品以及环境拭子共计1 970份，进行AIV分离及其流行病学特征分析，并对分离的H9N2亚型AIV进行遗传演化、关键氨基酸与糖基化位点和抗原性分析。结果显示：共鉴定出73株H9N2亚型AIV，平均分离率为3.70%;4月和5月分离率较高，分别为7.07%和8.00%；分离地点中活禽市场和交易平台的分离率最高；H9N2亚型AIV在鸡、鸭、鸽、野鸟粪便和环境中均有分离，在环境和鸡中的分离率最高，分别为6.90%和4.15%；分离的H9N2亚型AIV属于欧亚谱系9.1分支中Group 2群，与2021—2023年多个地区人感染H9N2亚型AIV亲缘关系较近；与参考株序列相比，H9N2亚型AIV分离株HA蛋白的130-loop、150-loop及190-helix存在明显氨基酸多态性，但没有发现新的糖基化位点；H9N2亚型AIV分离株均属于当前优势流行的抗原群，尚未发生明显抗原漂移。综上所述，江苏常州地区H9N2亚型AIV流行的热点场所是活禽市场和交易平台，提示环境消毒是控制病毒传播和污染的关键手段；H9N2亚型AIV可能在野生禽类中流行，须减少家禽与野禽接触；并且H9N2亚型AIV分离株HA蛋白受体结构域变异可能对人间感染造成持续威胁，值得关注。

关键词： H9N2亚型禽流感活禽市场遗传演化抗原性江苏

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设施黄瓜短季节全营养栽培基质研发

设施黄瓜短季节全营养栽培基质研发

作者：张双玉河北科技师范学院

学位级别：硕士

近些年随着我国农业快速发展,各种农业有机废弃物也逐年增加,不仅浪费了资源,还污染了环境。利用农业有机废弃物作为蔬菜栽培基质,不仅可以减少农业生产过程中的垃圾产生,更有利于我国农业绿色健康可持续发展。本试验以区域农业有机废... 详细信息

近些年随着我国农业快速发展,各种农业有机废弃物也逐年增加,不仅浪费了资源,还污染了环境。利用农业有机废弃物作为蔬菜栽培基质,不仅可以减少农业生产过程中的垃圾产生,更有利于我国农业绿色健康可持续发展。本试验以区域农业有机废弃物菇渣、牛粪有机肥为主要材料,辅以蛭石和珍珠岩进行复配,选用‘绿岛7号’为供试黄瓜品种进行容器栽培,通过对复配基质的理化性质、黄瓜植株生长状况、产量和果实品质等指标进行测定分析,研究了母料不同配比、不同装填方式对黄瓜生长发育的影响,以期开发一种适合设施黄瓜短季节栽培的免施肥全营养栽培基质。主要研究结果如下:1.在母料不同配比试验中,按菇渣:有机肥:蛭石:珍珠岩不同体积比复配,以温室土壤作对照。结果表明:处理S4（4.5:1.5:2:2）、S5（6:0:2:2）在栽培过程中基质p H、EC、容重、总孔隙度始终处于黄瓜生长适宜范围,基质中有机质、全氮、速效态氮磷钾含量充足。处理S4产量相比CK增加2.58%,S5产量与CK无显著差异,处理S1、S2、S3产量显著低于CK。处理S5相比CK显著提高了果实中蛋白质、Vc和可溶性固形物含量,分别提高了53.04%、85.78%和7.90%。综上认为,S4和S5两种基质为适宜黄瓜短季节栽培的全营养基质。2.在基质分层装填试验中,通过容器下层装填配方一（同S4）,上层装填配方二（同S5）,设置3种不同分层厚度,以配方一、配方二作为对照CK1和CK2。结果表明:处理T1（上层1/3配方二,下层2/3配方一）能够满足目标产量对养分的需求,黄瓜根系活力显著提高,相比CK1、CK2提高了13.79%和28.91%,根系总长度分别提高了17.72%和47.78%;促进了植株有效侧枝生长,增加了叶片数;与对照CK1、CK2相比,总产量分别增加5.53%和11.71%,同时提高了黄瓜果实中蛋白质和可溶性糖含量。综上所述,容器下层2/3装填S4配比基质,上层1/3装填S5配比基质,栽培效果更好,可用于全生育期免施肥的设施黄瓜短季节栽培使用。

关键词：菇渣牛粪有机肥 ‘绿岛7号’黄瓜全营养基质基质分层

构建枯草芽孢杆菌双质粒基因编辑系统及表达猪腹泻病毒关键抗原的研究

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构建枯草芽孢杆菌双质粒基因编辑系统及表达猪腹泻病毒关键抗原的...

