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苯并[a]芘和慢性压力应激暴露对小鼠肝脏代谢的影响

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环境化学 2024年第1期43卷 60-68页

作者：于景娜谢丽陈志宇钟慧芳屠洁李芳杨甲甲罗茜河北工程大学材料科学与工程学院邯郸056038 中国科学院深圳先进技术研究院深圳518055 中国科学院大学北京100049

环境污染和慢性压力是影响人类健康的两大类常见风险因子,本研究通过表征苯[a]并芘(benzo[a]pyrene,B[a]P)与慢性压力应激(chronic unpredictable mild stimulation,CUMS刺激)暴露对小鼠肝脏代谢的影响,并探讨了同时暴露时两大风险因子... 详细信息

环境污染和慢性压力是影响人类健康的两大类常见风险因子,本研究通过表征苯[a]并芘(benzo[a]pyrene,B[a]P)与慢性压力应激(chronic unpredictable mild stimulation,CUMS刺激)暴露对小鼠肝脏代谢的影响,并探讨了同时暴露时两大风险因子之间潜在的相互作用.采用靶向代谢组学结合多元统计学方法分析了两个剂量B[a]P(2.0 mg·kg^(-1)·d^(-1)和20.0 mg·kg^(-1)·d^(-1))与CUMS刺激单独或联合暴露21 d后,雄性C57BL/6J小鼠肝脏中氨基酸代谢、TCA循环和胆汁酸代谢的变化.研究发现,2.0 mg·kg^(-1)·d^(-1)B[a]P可使小鼠肝脏中精氨琥珀酸、精氨酸和丙氨酸显著升高,谷氨酰胺显著降低;20.0 mg·kg^(-1)·d^(-1)B[a]P则主要导致丙氨酸显著上升,谷氨酰胺下降.慢性压力应激使小鼠肝脏同型半胱氨酸的含量显著下降. B[a]P与慢性压力应激同时暴露时,小鼠肝脏氨基酸和胆汁酸代谢会发生显著变化.进一步采用代谢扰乱度(metabolic effect level index,MELI)评估了两个风险因子的联合作用效果,发现2.0 mg·kg^(-1)·d^(-1)B[a]P和慢性压力应激同时暴露对小鼠氨基酸代谢、TCA循环和胆汁酸代谢的影响分别为拮抗、协同和加和作用;而20 mg·kg^(-1)·d^(-1) B[a]P和慢性压力应激同时暴露的小鼠氨基酸代谢和胆汁酸代谢的影响均为加和作用,TCA循环为拮抗作用.结果表明,不同剂量的B[a]P和CUMS暴露造成小鼠肝脏氨基酸代谢和胆汁酸代谢紊乱,差异的代谢物与两者单独暴露时明显不同,且代谢的变化与B[a]P暴露剂量密切相关.

关键词：苯并[a]芘慢性压力应激暴露组学小鼠肝脏代谢组学

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食醋中γ-氨基丁酸的检测及变化规律研究

食品安全质量检测学报 2024年第9期15卷 197-204页

作者：张芳耿思奕韩华凤刘嘉慧刘冠卉郑博强屠洁江苏科技大学粮食学院镇江212100 广西农业职业技术大学食品药品研究院南宁530007 江苏科技大学生物技术学院镇江212100

目的建立快速准确检测高酸度食醋中γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)含量的方法。方法建立高效液相色谱法检测食醋中GABA含量的方法并进行方法学验证,通过检测不同原料、酿造方法、发酵阶段、贮藏时间的32种食醋样品,分析GABA变... 详细信息

