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GM3掺入肌质网膜及其对Ca^(2+)-ATP酶的正向调节

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生物化学与生物物理进展 1997年第3期24卷 277-280页

作者：王丽华杨小毅屠亚平崔肇春大连医科大学生物化学教研室大连116027 中国科学院生物物理研究所

用微量提取和高效薄板层析方法研究了外源性神经节苷脂GM3掺入兔肌质网膜的动力学过程 .将掺入量分别相对于掺入浓度、时间和温度作图 ,显示掺入曲线均呈抛物线形式 .当掺入体系中GM3浓度为 8μmol/L、掺入时间为 90min、掺入温度为 35... 详细信息

用微量提取和高效薄板层析方法研究了外源性神经节苷脂GM3掺入兔肌质网膜的动力学过程 .将掺入量分别相对于掺入浓度、时间和温度作图 ,显示掺入曲线均呈抛物线形式 .当掺入体系中GM3浓度为 8μmol/L、掺入时间为 90min、掺入温度为 35℃时 ,其掺入量达到最大值 ,约为掺入体系中GM3量的 50 % .上述结果表明外源性GM3对肌质网膜的作用不仅仅是一种简单的水相反应 ,而是一个依赖于掺入浓度、时间和温度 ,并具有一定的饱和度的掺入到肌质网膜脂双层中的动力学过程 .进一步的实验表明外源性GM 3的掺入能明显增加肌质网Ca2 + ATP酶的活力 .这为从分子水平上研究糖脂对细胞内膜系统的结构与功能的调节作用提供了重要的基础 .

关键词：神经节苷脂肌质网膜钙腺苷三磷酸酶调节

跨膜Ca^(2+)梯度对重组腺苷酸环化酶活力及构象的影响

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中国科学（B辑） 1991年第6期 621-627页

作者：屠亚平杨福愉中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室北京100080

本文将分离并部分纯化的腺苷酸环化酶催化亚基(ACc)重组于具有或不具有跨膜Ca^(2+)梯度的大豆磷脂脂质体上.酶活性的测试结果表明,酶活性中心一侧Ca^(2+)浓度低于另一侧(500倍)的脂酶体(类似生理条件)酶活性最高;在Ca^(2+)浓度梯度相反... 详细信息

本文将分离并部分纯化的腺苷酸环化酶催化亚基(ACc)重组于具有或不具有跨膜Ca^(2+)梯度的大豆磷脂脂质体上.酶活性的测试结果表明,酶活性中心一侧Ca^(2+)浓度低于另一侧(500倍)的脂酶体(类似生理条件)酶活性最高;在Ca^(2+)浓度梯度相反的情况下酶活性最低.外加Ca^(2+)载体A23187消除脂酶体两侧的Ca^(2+)梯度可导致前者酶活力降低而后者酶活力升高.不具有Ca^(2+)浓度梯度的脂酶体酶活性介于上述两种脂酶体之间. 蛋白内源荧光及KI对其淬灭效率的测试结果均反映上述几种脂酶体中ACc构象的差异.

关键词：跨膜Ca^2+梯度重组腺苷酸环化酶

正向的跨膜Ca^(2+)浓度梯差对腺苷酸环化酶构象与活性的重要性

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科学通报 1991年第6期36卷 478-479页

作者：杨福愉屠亚平中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室北京100080

大多数细胞具有明显的内外Ca^(2+)浓度梯差,一般细胞内Ca^(2+)浓度为10^(-7)—10^(-6)mol/L,细胞外则为10^(-3)mol/L.换言之,细胞内、外Ca^(2+)浓度梯差约为1000—10000倍.通过调控机理细胞内Ca^(2+)的浓度经常保持在一个恒定的低水平,... 详细信息

大多数细胞具有明显的内外Ca^(2+)浓度梯差,一般细胞内Ca^(2+)浓度为10^(-7)—10^(-6)mol/L,细胞外则为10^(-3)mol/L.换言之,细胞内、外Ca^(2+)浓度梯差约为1000—10000倍.通过调控机理细胞内Ca^(2+)的浓度经常保持在一个恒定的低水平,否则会引起细胞功能的一系列异常变化.但这种跨膜Ca^(2+)

关键词：腺苷酸环化酶 Ca2+ 浓度梯差活性

跨膜Ca^(2+)梯度通过磷脂酰胆碱调节肌质网Ca^(2+)-ATP酶

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中国科学（B辑） 1994年第11期24卷 1171-1177页

