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共培养体系下牛骨骼肌细胞对脂肪细胞的调控作用研究

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中国农业科学 2024年第18期 3704-3718页

作者：杨东梅张久盘宋雅萍宋小雨姜超马云魏大为宁夏大学动物科技学院/宁夏回族自治区反刍动物分子细胞育种重点实验室宁夏农林科学院动物科学研究所

【目的】大理石纹是衡量肉品质的重要指标之一，由牛骨骼肌细胞与牛脂肪细胞共同发育形成。通过最大程度模拟体内肉质形成过程中牛骨骼肌细胞和脂肪细胞互作效应，建立体外两种细胞共培养体系，探究共培养体系下牛骨骼肌细胞分泌和代谢... 详细信息

【目的】大理石纹是衡量肉品质的重要指标之一，由牛骨骼肌细胞与牛脂肪细胞共同发育形成。通过最大程度模拟体内肉质形成过程中牛骨骼肌细胞和脂肪细胞互作效应，建立体外两种细胞共培养体系，探究共培养体系下牛骨骼肌细胞分泌和代谢因子对脂肪细胞的调控作用。【方法】采用组织块法和酶消化法分别分离牛脂肪细胞和骨骼肌细胞。利用表型鉴定法和标志基因表达谱鉴定法共同鉴定所分离细胞的纯度和分化潜能，进一步构建牛骨骼肌细胞和牛脂肪细胞条件培养基交换共培养体系以及Transwell共培养体系，通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)、EdU染色和油红O染色等方法检测共培养条件下牛骨骼肌细胞分泌和代谢产物对脂肪细胞增殖和分化的影响。【结果】成功构建了两种牛骨骼肌细胞与脂肪细胞的共培养体系。条件培养基交换共培养下，牛脂肪细胞增殖标志基因PCNA、CDK2、CCNE2和CCND1的表达极显著下调（P<0.01）；此外，成脂标志基因FABP4和PPARγ的表达显著下调（P<0.05）;LPL的表达极显著下调（P<0.01）。另一方面，在Transwell共培养条件下，牛脂肪细胞增殖标志基因CCND1的表达显著下调（P<0.05）;PCNA、CDK1和CCNE2的表达极显著下调（P<0.01），且成脂标志基因FABP4的表达显著下调（P<0.05）,PPARγ、C/EBPβ和LPL的表达极显著下调（P<0.01）。【结论】牛骨骼肌细胞分泌和代谢产物可通过抑制脂肪细胞增殖标志基因PCNA、CDK1、CDK2、CCNE2和CCND1以及成脂标志基因PPARγ、FABP4、C/EBPβ和LPL的表达抑制牛脂肪细胞的增殖与分化。以上研究结果可为进一步探究肉牛肌内脂肪沉积的分子机制提供技术支撑。

关键词：牛脂肪细胞骨骼肌细胞共培养细胞互作

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特殊地质桩基施工关键技术研究

山西建筑 2024年第7期50卷 82-84页

作者：宋雅萍刘斌济南海河建设项目管理有限公司山东济南250002

针对济南工业北路东延工程岩溶区大直径桩基施工,结合现场地质实际情况,进行了施工中关键技术研究,介绍了现场施工一步步摸索情况,从难点分析、应对措施、典型不良地质施工处理方案及相关注意事项进行总结,通过现场实践,为工程建设提供... 详细信息

针对济南工业北路东延工程岩溶区大直径桩基施工,结合现场地质实际情况,进行了施工中关键技术研究,介绍了现场施工一步步摸索情况,从难点分析、应对措施、典型不良地质施工处理方案及相关注意事项进行总结,通过现场实践,为工程建设提供有力支持。

关键词：岩溶桩基施工钻孔桩钢护筒跟进

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大体积混凝土裂缝成因及控制修补措施研究

现代工程科技 2024年第8期3卷 45-48页

作者：刘斌宋雅萍济南海河建设项目管理有限公司山东济南250002

主要分析了大体积混凝土出现裂缝的成因、控制措施,以及行之有效的修补方法。针对某城市高架桥承台、墩身等大体积混凝土出现裂缝的数据分析,结合混凝土原材料和施工环境分析其特征,总结施工过程中的处理方法,旨在有效预防与控制大体积... 详细信息

主要分析了大体积混凝土出现裂缝的成因、控制措施,以及行之有效的修补方法。针对某城市高架桥承台、墩身等大体积混凝土出现裂缝的数据分析,结合混凝土原材料和施工环境分析其特征,总结施工过程中的处理方法,旨在有效预防与控制大体积混凝土裂缝,延长其寿命,为类似工程施工提供参考与借鉴。

关键词：大体积混凝土裂缝成因修补控制措施

FOXO1基因调控牛前体脂肪细胞增殖和分化的功能研究

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中国农业大学学报 2024年第4期29卷 226-238页

作者：宋雅萍张久盘魏大为杨东梅赵毅昂姜超宋小雨吴昊宁夏大学动物科技学院/宁夏反刍动物分子细胞育种重点实验室银川750021 宁夏农林科学院动物科学研究所银川750021

为探究干扰叉头转录因子O1(Forkhead box protein O1, FOXO1)对牛前体脂肪细胞增殖和分化的作用,本研究以固原黄牛的前体脂肪细胞为研究对象,采用组织块法分离牛前体脂肪细胞,并利用表型鉴定和标志基因表达谱2种方法鉴定所分离细胞的纯... 详细信息