目的建立快速准确检测高酸度食醋中γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)含量的方法。方法建立高效液相色谱法检测食醋中GABA含量的方法并进行方法学验证,通过检测不同原料、酿造方法、发酵阶段、贮藏时间的32种食醋样品,分析GABA变化规律。结果该方法在0.01~1.00mg/m L范围内线性关系良好,R2为0.9992,精密度试验相对标准偏差小于2.0%,回收率在96.4%~103.0%之间,精密度和准确性均符合方法学要求。不同原料食醋的GABA含量差异显著(P<0.05),谷物醋含量最高;传统发酵工艺和菌种酿造的食醋GABA高于液体发酵、纯菌种发酵食醋(P<0.05);秋季醋GABA含量高于冬季醋(P<0.05);醋酸发酵阶段的GABA累积量高于酒精发酵(P<0.05),适当陈酿可提高产品中GABA含量;商品醋中GABA的衰减符合一级动力学反应;发芽糙米醋的GABA含量是未发芽糙米醋的2.29倍,是精米醋的4.73倍。结论所建立的检测方法GABA出峰时间为12min,分离度大于2,可快速、准确分析食醋中GABA。食醋中GABA含量与食醋原料、工艺、菌种、生产季节、贮藏时间等相关。以多种谷物或发芽谷物为原料,采用传统固态发酵工艺,秋季酿制,并适当延长陈酿时间有利于食醋中GABA的生成。

关键词： γ-氨基丁酸醋高效液相色谱法变化规律

Regulation of Nitric Oxide on the Aging Process of Wheat Leaves

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Acta Botanica Sinica 2003年第9期45卷 1055-1062页

作者：屠洁沈文飚徐朗莱南京农业大学生命科学学院南京210095

When the first fully expanded leaf of wheat ( Triticum aestivum L.) seedlings with two leaves were treated with different concentrations (0.05, 0.10, 0.20 and 0.50 mmol/L) of nitric oxide donor, sodium nitroprusside (SNP), the contents of hydrogen peroxide (H2O2) and malondialdehyde (MDA) were reduced by the lower concentrations (0.05, 0.10 and 0.20 mmol/L), but enhanced by the higher concentration of SNP (0.50 mmol/L). The protective effect of 0.10 mmol/L SNP was the most obvious. Furthermore, the treatment with 0.10 mmol/L SNP on the above seedlings until the fourth leaves were fully expanded attenuated the accumulation of H2O2, superoxide anion radical (O-2(-)) and MDA, also counteracted the degradation of chlorophyll and soluble proteins, especally Rubisco, both leading to the effective delay of aging process in wheat leaves. The effects of different SNP concentrations (0.05, 0.10, 0.20, 0.50, 1.00 and 5.00 mmol/L) also displayed a dual role in an aging experiment of chloroplasts in vitro, one of which, 0.2 mmol/L SNP treatment, protected the membrane structure and attenuated the degradation of Rubisco effectively. Based on the present results, it was inferred that lower concentrations of nitric oxide (NO) might play a role in delaying aging process in wheat leaves, i.e., might attribute to decrease the level of reactive oxygen species (ROS) and the alleviation of further oxidative damage caused by ROS.

关键词： nitric oxide (NO) wheat leaves aging reactive oxygen species

Therapeutic potential of extracellular ATP and P2 receptors in nervous system diseases

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Neuroscience Bulletin 2009年第1期25卷 27-32页

作者：屠洁王立平中国科学院深圳先进技术研究院神经工程研究中心深圳518067 香港大学医学院生理系

Extracellular adenosine 5’-triphosphate(ATP) is a key signaling molecule present in the central nervous system(CNS),and now is receiving greater attention due to its role as a messenger in the CNS during different physiological and pathological events. ATP is released into the extracellular space through vesicular exocytosis or from damaged and dying cells. Once in the extracellular environment,ATP binds to the specific receptors termed P2,which mediate ATP effects and are present broadly in both neurons an...

关键词： extracellular ATP P2 receptors nervous system diseases

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碘－淀粉比色法测定微量碘酸钾的含量

中国药科大学学报 1995年第1期26卷 27-29页

作者：武学亮屠洁深圳市制药厂

在一定酸度和适量淀粉试液存在下，微量碘酸钾与碘化钾试液反应显蓝色。在５９５ｎｍ处测定其吸光度，测得碘酸钾在０．２５～２．０μｇ／ｍｌ浓度范围内与吸光度呈线性关系（ｒ＝０．９９９９），摩尔吸光系数为１．０２×１０５。考... 详细信息

