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作者：宿春虎扬州大学

学位级别：硕士

H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)自上个世纪90年代以来已经广泛在我国和世界各地流行,不仅仅给养禽业造成了巨大的经济损失,而且给公共卫生安全造成的隐患不可估量,对人类的健康也构成了巨大的威胁。在我国,独特的地理... 详细信息

H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)自上个世纪90年代以来已经广泛在我国和世界各地流行,不仅仅给养禽业造成了巨大的经济损失,而且给公共卫生安全造成的隐患不可估量,对人类的健康也构成了巨大的威胁。在我国,独特的地理环境及养殖模式为此病的发生、传播提供了有利条件。而免疫压力及活禽市场的存在又为H9N2亚型禽流感病毒的重组和变异提供了必要条件。本研究对2011-2013年问华东地区家禽的临床病料和活禽市场棉拭样品进行病毒的分离鉴定,对分离到的H9N2亚型AIV进行全基因组序列测定和遗传进化分析;对分离到的两株H10亚型AIV H10N8和H10N9进行了生物学特性和遗传进化分析;评价了我国华东地区当前流行株中自制候选疫苗和目前普遍采用的F98疫苗的疫苗保护效力。木研究为禽流感的防控提供了流行病学资料及疫苗选择的实验依据。1.2011-2013年华东地区禽流感病毒的流行病学调查以及分离鉴定2011-2013年在江苏省及附近地区采集禽类的临床病料340份,在华东地区活禽市场采集棉拭样品3100份,将病料和棉拭样品处理后接种鸡胚分离病毒,以血凝和血凝抑制试验结合RT-PCR鉴定病毒,共分离31株H5亚型禽流感病毒、36株H9亚型禽流感病毒和31株新城疫病毒(NDV)。其中,棉拭中H5亚型AIV、H9亚型AIV和NDV的分离率分别为0.42%、0.52%和0.45%,病料中三种病毒的分离率分别为5.29%、5.88%和5.00%。活禽市棉拭样品病毒分离结果显示,可分离到H3、H4、H5、H6、H7、H9、H10和H11等8种亚型禽流感病毒,鸭和鸡的样品中各分离6种亚型禽流感病毒,而鹅的样品中分离到3种亚型禽流感病毒。鸡样品中禽流感病毒血清型的多样性为病毒的变异提供了有利条件。2.36株H9N2亚型禽流感病毒全基因组的遗传进化分析对36株H9N2亚型AIV血凝素(HA)基因核苷酸序列的遗传进化分析表明, Y280亚系(Clade h9.***.2.4)在2011年后成为华东地区的主要流行株(34株),F98亚系(Cladeh9.***.2.1)和G1亚系(Clade h9.4.1)仅各有1株。值得注意的是这些不同Clade之间的病毒有较大程度的变异,相同Clade之间的病毒也在出现较大的变异,如Clade h9.***.2.4(Y280亚系)的毒株已进化出更多的小分支,且各小分支与Y280株同源率也只有90.9%-94.7%。分离株HA基因的228位氨基酸均为甘氨酸(Gly,G),226位类F98株和类G1株为嗜禽源细胞的谷氨酰胺(Gln,Q)其余均为嗜哺乳动物细胞的亮氨酸(Leu,L)。对神经氨酸酶(NA)基因的分析表明,所有的NA基因均属于欧亚种系中的F98亚系,且在茎部缺失了63-65位3个氨基酸;而对其内部基因的分析中表明,目前华东地区内部基因的整体变异情况不大。但是Qa/WX3/13株中PA基因、NP基因、NS基因明显不同于其他分离株,分别属于Y439亚系、G1亚系、G1亚系。耐药性的分析表明,对达菲(奥赛他韦)和对扎那米韦产生拮抗作用的位点没有明显的突变,但是除了Qa/WX3/13株外其余分离株均对金刚烷胺产生了耐药性。3.两株H10亚型禽流感病毒的起源分析和生物学特性测定对从鸡以及野鸡体内分别分离到H10N9以及H10N8亚型病毒进行生物学特性测定和遗传进化分析。IVPI结果显示两株H10亚型毒株均为低致病型禽流感病毒。全基因序列测定与遗传进化分析结果显示,该两株分离株所有基因片段均属于欧亚系。H10N9毒株中NA基因与2013年流行的H7N9禽流感高度同源,提示其极有可能是此次暴发的NA供体。H10N8株与2013年暴发的感染人的H10N8江西株JX346同源性较差,该分离株可能是候鸟迁徙路线上的基因重组型病毒。4.H9N2候选疫苗株的筛选以及免疫效果评价在H9N2病毒遗传进化分析的基础上进一步进行抗原性分析和生物学特性分析,筛选出了2株分别位于不同遗传进化分支上的2株疫苗候选株Ck/yz4/12和Dk/Yc2/13进行免疫,并以F98疫苗株作为对照。两次免疫后14天以106EID50剂量的亲木株滴鼻点眼攻毒,评介疫苗的免疫保护效力。病毒排毒显示Ck/yz4/12株灭活疫苗免疫鸡可以对同源毒株和异源毒株的攻击提供良好的免疫保护,可作为H9N2亚型禽流感灭活疫苗的候选株。