作者：屠亚平徐红杨福愉中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室北京100101

将纯化的肌质网Ca^(2+)-ATP酶重组在具有或不具有跨膜Ca^(2+)梯度的脂质体上,研究了磷脂(特别是磷脂酰胆碱)在跨膜Ca^(2+)梯度对肌质网Ca^(2+)-ATP酶功能调节中的作用。结果表明:(1)高浓度的(Ca^(2+)对与不同磷脂保温的去脂Ca^(2+)-ATP... 详细信息

将纯化的肌质网Ca^(2+)-ATP酶重组在具有或不具有跨膜Ca^(2+)梯度的脂质体上,研究了磷脂(特别是磷脂酰胆碱)在跨膜Ca^(2+)梯度对肌质网Ca^(2+)-ATP酶功能调节中的作用。结果表明:(1)高浓度的(Ca^(2+)对与不同磷脂保温的去脂Ca^(2+)-ATP酶都产生抑制,但对与PC保温的Ca^(2+)-ATP酶抑制最大。(2)当存在一个正向跨膜Ca^(2+)梯度时(酶活性中心一侧Ca^(2+)浓度较低,类似生理条件),它只对与中性磷脂PC:PE重组的Ca^(2+)-ATP酶产生抑制,且PC:PE(摩尔比)为1:1时,抑制程度最大。如以酸性磷脂PS或PG替代PC则均无明显抑制。(3)比较不同脂肪酸侧链的PC的作用表明,当DOPC或DPPC存在时均有明显抑制作用,而DMPC则几乎不表现抑制作用。(4)若Ca^(2+)梯度逆转,则无论是与酸性磷脂或中性磷脂重组的肌质网Ca^(2+)-ATP酶都会被抑制。

关键词：磷脂酰胆碱跨膜肌质网 ATP酶钙离子

竹红菌乙素对肌质网Ca^(2+)-ATP酶蛋白色氨酸荧光猝灭研究

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科学通报 1995年第1期40卷 76-79页

作者：乐加昌屠亚平庞素珍中国科学院生物物理研究所北京100101

肌质网Ca^(2+)-ATP酶是一种重要的膜蛋白酶,它在肌细胞的收缩舒张功能中起重要作用,因而其动力学行为被广泛地研究,但是有关结构与功能之间关系的直接实验数据仍然不足.为了从分子水平上阐明Ca^(2+)-ATP酶催化原理,1993年Ferrira用荧光... 详细信息

肌质网Ca^(2+)-ATP酶是一种重要的膜蛋白酶,它在肌细胞的收缩舒张功能中起重要作用,因而其动力学行为被广泛地研究,但是有关结构与功能之间关系的直接实验数据仍然不足.为了从分子水平上阐明Ca^(2+)-ATP酶催化原理,1993年Ferrira用荧光猝灭方法首先观察了肌质网Ca^(2+)-ATP酶在加入Ca^(2+)前后分子构象的变化.由于作者使用的猝灭剂是分子氧,除了在测定工作中使用不方便之外,灵敏度也不够高.为此本文用竹红菌乙素作为肌质网Ca^(2+)-ATP酶荧光猝灭剂,分别测定了该酶在有钙或无钙的条件下荧光猝灭的情况,结果证明竹红菌乙素可以在稳态和瞬态的条件下观察到体系中有钙或无钙时的荧光猝灭常数变化的情况(即不同的K_q值);进而说明了竹红菌乙素作为肌质网蛋白荧光猝灭剂可以得到比氧更多的信息和许多其他优点.

关键词：竹红菌乙素荧光猝灭膜蛋白酶色氨酸

红细胞内翻外囊泡带3蛋白活性测试方法的研究

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生物化学与生物物理进展 1995年第2期22卷 154-158页

作者：冯昶关志英屠亚平中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室

从人血中提取红细胞膜，用注射器加压推打的方法首次获得了包含８０ｍｍｏｌ／Ｌ吡啶二羧酸（ＤＰＡ）的封闭完好的内翻外囊泡（ＩＯＶｓ）。离心除去囊泡外ＤＰＡ，即可按Ｎｅｗｔｏｎ法测其阴离子转运活性。此法在红细胞膜内翻外囊泡... 详细信息