作者：张双玉淮阴工学院

学位级别：硕士

仔猪腹泻是最严重的仔猪疾病群之一,也是引起仔猪死亡的重要原因。其中,猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（Transmis sible Gastroenteritis virus,TGEV）和猪德尔塔冠状病毒（Porcine De... 详细信息

仔猪腹泻是最严重的仔猪疾病群之一,也是引起仔猪死亡的重要原因。其中,猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（Transmis sible Gastroenteritis virus,TGEV）和猪德尔塔冠状病毒（Porcine Deltacoronavirus,PDCOV）是引起仔猪腹泻并使养猪业产生重大经济损失的主要三种猪肠道冠状病毒,目前接种疫苗是预防此类病毒性腹泻疾病的主要手段,但冠状病毒的S蛋白基因易发生突变或缺失则导致免疫失败,市面上所用的疫苗多为病毒灭活疫苗或弱毒苗,对病毒的防控能力有限。因此,对于猪腹泻病毒新型疫苗的研究是当前主要努力的方向。枯草芽孢杆菌（Bacillus sub tilis）是公认的安全且可使用的益生菌（GRAS）,其发酵过程中所产生的表面活性素、罗克霉素等具有抗菌、抗病毒的作用,且枯草芽孢杆菌在逆性环境下可产生芽孢,其表面多种芽孢衣壳蛋白可作为异源蛋白的锚定位点,进行异源蛋白的协同表达,因此针对枯草芽孢杆菌作为口服疫苗佐剂或递送平台成为一大研究热门。本研究以枯草芽孢杆菌作为宿主菌,利用CRISPR-Cas9工具构建双质粒基因编辑系统对枯草芽孢杆菌进行基因编辑,使得三种猪腹泻病毒关键抗原S1基因片段展示在不同芽孢衣壳表面,具体研究内容如下:（1）本研究首先分别构建了大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒载体PBE、PTN、PT C作为双质粒基因编辑系统的基本构建骨架,构建含有枯草芽孢杆菌P43启动子和Cas9蛋白的重组质粒PBE-Cas9;构建含有枯草芽孢杆菌P43启动子、Cot蛋白基因、sg RNA靶序列及荧光蛋白基因的重组质粒PTN-Cot A-RFP、PTN-Cot B-YFP、PTC-Cge A-GFP;将重组质粒PBE-Cas9和其中任一种荧光质粒依次转化至枯草芽孢杆菌JCL16中构建荧光蛋白重组菌ΔBS-RFP、ΔBS-YFP和ΔBS-GFP;以重组菌荧光蛋白表达与否检验本研究双质粒基因编辑系统是否工作。通过对重组菌进行基因组PCR验证,重组菌PCR片段大于野生菌PCR片段,通过观察转化平板,发现重组菌在紫外光下发荧光,且通过激光共聚焦观察孢子发光情况发现单个芽孢发光情况,依此结果证明本研究枯草芽孢杆菌双质粒基因编辑系统构建成功。（2）本研究分别选取PDCOV、TGEV和PEDV流行株的关键抗原S1基因片段,替换重组质粒PTN-Cot A-RFP、PTN-Cot B-YFP和PTC-Cge A-GFP中的荧光蛋白基因,构建重组质粒PTN-Cot A-PDCOV、PTN-Cot B-TGEV和PTC-Cge A-PEDV,同样将重组质粒PBE-Cas9和其中任一种病毒抗原表达质粒依次转化至枯草芽孢杆菌JCL16中,构建重组菌ΔBS-PDCOV、ΔBS-TGEV和ΔBS-PEDV,通过对重组菌进行基因组PCR、West ern-blot及IFA的检验,结果显示PEDV、PDCOV和TGEV三种病毒的流行株关键抗原S1蛋白均成功表达。（3）将三种不同病毒表达的重组菌通过灌胃的方式对小鼠进行免疫,分别在首免后14 d、28 d、42 d采集小鼠血液进行Ig G及中和抗体检测,并于首免后42 d处死小鼠检测细胞因子IL-4、IFN-γ分泌水平及T、B淋巴细胞比例检测。结果显示,二免后14 d,三种重组菌均能刺激小鼠产生Ig G抗体及中和抗体,三免后14 d抗体水平显著上升,且与PBS组差异显著（P<0.001）;三种重组菌免疫小鼠中和抗体效价最高可达1:64;三种重组菌免疫小鼠脾细胞增殖指数高于野生菌,且与PBS组差异显著（P<0.001）;三种重组菌可上调细胞因子IL-4、IFN-γ的分泌水平,刺激CD4和CD8T淋巴细胞及B淋巴细胞数量的增长;同时对小鼠一般身体壮况进行检测,发现三种重组菌免疫小鼠的体重增长水平要高于PBS组,且对三免后14 d扑杀小鼠盲肠内容物进行梯度离心稀释涂布,发现肠道中仍有免疫菌株存在,说明枯草芽孢杆菌在小鼠肠道中具有一定的定殖。综上所述,本研究利用CRISPR-Cas9成功构建了枯草芽孢杆菌双质粒基因编辑系统,并在不同的芽孢衣壳蛋白上成功表达荧光蛋白,并进一步构建了PEDV、PDCOV和TG EV三种猪腹泻病毒重组菌,通过小鼠实验验证了构建的猪腹泻病毒重组菌具有一定的免疫效力,具有诱导中和抗体、体液免疫和细胞免疫的能力,且以枯草芽孢杆菌作为递送蛋白宿主菌,具有调节小鼠肠道菌群,提高小鼠身体素质的能力,为猪腹泻病毒三联新型口服疫苗的研究奠定基础。

