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混合式教学模式在生理学课程中的探索与实践

畜牧兽医杂志 2024年第4期43卷 118-122页

作者：赵禹郜原张全伟甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070

生理学是生物技术、动物科学、动物医学等专业的必修课。为提高人才培养质量,对生理学课程混合式教学模式进行探索与实践。通过混合式教学模式改革,教师对学生学习过程的掌握更加精确,课程考核手段更加多样。数字化教育过程提高了学生... 详细信息

生理学是生物技术、动物科学、动物医学等专业的必修课。为提高人才培养质量,对生理学课程混合式教学模式进行探索与实践。通过混合式教学模式改革,教师对学生学习过程的掌握更加精确,课程考核手段更加多样。数字化教育过程提高了学生学习兴趣、学习动机和解决问题的能力,能够提升学习效果、课程成绩和学生的综合能力,为其他课程的混合式教学模式改革提供了借鉴。

关键词：混合式教学互联网+教育教学改革生理学

猪流行性腹泻病毒非结构蛋白Nsp15互作宿主蛋白的筛选及鉴定

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生物工程学报 2024年

作者：孙金磊于瑞明张莉萍张中旺王永录潘丽张全伟刘新生甘肃农业大学生命科学技术学院中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室

为了筛选和鉴定与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus， PEDV)非结构蛋白15 (non-structural protein 15， Nsp15)互作的关键宿主蛋白。通过IP/pull down beads结合质谱技术筛选、鉴定与PEDV非结构蛋白Nsp15互作的宿主... 详细信息

为了筛选和鉴定与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus， PEDV)非结构蛋白15 (non-structural protein 15， Nsp15)互作的关键宿主蛋白。通过IP/pull down beads结合质谱技术筛选、鉴定与PEDV非结构蛋白Nsp15互作的宿主蛋白，并利用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)、激光共聚焦验证其互作关系，最后应用western blotting和RT-qPCR初步明确宿主蛋白SLC25a3与PEDV之间的作用关系。本研究成功构建了Nsp15重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-Flag-Nsp15，并筛选出与PEDV Nsp15互作的宿主蛋白SLC25a3。免疫共沉淀及激光共聚焦结果显示PEDV Nsp15与宿主蛋白SLC25a3存在互作关系。宿主蛋白SLC25a3能够显著抑制PEDV复制且呈现剂量依赖性。本研究为进一步探究SLC25a3在抗PEDV免疫应答中的作用及机制提供了参考。

关键词：猪流行性腹泻非结构蛋白蛋白互作病毒复制

牦牛STAG3基因克隆及其在不同年龄段牦牛睾丸中的表达定位

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农业生物技术学报 2024年第2期32卷 344-354页

作者：石军陈文丽白旭李建富袁宝赵兴绪张全伟甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃省动物生殖生理及繁殖调控重点实验室甘肃农业大学动物医学院

基质抗原3(stromal antigen 3, STAG3)是黏连蛋白复合体的重要成分之一，在动物卵泡发育、卵巢早衰和癌症发生等生物学过程中发挥重要调节作用，其在牦牛(Bos grunniens)生殖和发育过程中的作用尚不明确。本研究以不同岁龄(2, 4, 6和8岁... 详细信息

基质抗原3(stromal antigen 3, STAG3)是黏连蛋白复合体的重要成分之一，在动物卵泡发育、卵巢早衰和癌症发生等生物学过程中发挥重要调节作用，其在牦牛(Bos grunniens)生殖和发育过程中的作用尚不明确。本研究以不同岁龄(2, 4, 6和8岁龄)牦牛睾丸组织为材料，通过反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)克隆STAG3基因编码区序列(CDS)，利用STRING蛋白质互作数据库(STRING:functional protein association networks)和基因本体(Gene Ontology, GO)预测分析STAG3互作蛋白及生物学功能；通过苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察不同年龄牦牛睾丸组织形态结构；免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)染色和qRT-PCR分析STAG3分布及表达规律。结果显示，牦牛STAG3基因CDS区全长3 679 bp，开放阅读框为1 659 bp，编码552个氨基酸，蛋白无跨膜结构区，可能参与第一次减数分裂、联会复合和染色体浓缩等生物学过程；STAG3蛋白在各年龄段牦牛睾丸组织中均有表达，主要定位于初级精母细胞和次级精母细胞；2岁龄牦牛睾丸组织STAG3表达最高，且随年龄增长表达逐渐降低。结果表明，STAG3在动物进化中较为保守，各年龄段牦牛睾丸组织均有表达，其可能在牦牛生殖过程中发挥重要作用。本研究为解析牦牛生殖过程中STAG3功能及调控机制提供了参考依据。