关键词：禽流感病毒流行病学调查 H9N2 遗传进化分析生物学特性分析 H10N9 候选疫苗株

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扬州市近3年新甲型H1N1流感病毒HA基因分析

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2013年第1期34卷 36-40页

作者：肖越胜宿春虎黄瑶张军彭大新扬州市医学检验中心江苏扬州225001 扬州市疾病预防控制中心江苏扬州225001 扬州大学兽医学院江苏扬州225009

采用Real time PCR(RT-PCR)对患者鼻咽拭子样品进行检测,筛选新甲型H1N1流感病毒。将阳性样品接种MDCK细胞进行病毒分离,通过RT-PCR扩增病毒HA基因并进行测序分析,分析扬州市2009～2011年新甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因的遗传进化特... 详细信息

采用Real time PCR(RT-PCR)对患者鼻咽拭子样品进行检测,筛选新甲型H1N1流感病毒。将阳性样品接种MDCK细胞进行病毒分离,通过RT-PCR扩增病毒HA基因并进行测序分析,分析扬州市2009～2011年新甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因的遗传进化特征。结果表明:分离出9株新甲型H1N1流感病毒,其HA基因核苷酸及氨基酸同源性分别为98.1%～99.8%和96.6%～99.8%;与疫苗株A/California/07/2009相比,核苷酸及氨基酸的同源性分别为98.4%～99.5%和97.0%～99.3%,其中2011年3株病毒在抗原位点上发生了点突变。遗传进化分析显示9株病毒形成3个明显的分支。证明新甲型H1N1流感病毒已发生了一定抗原漂移。

关键词：新甲型流感病毒 H1N1 血凝素遗传进化分析

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H_9N_2亚型禽流感的流行现状与防控措施

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家禽科学 2017年第12期 29-31页

作者：宿春虎王慧程小果山东滨州沃华生物工程有限公司山东滨州256600 山东省动物病原微生物工程实验室山东滨州256600

禽流感（Avian Influenza,AI）又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟,是由正粘病毒科、流感病毒属A型流感病毒引起的一种急性、败血性传染病,几乎所有野生及家养禽类均可感染。根据禽流感致病性的不同,

关键词：禽流感病毒 H9N2 正粘病毒科欧洲鸡瘟真性鸡瘟败血性高致病性禽流感致病性 Influenza 毒株

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鸡肌胃糜烂症的病因及综合防治

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家禽科学 2016年第9期 34-36页

作者：程小果王慧陈申秒宿春虎程宁山东滨州沃华生物工程有限公司山东滨州256606 山东畜牧兽医职业学院山东潍坊261061

近年来,鸡肌胃糜烂症(gizzard erosion,GE)已成为危害养鸡业最为严重的常见病症之一,多发生于日龄较大的肉仔鸡或5月龄以下的蛋、种鸡,临床上以生长发育受阻、肌胃角质层溃疡糜烂、内容物呈黑色及黑褐色稀粪或软粪为特征,因呕吐物为黑... 详细信息

近年来,鸡肌胃糜烂症(gizzard erosion,GE)已成为危害养鸡业最为严重的常见病症之一,多发生于日龄较大的肉仔鸡或5月龄以下的蛋、种鸡,临床上以生长发育受阻、肌胃角质层溃疡糜烂、内容物呈黑色及黑褐色稀粪或软粪为特征,因呕吐物为黑褐色液体,故GE又称为'黑色呕吐病(black vomit)'~[1]。虽然GE病死率较低。

关键词：肌胃糜烂素禽腺病毒鸡群

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鹅源坦布苏病毒SHYG株的分离与鉴定

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中国农业科学 2013年第5期46卷 1044-1053页

作者：潘金金邹晓艳李鑫宿春虎柴茂姜逸胡艳芬赵国王彦红石火英陈素娟彭大新扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室扬州大学兽医学院