关键词：枯草芽孢杆菌基因编辑猪腹泻病毒孢子表面表达三联口服疫苗

微生物铁氧化还原作用对水中砷锑去除影响的研究进展

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化学进展 2022年第4期34卷 870-883页

作者：张双玉胡韵璇李成徐新华浙江大学环境与资源学院环境工程系杭州310058

砷锑污染在全球领域广泛存在,与常规的铁氧化物相比,微生物铁氧化生成的含Fe(Ⅲ)矿物对水中砷/锑(As/Sb)具有更强的吸附能力,并因其高效、实用和环境友好而具有广阔的应用前景,但微生物铁还原也可能导致被吸附的As/Sb再次释放。本文综... 详细信息

砷锑污染在全球领域广泛存在,与常规的铁氧化物相比,微生物铁氧化生成的含Fe(Ⅲ)矿物对水中砷/锑(As/Sb)具有更强的吸附能力,并因其高效、实用和环境友好而具有广阔的应用前景,但微生物铁还原也可能导致被吸附的As/Sb再次释放。本文综述了微生物铁氧化还原作用对As/Sb去除影响的研究进展,归纳了铁矿物“合成-溶解-转化”的微生物循环过程以及该循环伴随的水中As/Sb固定、溶解与转化机理,整合了微生物合成Fe(Ⅲ)矿物的矿物学性质、对As/Sb固定的热动力学规律和络合机制,总结了微生物合成Fe(Ⅲ)矿物对As/Sb去除的影响因素,基于该研究的现存问题展望了利用微生物铁氧化还原作用去除As/Sb的发展方向。

关键词：微生物铁矿物氧化还原除As/Sb

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《中性》中的混杂身份和第三空间

《中性》中的混杂身份和第三空间

作者：张双玉四川外国语大学

学位级别：硕士

杰弗里·尤金尼德斯是美国时下著名的小说家，评论家和作家，他针砭时事以见解独到，叙事方式独特见长。他的小说《中性》情节曲折，构思精细，既是一部家族秘密史，又是美国社会各种问题的一个叙述史，其中涉及到美国社会发展中出现的... 详细信息

杰弗里·尤金尼德斯是美国时下著名的小说家，评论家和作家，他针砭时事以见解独到，叙事方式独特见长。他的小说《中性》情节曲折，构思精细，既是一部家族秘密史，又是美国社会各种问题的一个叙述史，其中涉及到美国社会发展中出现的种族，战争，移民，两性人等各种敏感词汇。这部小说将希腊神话式的浪漫与美国社会的现实完美的结合在一起，表现的淋漓尽致。本文主要借助霍米巴巴的混杂和第三空间理论，旨在分析边缘人物对于自我身份的探索和追寻。文章分析了第一代移民面对文化同化时的态度，第二代移民美国梦的建立和幻灭，作为第三代人的卡尔他身为一个两性人对于自己性别身份的追寻，意在揭示这些处于社会边缘人物的精神状况，比如移民，黑人，两性人，同性恋，难民等等。本文认为，这些边缘人物不可能仅仅以一种简单的身份生活，他们的身份注定是混杂的。而看似是乌托邦的第三空间，本文认为它的理论意义要远大于现实意义，本文还阐述了尤金尼德斯在小说中提到的很多的隐喻，比如混杂，中间，双重性等，这些都是为了让大家以一种新的眼光去看待“另类”，他不仅仅描叙了这种中间状态是什么，也阐述了它的可能性，以此来呼吁社会在这种观念下能将这种乌托邦转变为现实。

