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β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及表达

华南理工大学学报（自然科学版） 2008年第12期36卷 112-115,145页

作者：郭成栓崔堂兵郭勇华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006

从一株产碱性纤维素酶的短小芽孢杆菌菌株H9中,克隆到了编码葡聚糖内切酶的基因,对其基因序列及酶的结构域进行了分析预测,同时将该酶的基因构建于大肠杆菌表达载体pET20b中,获得重组表达载体pET20b-EglA,转化至大肠杆菌菌株BL21(DE3)... 详细信息

从一株产碱性纤维素酶的短小芽孢杆菌菌株H9中,克隆到了编码葡聚糖内切酶的基因,对其基因序列及酶的结构域进行了分析预测,同时将该酶的基因构建于大肠杆菌表达载体pET20b中,获得重组表达载体pET20b-EglA,转化至大肠杆菌菌株BL21(DE3)中进行表达,并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测.实验结果表明:该基因大小为1980bp,共编码659个氨基酸,在大肠杆菌中得到了良好的分泌表达;该酶的相对分子质量约为73000,由两个不连续的结构域组成,其一为N-端催化结构域,由糖基水解酶家族9组成,其二为C-端底物结合结构域,由碳水化合物绑定结构域家族3组成,其在不同温度和pH值下的活力和稳定性与原始菌株的比较接近.

关键词：葡聚糖内切酶大肠杆菌短小芽孢杆菌基因克隆表达

解淀粉杆菌DC-12产纤溶酶发酵条件的优化

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现代食品科技 2012年第10期28卷 1350-1355页

作者：柴海云崔堂兵华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006

用响应面法对产纤溶酶的解淀粉芽孢杆菌D-12的发酵条件进行了优化。首先通过单因素实验考察了各因素对产酶的影响,后在此基础上采用Plackett-Burman设计得出发酵时间、糊精浓度、细菌学蛋白胨浓度三个最重要的影响因素,接着通过最陡爬... 详细信息

用响应面法对产纤溶酶的解淀粉芽孢杆菌D-12的发酵条件进行了优化。首先通过单因素实验考察了各因素对产酶的影响,后在此基础上采用Plackett-Burman设计得出发酵时间、糊精浓度、细菌学蛋白胨浓度三个最重要的影响因素,接着通过最陡爬坡实验逼近酶活的最高区域,然后通过中心组合设计实验对显著因素进行优化,最后响应面法进行分析,得到的最佳发酵条件为:细菌学蛋白胨浓度2.25%,糊精浓度2.65%,发酵时间45 h。在此条件下,酶活为96.340 IU/mL。验证实验所得酶活为98.947 IU/mL,因此本优化工艺结果比较可靠。

关键词：解淀粉芽孢杆菌纤溶酶 Plackett-Burman(PB)设计中心组合设计响应面

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出芽短梗霉的研究进展

工业微生物 2002年第2期32卷 41-47页

作者：崔堂兵郭勇郑穗平华南理工大学食品与生物工程学院广州510640

出芽短梗霉是一类类酵母真菌 ,具有酵母样和真菌菌丝体两种形态。影响其形态的因素有碳源、氮源、离子种类及浓度和 pH值等。出芽短梗霉的发酵产物多种多样 ,如多聚糖、酶、抗真菌素等 ,通过选育优良菌株可提高发酵产物的产量。

关键词：出芽短梗霉研究进展分类两态性

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何首乌根和茎愈伤组织的二苯乙烯苷含量

华南理工大学学报（自然科学版） 2010年第9期38卷 147-150页

作者：邵利崔堂兵赵树进华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006 广州军区广州总医院广东广州510010

为了获得何首乌悬浮细胞系、研究何首乌细胞的液体培养和二苯乙烯苷的代谢路径,首先要获得何首乌愈伤组织.文中以何首乌根和茎为外植体,通过正交试验筛选根和茎诱导愈伤组织的适宜培养基,结果表明,在26℃和暗培养条件下,MS培养基中添加1... 详细信息

为了获得何首乌悬浮细胞系、研究何首乌细胞的液体培养和二苯乙烯苷的代谢路径,首先要获得何首乌愈伤组织.文中以何首乌根和茎为外植体,通过正交试验筛选根和茎诱导愈伤组织的适宜培养基,结果表明,在26℃和暗培养条件下,MS培养基中添加1mg/L2,4-二氯苯氧乙酸和0.4mg/L萘乙酸最适宜诱导出愈伤组织,诱导率可以达到96.7%.通过HPLC测定了根和茎愈伤组织的二苯乙烯苷含量,分别为1.5mg/g和0.4mg/g.