关键词：牦牛基质抗原3(STAG3) 基因克隆生物信息学分析

脂磷壁酸激活奶牛乳腺中NUPR1表达及分布研究

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核农学报 2024年第1期38卷 25-32页

作者：贺海健陈艳刘佩雯赵晓萱张勇张全伟董伟韬赵兴绪甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省动物生殖生理及繁殖调控重点试验室甘肃兰州730070 甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070

为了探究NUPR1基因在奶牛乳房炎中的表达及分布规律,通过构建脂磷壁酸(LTA)诱导奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)体外炎症模型,以奶牛核蛋白1(Nucleus Protein 1,NUPR1)基因为研究对象,利用免疫组织化学技术(IHC)测定NUPR1在患病奶牛乳腺组织中... 详细信息

为了探究NUPR1基因在奶牛乳房炎中的表达及分布规律,通过构建脂磷壁酸(LTA)诱导奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)体外炎症模型,以奶牛核蛋白1(Nucleus Protein 1,NUPR1)基因为研究对象,利用免疫组织化学技术(IHC)测定NUPR1在患病奶牛乳腺组织中的分布情况。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(WB)检测炎症相关因子、NUPR1基因及其上下游基因在奶牛乳腺炎组织及乳腺上皮细胞炎症模型中的表达规律。qRT-PCR和WB结果显示,IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α在乳腺病理组织及细胞炎症模型中均极显著上调表达(P<0.01),NUPR1在奶牛乳房炎病理乳腺组织及乳腺上皮细胞炎症模型中均显著或极显著上调表达(P<0.05,P<0.01),同时,DNMT1下调表达,KLF4、SESN2和SOCS3基因上调极显著表达(P<0.01)。IHC结果显示,NUPR1主要表达于奶牛乳腺上皮细胞中,并且在奶牛患病乳腺组织中的表达量高于正常组。本研究结果为进一步探究NUPR1基因在乳房炎病理进程中的调控机理提供了试验和理论基础。

关键词：核蛋白1(NUPR1) 奶牛乳房炎白介素脂磷壁酸(LTA)

基于mtDNA Cytb基因对甘肃4个马群体遗传多样性和系统发育的研究

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黑龙江畜牧兽医 2024年第12期 41-49,123,124页

作者：高颖成述儒史金平罗志皓张全伟王建福刘哲张勇刘婷甘肃农业大学动物科学技术学院兰州730030

为了研究甘肃境内部分马群体的遗传多样性、遗传结构和母系起源,试验采用DNA测序技术对甘肃4个马群体(岔口驿马49匹、河曲马20匹、山丹马30匹和肃南马34匹)共133个个体血样的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)中的细胞色素b(cytochrom... 详细信息

为了研究甘肃境内部分马群体的遗传多样性、遗传结构和母系起源,试验采用DNA测序技术对甘肃4个马群体(岔口驿马49匹、河曲马20匹、山丹马30匹和肃南马34匹)共133个个体血样的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)中的细胞色素b(cytochrome b,Cytb)基因进行PCR扩增,并对4个马群体的Cytb基因序列特征、遗传多样性、遗传距离、遗传分化与变异进行了分析,结合其他马群体的Cytb基因序列构建了系统发育树单位型网络关系图。结果表明:4个马群体Cytb基因序列全长1140 bp,A+T含量(54.6%)大于G+C含量(45.4%),共检测到46个多态位点,33种单倍型;总单倍型多样度为0.9332±0.0100,总核苷酸多样度为0.00385±0.00017,总平均核苷酸差异为4.3714,平均Tajima's D值和Fu's Fs值分别为-1.0352和-13.057;4个马群体间的遗传距离、遗传变异系数和基因流的范围分别为0.0035~0.0042,0.01923~0.09132,4.975~25.504;4个马群体内的遗传变异(94.54%)远大于其群体间的遗传变异(5.46%);4个马群体的33种单倍型分散于6个支系(A~F)中。说明甘肃4个马群体间亲缘关系较近,都具有较高的遗传多样性且均为多母系起源。