从人血中提取红细胞膜，用注射器加压推打的方法首次获得了包含８０ｍｍｏｌ／Ｌ吡啶二羧酸（ＤＰＡ）的封闭完好的内翻外囊泡（ＩＯＶｓ）。离心除去囊泡外ＤＰＡ，即可按Ｎｅｗｔｏｎ法测其阴离子转运活性。此法在红细胞膜内翻外囊泡体系上成功地建立了带３蛋白（Ｂａｎｄ３）测活方法，具有简便迅速，重复性好等优点。

关键词：红细胞膜带3蛋白内翻外囊泡红细胞

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人红细胞带3蛋白结构域间的通讯

科学通报 1995年第19期40卷 1821-1822页

作者：杨福愉屠亚平冯昶中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室北京100101

带3蛋白(Band 3)是人红细胞膜上的主要蛋白质,具有阴离子转运的功能.它是目前被研究得最广泛的膜蛋白之一.从结构上看,Band 3可分成两个结构域.其中膜结构域负责其阴离子转运功能,而细胞质结构域则与细胞膜骨架蛋白(如锚蛋白ankyrin等)... 详细信息

带3蛋白(Band 3)是人红细胞膜上的主要蛋白质,具有阴离子转运的功能.它是目前被研究得最广泛的膜蛋白之一.从结构上看,Band 3可分成两个结构域.其中膜结构域负责其阴离子转运功能,而细胞质结构域则与细胞膜骨架蛋白(如锚蛋白ankyrin等)相联从而起到稳定膜骨架的作用.尽管细胞质结构域对于Band 3膜结构域的阴离子转运功能并不是必需的,然而最近有些证据表明这两个结构域之间可能存在一定的联系,但迄今为止人红细胞Band 3两个结构域之间通讯的分子机制和结构基础仍不清楚.

关键词：人红细胞带3蛋白蛋白结构分子机制红细胞

低硒病区粮喂养的大鼠心肌线粒体游离Ca^(2+)的变化与线粒体功能损伤的相关性

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科学通报 1992年第8期37卷 742-745页

作者：屠亚平杨剑胡勇杨福愉中国科学院生物大分子国家重点实验室生物物理研究所北京100080

克山病是一种病因至今不明的地方性心肌病,杨福愉等经多年的研究认为克山病是一种心肌线粒体病。由于线粒体不仅是细胞的能量供应中心,同时它对细胞质游离Ca^(2+)有“微调节作用”,而后者又是细胞内一种信使。特别是近年来人们越来越注... 详细信息

克山病是一种病因至今不明的地方性心肌病,杨福愉等经多年的研究认为克山病是一种心肌线粒体病。由于线粒体不仅是细胞的能量供应中心,同时它对细胞质游离Ca^(2+)有“微调节作用”,而后者又是细胞内一种信使。特别是近年来人们越来越注意到线粒体内游离Ca^(2+)的调节与线粒体自身功能如氧化磷酸化的关系。

关键词：克山病硒线粒体功能心肌钙离子

Ca^(2+)对人红细胞膜葡萄糖载体活性的抑制

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科学通报 1997年第8期42卷 879-882页

作者：谢文胜屠亚平杨福愉中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室北京100101

人红细胞通过其膜上的葡萄糖载体蛋白来转运葡萄糖,此载体只转运D型葡萄糖,是一被动转运过程.由于人红细胞膜上葡萄糖载体含量较多,活性也较高,因此一般都将它作为糖转运模型来研究.但迄今为止,对其结构、作用机制及活性调节等都不甚明... 详细信息

人红细胞通过其膜上的葡萄糖载体蛋白来转运葡萄糖,此载体只转运D型葡萄糖,是一被动转运过程.由于人红细胞膜上葡萄糖载体含量较多,活性也较高,因此一般都将它作为糖转运模型来研究.但迄今为止,对其结构、作用机制及活性调节等都不甚明了.尤其对细胞内二价阳离子,如钙离子等,对它的调节更少见报道.对正常的红细胞,其质膜内外存在着一个大约1000倍的钙离子梯差,如果细胞内钙离子浓度升高,使此梯差变小甚至消失,就会影响膜蛋白的活性,导致一些异常的生理反应.我们曾报道,胞内钙离子浓度升高会明显地抑制完整红细胞葡萄糖载体活性,其半抑制浓度约为250μmol/L。

关键词：葡萄糖载体转运活性钙离子红细胞膜