在一定酸度和适量淀粉试液存在下，微量碘酸钾与碘化钾试液反应显蓝色。在５９５ｎｍ处测定其吸光度，测得碘酸钾在０．２５～２．０μｇ／ｍｌ浓度范围内与吸光度呈线性关系（ｒ＝０．９９９９），摩尔吸光系数为１．０２×１０５。考察其显色条件，并进行了回收率试验，测定了碘酸钾片剂中微量碘酸钾的含量。

关键词：碘-淀粉比色法碘酸钾片微量碘酸钾

外源一氧化氮对小麦叶片过氧化氢代谢及老化过程的影响

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外源一氧化氮对小麦叶片过氧化氢代谢及老化过程的影响

作者：屠洁南京农业大学

学位级别：硕士

一氧化氮(nitric oxide，NO)是一种全新的植物生长调节物质，参与了植物的生长、发育、抗病、抗逆等生理过程，但是NO对植物叶片老化过程的调节目前还不是很清楚。本研究探查了外源NO供体硝普钠(sodium nitroprusside，SNP)对小麦(Triti... 详细信息

一氧化氮(nitric oxide，NO)是一种全新的植物生长调节物质，参与了植物的生长、发育、抗病、抗逆等生理过程，但是NO对植物叶片老化过程的调节目前还不是很清楚。本研究探查了外源NO供体硝普钠(sodium nitroprusside，SNP)对小麦(Triticum aestivum L．)叶片过氧化氢(HO)代谢的影响，并进一步分析了外源NO对小麦叶片老化过程的调节作用及其相关机理。结果表明，不同浓度的SNP(1 mmol／L和5 mmol／L)处理30min内，离体小麦叶片内HO含量均有一个显著上升的过程，同时过氧化物酶(POD)活力受到显著抑制，而过氧化氢酶(CAT)活力则轻微下降;处理30min到240min时，POD活力的抑制状态基本维持不变，而CAT活力开始恢复上升，HO含量也相应地开始下降。粗酶液的体外实验也表明，SNP对POD和CAT的抑制类型不同，前者可能是不可逆抑制，后者则可能是可逆抑制，暗示NO可能通过对POD和CAT的不同抑制作用来调节小麦叶片内源HO含量。不同浓度的SNP(0，0.05，0.1，0.2，0.5mmol／L)处理正常生长小麦叶片(二叶一心期时第二叶)，结果显示低浓度SNP(0.05，0.1，0.2mmol／L)可以明显降低HO和MDA的水平，其中0.1 mmol／L SNP的作用最为明显;而较高浓度SNP(0.5mmol／L)则起相反的作用。进一步采用0.1 mmol／L的SNP处理不同叶位小麦叶片，结果表明低浓度NO对不同老化阶段中叶片的HO和O累积都有缓解作用，并明显降低叶片叶绿素、蛋白质的降解以及膜脂过氧化水平，有效延缓了叶片的老化进程。完整叶绿体体外老化实验中也发现，不同浓度SNP(0，0.05，0.1，0.2，0.5，1，5 mmol／L)的作用同样表现双重性，其中0.2 mmol／L SNP对膜结构及Rubisco保护作用最明显。上述结果证实，低浓度外源NO可延缓小麦叶片的老化过程，这与其降低叶片活性氧(ROS)水平、缓解氧化损伤有关。

关键词：小麦叶片 NO H202 老化

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LPS引起的心血管功能障碍及相关机制研究

LPS引起的心血管功能障碍及相关机制研究

作者：屠洁浙江大学

学位级别：硕士

背景败血症及败血症休克都是临床上常见的急危重症，死亡率高，至今临床上仍缺乏疗效高、副作用小的方法。细菌感染是败血症休克最常见的病因，细菌的产物，如内毒素，外毒素和细菌外壁成分—脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)可直... 详细信息