【目的】分离鹅源坦布苏病毒,并研究其对雏鹅的致病性。【方法】用RT-PCR方法对江苏省3个鹅场送检的产蛋期病鹅样品进行检测;对坦布苏病毒核酸阳性的样品进行病毒分离,测定分离病毒的生物学特性和E蛋白基因序列。【结果】这些样品中坦... 详细信息

【目的】分离鹅源坦布苏病毒,并研究其对雏鹅的致病性。【方法】用RT-PCR方法对江苏省3个鹅场送检的产蛋期病鹅样品进行检测;对坦布苏病毒核酸阳性的样品进行病毒分离,测定分离病毒的生物学特性和E蛋白基因序列。【结果】这些样品中坦布苏病毒呈阳性;从病料中分离鉴定一株病毒,命名为SHYG。E蛋白基因序列同源性比对显示其与中国鸭源坦布苏病毒同源性达到99.3%;生物学特性研究表明该病毒可致Vero细胞病变,对小鼠无致病性,接种2周龄雏鹅出现精神沉郁、腹泻、神经症状甚至死亡;组织学变化可见肝脏淤血、胆小管扩张、脂肪变性;肺淤血、炎性渗出及含铁血黄素沉着,脾脏网状内皮细胞空泡化,肾出血,脑充血、胶质细胞增生。【结论】坦布苏病毒SHYG株对雏鹅有较强的致病性。

关键词：鹅坦布苏病毒致病性

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三株H9亚型禽流感病毒HA基因的遗传进化分析

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中国家禽 2013年第12期35卷 17-20页

作者：高如一缪晓斌宿春虎陈素娟王晓泉刘晓文彭大新扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省东台市畜牧兽医站江苏东台224220

2012年初从东台地区分离到3株H9亚型禽流感病毒,通过RT-PCR扩增出其HA基因,并对其进行测序及遗传进化分析。结果显示3株病毒的HA基因开放阅读框全长1683bp,共编码560个氨基酸,其核苷酸和氨基酸的同源性分别为95.8%～97.8%、97.7%～98.9%... 详细信息

2012年初从东台地区分离到3株H9亚型禽流感病毒,通过RT-PCR扩增出其HA基因,并对其进行测序及遗传进化分析。结果显示3株病毒的HA基因开放阅读框全长1683bp,共编码560个氨基酸,其核苷酸和氨基酸的同源性分别为95.8%～97.8%、97.7%～98.9%,与A/chicken/F/98的同源性分别为90.9%～91.4%、93.2%～93.9%;其裂解位点均为PSRSSR↓GLF,符合低致病力禽流感毒株的特征,推导的氨基酸序列含8个相同的潜在糖基化位点,A/chicken/DT/1/2012比其他2株H9亚型AIV多了一个267NCT的糖基化位点;受体结合位点的226位为L,具有α-2,6受体结合的特征。遗传进化分析显示3株分离株属欧亚种系,与A/Duck/Hong Kong/Y280/97代表株的亲源关系较近。

关键词： H9 禽流感病毒血凝素基因遗传进化分析

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鸡心包积水综合征疫苗研究进展

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动物医学进展 2016年第11期37卷 97-101页

作者：程小果王慧程宁陈申秒朱杰宿春虎郭建友张小荣吴艳涛山东滨州沃华生物工程有限公司山东滨州256606 山东畜牧兽医专科学校山东潍坊261061 扬州大学兽医学院江苏扬州225009

心包积水综合征是由I亚群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)引起的一种新型鸡传染病。本病发病急,传播速度快,造成雏鸡的高死亡率,给养鸡业造成严重的经济损失。该病于1987年在巴基斯坦靠近卡拉奇的安卡拉首先被报道,我国最早于2013年有发病报道,... 详细信息

心包积水综合征是由I亚群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)引起的一种新型鸡传染病。本病发病急,传播速度快,造成雏鸡的高死亡率,给养鸡业造成严重的经济损失。该病于1987年在巴基斯坦靠近卡拉奇的安卡拉首先被报道,我国最早于2013年有发病报道,2014年后在河南、山东、江苏等地流行。针对本病目前无特效疗法,疫苗免疫是防控本病的较好方法。在巴基斯坦等心包积水综合征早先流行比较严重的国家和地区,研制的自家疫苗对预防本病有一定效果,但是也存在保护效果不稳定、继发感染等风险;全病毒灭活疫苗安全性高,稳定性好,但成本较高。此外,活疫苗也展现出较好的防控效果,但存在毒力返强等问题,重组亚单位疫苗则因其安全、高效在未来具有良好的开发和应用前景。论文就鸡心包积水综合征疫苗的研究进展加以总结,以期为更好的防控本病提供参考。