关键词：《中性》混杂第三空间

钯/泡沫镍阴极对水中微量氯贝酸的电催化氢化还原脱氯研究

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环境科学学报 2021年第8期41卷 3138-3147页

作者：王哲妮张双玉胡韵璇李成徐新华浙江大学环境与资源学院杭州310058

氯贝酸(Clofibric acid,CA)是一种常见药品和个人护理品(PPCPs)类物质,在环境中具有持久性和稳定性.常规的水处理技术难以去除微量的CA,采用电催化氢化脱氯的方法可有效实现脱氯.本研究考察了CA初始浓度、工作电位、阴极液初始pH、反应... 详细信息

氯贝酸(Clofibric acid,CA)是一种常见药品和个人护理品(PPCPs)类物质,在环境中具有持久性和稳定性.常规的水处理技术难以去除微量的CA,采用电催化氢化脱氯的方法可有效实现脱氯.本研究考察了CA初始浓度、工作电位、阴极液初始pH、反应温度、钯载量和电解质Na2SO4的浓度等多种因素对氯贝酸降解的影响.结果表明,CA的脱氯降解符合一级动力学方程,在工作电位为-0.85 V vs Ag/AgCl,钯负载量为0.20 mg·cm^(-2),Na2SO4浓度为10 mmol·L^(-1),初始阴极液pH为4.6,反应温度控制在303 K时,经过120 min的反应后,初始浓度为5 mg·L^(-1)的CA降解率达98%.因此利用钯/泡沫镍电极电催化还原降解废水中的CA具有很大的应用潜力.

关键词：钯/泡沫镍电催化氢化脱氯氯贝酸影响因素

茉莉酸及其前体12-氧-植物二烯酸的HPLC-MS/MS检测方法

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植物学报 2017年第5期52卷 631-636页

作者：张双玉齐芪李晓慧盖颖蒋湘宁北京林业大学生物科学与技术学院国家林业局树木花卉育种与生物工程重点实验室北京100083 南京农业大学农学院南京210095

茉莉酸是植物体内重要的伤反应特异激素,含量极低,但作用较大。当植物受到机械伤害时,茉莉酸调控一系列应激反应。12-氧-植物二烯酸(OPDA)是茉莉酸合成途径中的重要前体,与茉莉酸有密切的关系。该研究建立了一种HPLC-MS/MS分析检测方法... 详细信息

茉莉酸是植物体内重要的伤反应特异激素,含量极低,但作用较大。当植物受到机械伤害时,茉莉酸调控一系列应激反应。12-氧-植物二烯酸(OPDA)是茉莉酸合成途径中的重要前体,与茉莉酸有密切的关系。该研究建立了一种HPLC-MS/MS分析检测方法,可同时检测植物材料中茉莉酸及其前体OPDA含量。利用该方法建立的标准曲线具有良好的线性相关性,相关系数达0.991 9–0.999 5,回收率范围为91.91%–101.56%。该方法同时具有较好的检测灵敏度,2种化合物的最低检测限为3.218和34.129 pmol。研究结果说明该方法切实可靠且具有较好的适用性。利用该方法检测了4种不同植物样品中目标化合物的含量,结果表明该方法能够用于不同植物材料中这2种活性化合物含量的检测分析。

关键词：茉莉酸 12-氧-植物二烯酸 HPLC-MS/MS

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与植物有关的古诗词在生物学教学中的应用

基础教育研究 2023年第6期 75-78页

作者：孙利军张双玉丁佳铃南通大学生命科学学院江苏南通市紫琅第一小学南通226000

古诗词对于植物的描写十分丰富,科学合理地将这些古诗词运用于生物学教学中,不仅能够激发学生学习知识的兴趣,而且可以让学生感受中国优秀传统文化的魅力。教师可以将与植物相关的古诗词作为章导入、节导入,以古诗词呼应整节课教学、穿... 详细信息

古诗词对于植物的描写十分丰富,科学合理地将这些古诗词运用于生物学教学中,不仅能够激发学生学习知识的兴趣,而且可以让学生感受中国优秀传统文化的魅力。教师可以将与植物相关的古诗词作为章导入、节导入,以古诗词呼应整节课教学、穿插于课堂教学中、作为试题情境。还可以在具体的植物教学内容中应用相关古诗词。

关键词：生物学教学古诗词植物传统文化