背景败血症及败血症休克都是临床上常见的急危重症，死亡率高，至今临床上仍缺乏疗效高、副作用小的方法。细菌感染是败血症休克最常见的病因，细菌的产物，如内毒素，外毒素和细菌外壁成分—脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)可直接或间接地刺激单核细胞、多形核中性粒白细胞或内皮细胞等靶细胞启动炎症进程，产生促炎细胞因子(proinflammtory cytokine)。败血症休克一般伴有严重的心血管功能障碍，并最终发展成为全身低血压及心肌收缩抑制的不可逆性。给实验动物注射纯化的LPS来模拟败血症休克是近年来国际上比较通用而有效的手段，LPS进入体内后能刺激多种促炎细胞因子及血管活性物质的过量表达，影响心血管功能。为了阐明LPS心血管效应的机理，过去有很多研究往往集中在一级介质——促炎细胞因子上，但是大量实验和临床试验表明，抑制促炎细胞因子的表达并不能改善LPS引发的心血管功能的抑制效应。因此，现在越来越多的研究者开始关注LPS及促炎细胞因子刺激产生的二级介质。一氧化氮(nitric oxide，NO)和内皮素-1(endothelin-1，ET-1)是两个重要的血管活性物质，在生理条件下，两者相互拮抗共同调控心血管功能。很多证据表明，LPS刺激浙江大学硕士学位论文引起这两种物质的过量表达，从而使两者间的平衡打破，对心血管功能紊乱产生重要影响。对于NO和ET-1在其中发挥的具体作用至今没有得到统一认识。目的腹腔注射LPs建立败血症休克模型，应用离体血管环、Langendorff离体灌流心脏及单个心室肌细胞模型来研究LPS对大鼠主动脉环反应性、冠状动脉阻力、心肌收缩力、细胞内钙瞬变及线粒体功能的影响，初步探讨LPS引发的心血管作用及相关机制，重点在于阐明NO、ET-1在其中发挥的具体作用。方法 1.败血症休克动物模型的建立雄性sD大鼠腹腔注射LPs 10mg/kg，4小时后处死。 2.血清亚硝酸盐/硝酸盐(NOZ祝03一)测定制备血清样本，采用氯化钒还原法检测血清中N仇一加仇一含量以反应NO含量的改变。 3.血浆ET-1含量的放射免疫分析制备血浆样本，采用‘251一ET-1均相竞争法测定血浆中的ET-1含量。 4.离体血管环灌流实验采用organ bath离体血管环灌流装置，主动脉环稳定于改良K-H液中，通过PowerLab 信号采集处理系统(AD Ins仃uments，澳大利亚)来记录血管收缩反应曲线。浙江大学硕士学位论文 5.离体心脏冠脉阻力、左室功能评价采用Langendorff恒流灌注技术，通过MedLab信号采集处理系统(南京美易)来记录心肌收缩功能指标及冠脉灌注压(crype而sion Pressure，CPP)的改变。根据cPP 的改变来反应冠脉收缩力的改变 6.心室肌细胞酶解分离 I型胶原酶酶解分离大鼠心室肌细胞。 7.咖啡因诱导的心肌细胞内钙瞬态分析用细胞内双波长钙荧光系统(***.，德国)检测细胞内游离钙离子浓度，以Fura一2/AM 为钙指示剂。 8.心室肌细胞肌浆网c扩气ATpase活性检测制备离体大鼠心室肌细胞肌浆网，采用无机磷比色法测定ca2+确Tpase活性。肌浆网蛋白含量的测定采用考马斯亮兰蛋白测定法。 9.心肌细胞线粒体的提取和线粒体丙二醛(MDA)含量测定分离心肌线粒体，采用硫代巴比妥酸法，根据试剂盒说明书操作，测定样本中的MDA 含量。结果第一部分LPS对大鼠主动脉和冠脉反应性的影响及相关机制 1 .LPS处理组血清NOZ加03一水平与对照相比增加了近20倍。 ***处理的大鼠血浆ET-1含量显著增加(P<0.05)。浙江大学硕士学位论文 3 .LPS对大鼠离体主动脉环对苯肾上腺素(phe咧ePhrine，PE)收缩反应的影响 (1)LPS处理组主动脉环对PE的浓度一收缩反应曲线明显低于对照组;(2) iNOS特异性抑制剂AMG孵育LPs处理过的主动脉环1小时，对主动脉低反应的抑制作用呈浓度依赖性，roo林M和lmM的AMG能完全取消LPS引起的主动脉环的低反应性，10“M 的AMG则没有这个效果。 ***对离体心脏冠脉收缩力的影响 (1) LPs处理的大鼠心脏其cPP显著升高;(2)用AMG(l0omg/kg，i.P.)单独预处理并不能缓解LPs引起的CPP的升高;(3)用ET^特异性阻断剂BQ一123(lm叭g，i:P)预处理后，LPS诱导的CPP升高效应被减弱;(4) BQ一123和AMG联合预处理后的效果与单独应用BQ一123预处理后的结果相似。第二部分LPS对大鼠心肌收缩力的作用及相关机制 1 .LPS对左室心肌收缩功能的影响 (1) LPS显著降低了左室发展压和心率的乘积