关键词：心包积水综合征禽腺病毒C种血清4型安卡拉病疫苗

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H9N2亚型禽流感的流行动态与综合防控

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北方牧业 2017年第21期 26-26页

作者：宿春虎程小果山东滨州沃华生物工程有限公司山东省动物病原微生物工程实验室

禽流感（Avian Influenza．AI）又称真性鸡瘟，是由正粘病毒科、流感病毒属A型流感病毒引起的一种急性、败血性传染病．几乎所有野生及家养禽类均可感染。可分为高致病性禽流感（HPAI）和低致病性禽流感（LPAI）两大类。H9N2亚型禽流感... 详细信息

禽流感（Avian Influenza．AI）又称真性鸡瘟，是由正粘病毒科、流感病毒属A型流感病毒引起的一种急性、败血性传染病．几乎所有野生及家养禽类均可感染。可分为高致病性禽流感（HPAI）和低致病性禽流感（LPAI）两大类。H9N2亚型禽流感属于低致病性禽流感，但对养禽业的危害却很大，是仅次于H5和H7亚型禽流感的又一重要传染病。

关键词：低致病性禽流感 H9N2亚型综合防控流行动态 A型流感病毒败血性传染病高致病性禽流感正粘病毒科

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江苏部分地区猪圆环病毒2型的分子流行病学检测

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中国动物检疫 2014年第2期31卷 62-66页

作者：管萌宿春虎许晨旭刘星杨林娄亚坤焦库华陈素娟彭大新刘秀梵扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病重点开放实验室禽类预防医学教育部重点实验实验室江苏扬州225009

根据猪圆环病毒2型(PCV2)基因序列,设计1对特异性PCV2的鉴定引物,利用PCR方法对65份疑似PCV2感染的病料进行检测。PCR检测为阳性的病料经处理后,接种无PCV污染的Dulac细胞进行间接免疫荧光检测。对各分离毒株的全基因组进行PCR扩增、测... 详细信息

根据猪圆环病毒2型(PCV2)基因序列,设计1对特异性PCV2的鉴定引物,利用PCR方法对65份疑似PCV2感染的病料进行检测。PCR检测为阳性的病料经处理后,接种无PCV污染的Dulac细胞进行间接免疫荧光检测。对各分离毒株的全基因组进行PCR扩增、测序和基因型分析。结果表明:共分离鉴定21株PCV2,均属2b基因型,其中有16株为1C群,5株为1A/1B群。研究显示PCV2b 1C群已在江苏成为流行毒株。

关键词：猪圆环病毒2型分离鉴定基因型 porcine circovirus type 2

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带衬及非带衬MBR膜污染物识别及膜污染差异解析

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中国给水排水 2024年

作者：孙鹏虎春生焦茹媛张伟军宁夏环保集团有限责任公司宁夏厚德环保科技有限公司中国科学院生态环境研究中心工业废水无害化与资源化国家工程研究中心

带衬膜和非带衬膜作为膜生物反应器（MBR）中常用的两种膜类型，由于在结构和性能上的不同，其膜污染特征也存在一定的差异。针对应用于黄河上游典型污水厂MBR工艺的带衬膜和非带衬膜，通过扫描电镜、紫外可见吸收光谱、三维荧光光谱及... 详细信息

带衬膜和非带衬膜作为膜生物反应器（MBR）中常用的两种膜类型，由于在结构和性能上的不同，其膜污染特征也存在一定的差异。针对应用于黄河上游典型污水厂MBR工艺的带衬膜和非带衬膜，通过扫描电镜、紫外可见吸收光谱、三维荧光光谱及傅里叶变换离子回旋共振质谱等方法对膜污染物进行系统识别，并对污染物种类和形态进行分析，以期获得不同类型膜的污染物质信息特征。结果表明，无论是无机还是有机污染物，两种类型膜中包含污染物质种类相差不大，但是两种膜对不同污染物的选择性具有较明显的差异。总体来说，带衬膜的抗污染能力较强，且带衬组膜丝的污染物主要集中在膜外表面上；对于金属离子含量较高的原水，带衬膜更容易截留金属离子形成无机金属离子膜污染物；两种膜污染物中的有机物类型分布基本一致，均对苯环类、蛋白质类具有较强的截留作用，但带衬膜的截留效果更好，且可以截留更多的微生物代谢产物、木质素等有毒及难降解物质，但由于这些物质主要通过膜孔过滤，易附着于膜孔内，因此需要有针对性地选择膜清洗方式，以保证持续的膜过滤效果。

关键词：膜生物反应器膜污染带衬膜有机物

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