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牛支原体能量耦合因子转运蛋白S组件Mb BioY摄取外源生物素的功能分析

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畜牧兽医学报 2024年第1期55卷 282-289页

作者：陈启伟权衡陈胜利刘东慧于永峰李彩玉宫晓炜储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046

牛支原体(***)感染与生存依赖于外界微环境提供的各类营养代谢因子。开展***外源生物素摄取的机制研究,将对***防控具有极其重要的意义。通过对*** PG45 Mb BioY(MBOVPG45_0349)基因进行系统发育分析、分子对接分析,筛选*** PG45 Mb Bio... 详细信息

牛支原体(***)感染与生存依赖于外界微环境提供的各类营养代谢因子。开展***外源生物素摄取的机制研究,将对***防控具有极其重要的意义。通过对*** PG45 Mb BioY(MBOVPG45_0349)基因进行系统发育分析、分子对接分析,筛选*** PG45 Mb BioY突变株,比较PG45和PG45ΔMb BioY的生物素敏感性,异源构建Mb BioY功能性克隆验证其功能。结果表明,PG45染色体上存在一种崭新的生物素膜转运蛋白,全长996 bp,GC含量30.95%,蛋白长度为332个氨基酸,是由7个跨膜结构域组成的能量偶合因子(ECF)转运蛋白S成分Mb BioY。进一步验证后发现,当***缺失Mb BioY会影响其生长,表现出生物素代谢营养缺陷的表型。通过异源敲入生物素代谢营养缺陷大肠杆菌MG1655,表明Mb BioY单独存在时,就能够恢复生物素代谢营养缺陷大肠杆菌缺失株的生理功能。初步证明,Mb BioY编码的是能量偶合因子(ECF)转运蛋白的S成分具有摄取外源生物素的能力,该研究结果将补充细菌生物素代谢调控的多样性和复杂性,为***的有效防控提供独特视角。

关键词：牛支原体能量耦合因子转运体生物素转运

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脉冲放电杀菌技术及其应用研究进展

动物医学进展 2010年第7期31卷 95-98页

作者：周继章宫晓炜中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

脉冲放电杀菌技术是一种利用电压瞬间发生变化而对细菌产生不可逆损失,进而导致死亡的一种非热杀菌技术。论文综述了脉冲电场的杀菌机理、特点和杀菌效果以及其在国内外应用的研究进展,提出脉冲放电杀菌技术有望取代传统的化学试剂灭活... 详细信息

脉冲放电杀菌技术是一种利用电压瞬间发生变化而对细菌产生不可逆损失,进而导致死亡的一种非热杀菌技术。论文综述了脉冲电场的杀菌机理、特点和杀菌效果以及其在国内外应用的研究进展,提出脉冲放电杀菌技术有望取代传统的化学试剂灭活病原体方法,为动物传染病病原体的灭活和疫苗的制备带来革新。

关键词：脉冲电场病原体灭活

布鲁菌外膜蛋白OMP10表达及其抗原性的研究

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动物医学进展 2009年第12期30卷 25-29页

作者：宫晓炜周继章中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

设计1对特异性引物对羊布鲁菌16M总DNA进行外膜蛋白omp10的PCR扩增,得到了一个大小为330bp的目的基因片段(去掉17个氨基酸编码的信号肽),测序证实它与国外报道的羊布鲁菌omp10基因完全一致。将其克隆到表达载体PET-30a中,经酶切、PCR扩... 详细信息

设计1对特异性引物对羊布鲁菌16M总DNA进行外膜蛋白omp10的PCR扩增,得到了一个大小为330bp的目的基因片段(去掉17个氨基酸编码的信号肽),测序证实它与国外报道的羊布鲁菌omp10基因完全一致。将其克隆到表达载体PET-30a中,经酶切、PCR扩增和测序分析,表明重组表达载体构建成功。将此重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,该基因以包涵体的形式在大肠埃希菌中表达,经过包涵体的变性、复性和亲和层析纯化,成功获得大小为14.2ku的融合蛋白,与理论推测的蛋白分子质量一致;Westernblot和间接ELISA试验证明,纯化之后的OMP10重组蛋白可以被布鲁菌阳性血清识别。