关键词：脂多糖一氧化氮内皮素-1 心脏动脉

ET-1和NO对脂多糖引起的大鼠心肌收缩抑制作用的影响

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中国应用生理学杂志 2009年第2期25卷 228-232页

作者：姚慧屠洁单绮娴夏强杭州师范大学基础医学部浙江杭州310036 浙江大学医学院生理系浙江杭州310058

目的:观察内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)在脂多糖(LPS)引起的大鼠心肌收缩抑制中的作用及其可能机制。方法:大鼠腹腔注射LPS(10 ***-1)建立败血症休克模型,应用Langendorff离体灌流心脏及单个心室肌细胞观察LPS对大鼠心肌动力学、心肌... 详细信息

目的:观察内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)在脂多糖(LPS)引起的大鼠心肌收缩抑制中的作用及其可能机制。方法:大鼠腹腔注射LPS(10 ***-1)建立败血症休克模型,应用Langendorff离体灌流心脏及单个心室肌细胞观察LPS对大鼠心肌动力学、心肌细胞内钙稳态的影响及ET-1和NO在其中的作用。结果:①LPS处理4 h可使大鼠血清中NO代谢产物NO2-/NO3-水平和ET-1含量显著增加;②在离体Langendorff灌流心脏上,LPS组心脏收缩功能受到抑制,心率与发展压的乘积(RPP)显著降低,左心室舒张末压(LVEDP)升高。预先用iNOS特异性抑制剂aminoguanidine(AMG)(100 ***-1i p)或ETA受体阻断剂BQ-123(***-1i p)处理15 min,均可部分逆转LPS引起的心脏收缩功能抑制;两者联合预处理15 min则基本消除LPS引起的心脏收缩功能抑制;③LPS处理4 h后,咖啡因诱导的单个心室肌细胞内钙瞬变幅度较对照组显著降低(P<0.01),同时LPS显著抑制心室肌细胞肌浆网Ca2+-AT-Pase活性(P<0.01);BQ-123或AMG预处理15 min可部分逆转LPS对心室肌细胞内钙瞬变的抑制效应,但均不能逆转LPS对肌浆网Ca2+-ATPase活性的抑制作用。结论:ET-1和NO均参与LPS引起的大鼠心肌收缩抑制作用及细胞内钙储备降低,但两者对LPS所致肌浆网Ca2+-ATPase活性降低无影响。

关键词：内皮素-1 一氧化氮脂多糖心肌抑制

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药用抗氧剂葡萄糖氧化酶

药学进展 1993年第1期17卷 31-32页

作者： ThomasF.Berg 屠洁

本文研究了5种抗氧剂对异丙基肾上腺素制剂被氧化速率的影响。该5种抗氧剂是;葡萄糖氧化酶、氮气、亚硫酸氢钠、乙酰半胱氨酸和硫脲。引言有许多药物水溶液易被氧化降解,而可应用的抗氧剂数目很有限,例如:亚硫酸盐是最常用的抗氧剂,在... 详细信息

本文研究了5种抗氧剂对异丙基肾上腺素制剂被氧化速率的影响。该5种抗氧剂是;葡萄糖氧化酶、氮气、亚硫酸氢钠、乙酰半胱氨酸和硫脲。引言有许多药物水溶液易被氧化降解,而可应用的抗氧剂数目很有限,例如:亚硫酸盐是最常用的抗氧剂,在水溶液中,在应用的pH范围内是稳定的。

关键词：抗氧剂葡萄糖氧化酶