关键词：何首乌愈伤组织高效液相色谱二苯乙烯苷

WprA基因在Bacillus subtilis WB800中的克隆表达

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现代食品科技 2012年第8期28卷 927-929,944页

作者：柴海云崔堂兵华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006

对源自Bacillus subtilis 168的具有纤溶活性的基因序列(WprA)进行克隆,然后将WprA基因克隆到大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE3中,构建表达载体pBE-WprA,将重组载体转化到Bacillus subtilisWB800中,实现了WprA基因在Bacillus subtilis WB800中的表达。结果表明,WprA基因在Bacillus subtilis WB800中的对数生长期和平衡期均获得了表达,且产物被分泌到胞外。

关键词： Bacillus subtilisWB800 纤溶活性 WprA基因表达

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豆豉纤溶酶对枯草杆菌WB800的影响

安徽农业科学 2011年第22期39卷 13295-13297页

作者：陈亮崔堂兵华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006

[目的]研究豆豉纤维酶(DFE)在枯草杆菌WB800中的生理功能。[方法]以能够合成DFE的重组菌株WB800/***为试验菌株,研究其产孢率和在各外界胁迫下的耐受性。[结果]菌株WB800/pBE3和WB800/***在产孢培养基中发酵24 h后,菌株WB800/***的产孢... 详细信息

[目的]研究豆豉纤维酶(DFE)在枯草杆菌WB800中的生理功能。[方法]以能够合成DFE的重组菌株WB800/***为试验菌株,研究其产孢率和在各外界胁迫下的耐受性。[结果]菌株WB800/pBE3和WB800/***在产孢培养基中发酵24 h后,菌株WB800/***的产孢率仅比对照菌株高9.6%;继续发酵至48 h,菌株WB800/***的产孢率提高到了83.3%,而对照菌株的产孢率只有57.0%。表明DFE可以提高枯草杆菌的产孢率。在酸性、NaCl、高温、H2O2胁迫下,菌株WB800/***的耐受性要高于对照菌株。可见,DFE很可能通过调节产孢机制来提高枯草杆菌的耐受性。[结论]该研究初步揭示了DFE在枯草杆菌中的生理功能,为DFE的应用奠定了理论基础。

关键词：豆豉纤维酶枯草杆菌产孢率耐受性

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产纤溶酶微生物的筛选鉴定及生长模型的建立

食品与发酵工业 2010年第6期36卷 12-15,19页

作者：刘彩平崔堂兵华南理工大学生物科学与工程学院

使用酪蛋白平板初筛、摇瓶复筛的方法,从9种豆豉中分离到纤溶酶产生菌59株,其中DC-YJ11菌株的酶活较高。通过对其形态特征、生理生化特征结合16SrDNA序列分析,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。并对其构建了系统发育树和基于BP... 详细信息

使用酪蛋白平板初筛、摇瓶复筛的方法,从9种豆豉中分离到纤溶酶产生菌59株,其中DC-YJ11菌株的酶活较高。通过对其形态特征、生理生化特征结合16SrDNA序列分析,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。并对其构建了系统发育树和基于BP神经网络的生长模型BP-YJ11。

关键词：枯草芽孢杆菌纤溶酶鉴定 BP神经网络

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豆豉纤溶酶的定向进化

华南理工大学学报（自然科学版） 2010年第9期38卷 138-141,146页

作者：张少平崔堂兵陈亮郭勇华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006

为提高豆豉纤溶酶的药用价值,通过易错PCR方法对来源于Bacillus subtilis DC-12的豆豉纤溶酶DFE基因进行突变并构建突变体文库,利用底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA对突变体文库进行筛选.通过3轮易错PCR最终获得催化效率提高的突变酶mDFE3.序... 详细信息

为提高豆豉纤溶酶的药用价值,通过易错PCR方法对来源于Bacillus subtilis DC-12的豆豉纤溶酶DFE基因进行突变并构建突变体文库,利用底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA对突变体文库进行筛选.通过3轮易错PCR最终获得催化效率提高的突变酶mDFE3.序列分析表明突变酶mDFE3基因发生了6处碱基突变,其中4处突变发生氨基酸取代,2处为同义突变;通过swiss-model repository模拟突变酶mDFE3的结构,显示3个突变氨基酸位于回环结构上,1个位于α螺旋上;酶动力学测定结果表明突变酶mDFE3的Km值由0.58mmol/L降低至0.45mmol/L,突变酶mDFE3的催化效率(kcat)是野生型的2.57倍.

关键词：枯草芽孢杆菌豆豉纤溶酶易错PCR 定向进化筛选

提高植物细胞培养法生产次级代谢物产量的方法

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植物生理学通讯 2001年第5期37卷 479-482页

作者：崔堂兵郭勇林炜铁华南理工大学食品与生物工程学院广州510640

介绍了提高植物细胞培养法生产次级代谢物中需要考虑的几个问题 ,如外植体的选择、高产细胞系的选育、培养条件的优化、培养技术的选择、前体物的添加。

关键词：植物细胞培养次级代谢产物产量