关键词：布鲁菌 0MPIO重组蛋白抗原性

布鲁氏菌BP26蛋白的表达纯化及其抗原性的研究

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中国人兽共患病学报 2009年第11期25卷 1085-1088页

作者：宫晓炜景涛王国治李恪梅王秉翔傅林锋兰州大学病原生物学研究所兰州730000 中国药品生物制品检定所北京100050 兰州生物制品研究所兰州730046

目的获得布鲁氏菌感染血清学诊断优势抗原BP26重组蛋白。方法应用PCR技术从布鲁氏菌减毒株(104M)中扩增出bp26目的基因片段,将其克隆于表达载体PET30a中,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,用亲和层析纯化BP26重组蛋白,然后分别... 详细信息

目的获得布鲁氏菌感染血清学诊断优势抗原BP26重组蛋白。方法应用PCR技术从布鲁氏菌减毒株(104M)中扩增出bp26目的基因片段,将其克隆于表达载体PET30a中,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,用亲和层析纯化BP26重组蛋白,然后分别用Western-blot,间接ELISA检测其抗原性。结果DNA测序及酶切鉴定证实PET-30a/bp26原核表达载体构建成功,并在大肠杆菌中高效表达,免疫印迹和间接ELISA实验证明BP26重组蛋白可与布鲁氏菌阳性血清产生特异性结合。结论成功获得了布鲁氏菌中序列全长为696bp,编码232个氨基酸的BP26蛋白,通过血清学反应证实,该蛋白为人和动物布鲁氏菌病临床诊断试剂盒的研发奠定了基础。

关键词：布鲁氏菌 BP26重组蛋白抗原性

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牛病毒性腹泻病毒感染的免疫应答研究进展

中国兽医科学 2012年第11期42卷 1200-1205页

作者：宫晓炜曹小安郑福英陈启伟周继章殷宏才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

从牛病毒性腹泻病毒影响宿主先天性免疫应答、适应性免疫应答及引发机体免疫抑制等方面,综合阐述了牛病毒性腹泻病毒感染损伤机体免疫防御系统的原因及研究进展,旨在为深入研究牛病毒性腹泻病毒免疫逃逸和持续性感染的机理提供理论依据。

关键词：牛病毒性腹泻病毒先天性免疫应答适应性免疫应答免疫抑制

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牛布氏杆菌间接ELISA检测方法的建立

中国兽医科学 2010年第6期40卷 598-602页

作者：宫晓炜邱昌庆蔺国珍郑福英曹小安王光华周继章中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

采用原核表达并纯化的布氏杆菌周质蛋白BP26作为包被抗原,建立了检测牛布氏杆菌血清抗体的间接ELISA(iELISA)方法。用建立的iELISA方法对138份临床奶牛血清样本进行了检测,并与虎红平板凝集试验(RBPT)和套式PCR(nested-PCR)进行了比较... 详细信息

采用原核表达并纯化的布氏杆菌周质蛋白BP26作为包被抗原,建立了检测牛布氏杆菌血清抗体的间接ELISA(iELISA)方法。用建立的iELISA方法对138份临床奶牛血清样本进行了检测,并与虎红平板凝集试验(RBPT)和套式PCR(nested-PCR)进行了比较。结果表明,所建立的iELISA与RBPT和nes-ted-PCR的符合率分别为97.82%和98.55%。尽管该方法的敏感性略低于nested-PCR,但用iELISA检测病牛血清的阳性率可达93.00%。该iELISA方法可作为一种有效的牛布氏杆菌病血清学诊断的备用方法。

关键词：牛布氏杆菌 BP26重组蛋白间接酶联免疫吸附试验

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青海牦牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定

中国兽医科学 2011年第11期41卷 1101-1105页

作者：张芳芳王光华郑福英宫晓炜周继章吴润邱昌庆中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

采集青海省泽库县某牧户疑似牦牛病毒性腹泻病牛的样品,将RT-PCR检测为阳性的样品处理后接种MDBK细胞,并盲传至第10代,检测每一代细胞中牛病毒性腹泻病毒的E0基因。通过分离株接种细胞后产生的病变效应观察、免疫荧光试验、电镜观察、RT... 详细信息