关键词：马线粒体DNA(mtDNA) 细胞色素b(Cytb)基因遗传多样性系统发育

奶牛结合珠蛋白生物信息学分析及其多克隆抗体的制备

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中国兽医学报 2024年第3期44卷 558-564,594页

作者：刘佩雯董伟韬陈艳赵晓萱贺海健卢挺张全伟张勇刘光远甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省动物生殖生理与繁殖调控重点实验室甘肃兰州730070 中国农业科学院、兰州兽医研究所、家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070

结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)是奶牛罹患乳房炎期间一种重要的标志性蛋白,其在血液和乳汁中含量变化与患牛乳房炎病情密切相关。为制备奶牛Hp多克隆抗体及了解其理化性质、结构和功能,本研究通过PCR成功扩增获得奶牛Hp完整CDS区序列,对... 详细信息

结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)是奶牛罹患乳房炎期间一种重要的标志性蛋白,其在血液和乳汁中含量变化与患牛乳房炎病情密切相关。为制备奶牛Hp多克隆抗体及了解其理化性质、结构和功能,本研究通过PCR成功扩增获得奶牛Hp完整CDS区序列,对其进行生物信息学分析和pQE-80L-Hp原核表达载体的构建。将测序成功的重组质粒转化至M15感受态细胞,用1 mmol/L IPTG诱导重组蛋白的表达。重组蛋白表达后用亲和层析法进行纯化。利用纯化后的蛋白免疫动物制备多克隆抗体,利用ELISA方法和Western blot对多克隆抗体进行效价检测和反应性分析。结果显示,Hp是一种不稳定亲水性蛋白,分子式为C_(1936)H_(3049)N_(545O567)S_(19),编码388个氨基酸残基,由α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲4种结构组成,有15个抗原决定族,36个磷酸化位点。在1~42氨基酸位置存在信号肽,无跨膜结构域与CD163、MMP9、CP等蛋白具有较好的互作关系。pQE-80L-Hp在大肠杆菌中经诱导表达的重组蛋白的相对分子质量为42 kDa,主要以包涵体的形式存在,用其免疫兔子制备得到的多克隆抗体效价可达到1∶25600。本研究结果不仅有助于了解Hp的结构,而且为后续进行其功能的研究以及利用其作为标志物进行奶牛乳房炎早期高效快速诊断技术的研发奠定了基础。

关键词：结合珠蛋白生物信息学原核表达多克隆抗体奶牛

PPARA基因对绵羊肌内脂肪沉积的影响及其多态性

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华北农学报 2024年第2期39卷 209-218页

作者：付玲娟史金平张全伟刘婷赵德宝马维华马海蛟孟泉禄唐致雄成述儒甘肃农业大学动物科学技术学院甘肃兰州730070 甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070 甘肃省临夏州康乐县畜牧兽医中心甘肃临夏731500

为研究PPARA对绵羊肌内脂肪(IMF)沉积的影响及作用机制,寻找绵羊肌内脂肪沉积相关分子标记,以小尾寒羊(STH)和萨寒杂交(STH×SFK)F1群体为研究对象,通过测定其肉品质,利用H&E染色和油红O染色比较2个绵羊群体背最长肌组织学结构及脂滴分... 详细信息

为研究PPARA对绵羊肌内脂肪(IMF)沉积的影响及作用机制,寻找绵羊肌内脂肪沉积相关分子标记,以小尾寒羊(STH)和萨寒杂交(STH×SFK)F1群体为研究对象,通过测定其肉品质,利用H&E染色和油红O染色比较2个绵羊群体背最长肌组织学结构及脂滴分布;利用qRT-PCR和WB技术检测PPARA mRNA水平和蛋白水平在不同群体间的表达差异,并分析PPARA基因与肌内脂肪的相关性;Sanger测序技术检测PPARA基因SNP位点以评估其作为绵羊肌内脂肪沉积相关遗传标记的可能性。结果表明:小尾寒羊剪切力和失水率极显著高于萨寒杂交,但是pH值极显著低于萨寒杂交,大理石花纹评分小尾寒羊低于萨寒杂交群体;组织学染色显示,小尾寒羊肌纤维较粗,排列紧密,肌内脂肪在肌纤维间隙集中分布;萨寒杂交肌纤维较细且结构松散,肌内脂肪在肌细胞间及肌纤维间隙均匀、广泛分布,含量更高;PPARA mRNA表达量小尾寒羊群体显著高于萨寒杂交群体,PPARA蛋白表达量小尾寒羊群体极显著高于萨寒杂交群体;相关性分析显示,PPARA基因表达量与绵羊脂滴面积比及pH值呈极显著负相关,与剪切力和失水率呈极显著正相关,与大理石花纹评分弱相关;Sanger测序结果分析显示,2个绵羊群体PPARA基因第2内含子T49885C、T50007C、G50013A、G50835A、G50942A及G51154C位置上发生碱基突变,但小尾寒羊群体未检测到C49885T突变。SNP遗传多样性分析显示,SNP位点群体纯合度均大于杂合度,在群体中处于中低度多态;除G50835A突变偏离了Hardy-Weinberg平衡,其余SNPs均符合Hardy-Weinberg平衡,遗传基础稳定。研究认为,PPARA基因对绵羊肌内脂肪沉积具有重要影响,可作为绵羊肌内脂肪性状选择的潜在分子遗传标记。

关键词：绵羊肌内脂肪 PPARA 多态性

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含有聚己内酯为软段的弹性聚氨酯树脂合成

现代涂料与涂装 2024年第5期27卷 1-6+14页

作者：张全伟郭绍华宋欢欢马艳青李超宇张平李博文杨康中昊北方涂料工业研究设计院有限公司陕西飞机工业有限责任公司

弹性聚氨酯树脂具有优异的弹性以及其他机械性能,在雷达罩涂料、橡胶涂料中起到至关重要的作用。本文成功合成了不同分子量的聚己内酯树脂PCL1000/2000来代替大赛璐产品PCL-210N/220N,所制备树脂的化学结构和分子量分别通过傅里叶变换... 详细信息

弹性聚氨酯树脂具有优异的弹性以及其他机械性能,在雷达罩涂料、橡胶涂料中起到至关重要的作用。本文成功合成了不同分子量的聚己内酯树脂PCL1000/2000来代替大赛璐产品PCL-210N/220N,所制备树脂的化学结构和分子量分别通过傅里叶变换红外光谱（FTIR）、质子核磁共振光谱（1H NMR）和凝胶渗透色谱（GPC）进行了表征。研究了不同种类二元醇聚合物树脂作为线性软段以及NCO/OH物质的量比等对NCO封端预聚物弹性性能的影响,还研究了不同羟基树脂、氨基树脂或者环氧树脂和NCO封端预聚物交联固化对弹性以及其他机械性能的影响。结果表明:选用聚己内酯树脂PCL-1000/2000作为软段、NCO/OH物质的量比为1.5时合成的NCO封端预聚物,与聚天门冬氨酸酯交联固化,断裂伸长率大于400%,拉伸强度大于15 MPa,其他机械性能（附着力、耐磨性）优异。

关键词：弹性聚氨酯聚己内酯树脂弹性合成聚天门冬氨酸酯

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影响环氧底漆附着力的因素分析及其研究

现代涂料与涂装 2024年第5期27卷 11-14页

作者：马艳青李博文张全伟谈珍徐鹏兵郑玉龙王进忠中昊北方涂料工业研究设计院有限公司

通过对两种分子量的环氧树脂底漆进行试验研究,探讨了固化剂类型,基材种类以及附着力促进剂对其附着力的影响。结果表明,不同固化剂体系涂膜附着力的优异程度为:环氧聚氨酯体系>环氧聚酰胺体系(大分子聚酰胺)>环氧聚酰胺体系(小分子聚酰... 详细信息

通过对两种分子量的环氧树脂底漆进行试验研究,探讨了固化剂类型,基材种类以及附着力促进剂对其附着力的影响。结果表明,不同固化剂体系涂膜附着力的优异程度为:环氧聚氨酯体系>环氧聚酰胺体系(大分子聚酰胺)>环氧聚酰胺体系(小分子聚酰胺)>环氧改性脂环胺体系。对常见的基材体系研究表明,在硫酸阳极化处理过的铝板上,环氧底漆附着力表现最为优异。加入附着力促进剂,会一定程度上改善漆膜附着力,并且在同种基材上其附着力的表现也存在差异。

关键词：环氧底漆附着力固化剂基材附着力促进剂