采集青海省泽库县某牧户疑似牦牛病毒性腹泻病牛的样品,将RT-PCR检测为阳性的样品处理后接种MDBK细胞,并盲传至第10代,检测每一代细胞中牛病毒性腹泻病毒的E0基因。通过分离株接种细胞后产生的病变效应观察、免疫荧光试验、电镜观察、RT-PCR扩增以及序列分析鉴定了该病毒。结果表明,盲传的每代细胞中均可检测到E0基因;接毒后的细胞在盲传至第7代时出现明显的细胞病变;免疫荧光试验中能观察到细胞内发出的特异性荧光;经浓缩、纯化的病毒在电镜下呈直径为40～60nm的病毒粒子,将其命名为QHZK株。对克隆的E0基因测序后提交至GenBank(登录号:JF927789),并将获得的序列与其他国内外分离株的E0序列比对,同源性为73.6%～98.2%;系统进化分析表明该分离株属于牛病毒性腹泻病毒1b亚型。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 E0基因分离鉴定

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禽滑液囊支原体诊断与防控技术研究进展

黑龙江畜牧兽医 2018年第9期 31-34,245页

作者：王昆宫晓炜陈启伟郑福英中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室/草食动物细菌病创新团队

禽滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae,MS）感染是一种以亚临床型上呼吸道感染为最常表现特征的禽支原体感染,一经发病,会给养殖户带来严重的经济损失。MS感染引起的滑膜炎可引起鸡关节肿大,同时累及气囊、腱鞘和胸骨。肿胀的足垫和关... 详细信息

禽滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae,MS）感染是一种以亚临床型上呼吸道感染为最常表现特征的禽支原体感染,一经发病,会给养殖户带来严重的经济损失。MS感染引起的滑膜炎可引起鸡关节肿大,同时累及气囊、腱鞘和胸骨。肿胀的足垫和关节可作为MS感染进展的指标,会导致鸡进行性消瘦。文章从MS诊断方法、药物治疗、疫苗免疫及净化鸡群等方面综合阐述了实验室检测MS所涉及的相关技术要点、鸡场MS防治所采取的相关措施及研究进展,旨在为鸡场MS清除计划提供最佳方案。

关键词：滑液囊支原体(MS) 流行病学诊断方法耐药性疫苗防控措施

鸭疫里默氏杆菌recA基因突变对其生长及DNA损伤反应的影响

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畜牧兽医学报 2021年第9期52卷 2553-2560页

作者：吉果陈启伟宫晓炜刘永生郑福英中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室兰州730046

DNA损伤反应(SOS response)是细菌应对基因组DNA损伤的一种重要的保护机制。RecA蛋白在许多细菌中对SOS反应的诱导都起关键调控作用,其同源蛋白广泛存在于各种生物体中。本研究对鸭疫里默氏杆菌RecA蛋白是否调控其SOS反应进行探索。构建... 详细信息

DNA损伤反应(SOS response)是细菌应对基因组DNA损伤的一种重要的保护机制。RecA蛋白在许多细菌中对SOS反应的诱导都起关键调控作用,其同源蛋白广泛存在于各种生物体中。本研究对鸭疫里默氏杆菌RecA蛋白是否调控其SOS反应进行探索。构建recA基因缺失株和回复株,检测亲本株、缺失株和回复株在紫外线辐照损伤下的生长能力、recA基因的转录水平以及SOS反应。结果表明,成功构建了recA基因缺失株ΔrecA和回复株cΔrecA;recA基因灭活对鸭疫里默氏杆菌RA-GD株的生长速率无明显影响;在紫外线辐照损伤下,亲本株recA基因的转录水平明显升高,缺失株的存活能力及其基因组的完整性都显著低于亲本株和回复株。本研究证实RecA蛋白参与鸭疫里默氏杆菌的SOS反应。

关键词：鸭疫里默氏杆菌 recA基因生长 SOS反应