为探究干扰叉头转录因子O1(Forkhead box protein O1, FOXO1)对牛前体脂肪细胞增殖和分化的作用,本研究以固原黄牛的前体脂肪细胞为研究对象,采用组织块法分离牛前体脂肪细胞,并利用表型鉴定和标志基因表达谱2种方法鉴定所分离细胞的纯度和分化潜能。筛选并包装牛FOXO1干扰慢病毒,利用EdU染色、流式细胞术、油红O染色和qPCR方法探究干扰FOXO1对牛脂肪细胞增殖和分化的作用。结果表明:1)成功分离了牛前体脂肪细胞,且其具有较高的纯度和分化潜能。2)EdU染色结果表示,侵染Lv-FOXO1极显著增加了牛脂肪细胞的增殖率(P<0.01)。3)流式周期结果显示,干扰FOXO1显著增加了牛脂肪细胞S期阳性细胞的比例,促进了G1/S期的转化,进而促进了牛脂肪细胞增殖。4)干扰FOXO1后,增殖标志基因PCNA、CDK1和CDK2的表达量均极显著上调(P<0.01)。5)干扰FOXO1后牛前体脂肪细胞脂滴生成明显减少,且成脂标志基因PPARG的表达极显著下调(P<0.01),CEBPB和LPL的表达显著下调(P<0.05)。综上,干扰FOXO1可通过上调增殖标志基因PCNA、CDK1和CDK2的表达促进牛脂肪细胞G1/S期的转化,进而促进牛脂肪细胞增殖,且其可通过降低成脂标志基因PPARG、CEBPB和LPL的表达减少牛脂肪细胞脂滴形成,进而影响脂肪沉积。本研究可为中国地方黄牛的肉质遗传改良提供理论依据。

关键词： FOXO1 固原黄牛前体脂肪细胞增殖分化

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活血化瘀法在妇科疾病中的应用

上海中医药杂志 1991年第8期25卷 14-15页

作者：宋雅萍上海市崇明县中心医院 202150

一、妇科血瘀证的特征经期不定,经色紫暗、瘀块、经行不畅,小腹胀痛,甚则拒按,下紫块后痛减,或少腹癥瘕积聚,产后恶露不下或下而不爽。

关键词：活血祛瘀妇科病

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榆林沙地林业科技产业园规划设计研究

榆林沙地林业科技产业园规划设计研究

作者：宋雅萍西安建筑科技大学

学位级别：硕士

随着全球土地沙漠化的形势日益严峻,人们不断寻求和探索防沙、治沙、利用沙的热情日益高涨。榆林沙地林业科技产业园正是在人们渴求改善沙地生态、生产环境的基础上所孕育形成的。本文旨在通过对国内外科技产业园与农业科技产业园的理... 详细信息

随着全球土地沙漠化的形势日益严峻,人们不断寻求和探索防沙、治沙、利用沙的热情日益高涨。榆林沙地林业科技产业园正是在人们渴求改善沙地生态、生产环境的基础上所孕育形成的。本文旨在通过对国内外科技产业园与农业科技产业园的理论分析、案例研究以及基于沙地林业科技产业园的特征研究,提出问题,分析、总结问题的解决方案,探索出一套适用于此类沙地林业科技产业园的规划设计方法与内容,意图为日后沙地林业科技产业园在国内更为具体和深入的理论研究和规划实践提供参考。榆林沙地林业科技产业园规划设计为我国首创,从生态治理、产业模式、空间布局到运营管理,相对于传统产业园区规划都是创新,具有十分重要的研究与借鉴意义。本文以农业科技产业园规划设计相关理论为基础,以榆林沙地林业科技产业园规划设计为研究对象,探讨在典型沙地气候及环境特征下如何将产业配置和土地规划结合形成科学的规划思路及规划方法,并由此总结得出适用于榆林沙区,沙地林业型的产业园规划的内容和方法。论文的核心部分是在科技产业园与农业科技产业园的特征及案例、沙地林业科技产业园特征研究的基础上,针对于榆林沙地林业科技产业园规划设计过程中遇到的问题及具体解决方案的讨论,具体包含四个方面:对于沙地林业科技产业园规划的用地布局问题,经分析提出了“同心圆”土地利用空间结构模式;对于沙地产业技术研发推广模式问题,经分析得出了“孵化辐射型”技术推广模式;对于生产尺度、生活尺度、生态尺度的表达问题,经分析得出了“300×300米”单元网格;对于沙地生态营造问题,经分析提出了结合生态绿化体系、生态防护林体系和自然生境系统保护的沙地生态营造策略。最后,论文主要以榆林沙地林业科技产业园规划设计为例,具体介绍了基于以上四个问题的解决方案背景下,榆林沙地林业科技产业园的规划设计的内容与方法。包含:规划纲要、产业规划、总体规划、核心区详细规划四个方面。希望对今后的沙地型林业科技产业园的科学规划做出一些积极探索。

关键词：沙地林业科技产业园规划设计榆林

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政府养老制度研究

政府养老制度研究

作者：宋雅萍华中师范大学

学位级别：硕士

人口老龄化,作为一种社会现象,是经济社会发展到一定阶段必然会出现的时代产物。每个人都会经历从年轻到衰老的过程,由此,老龄化关系着每个个体的发展。然而,一个社会中老年人口的比例不断升高,意味着这个庞大的群体创造价值的能力逐渐... 详细信息

人口老龄化,作为一种社会现象,是经济社会发展到一定阶段必然会出现的时代产物。每个人都会经历从年轻到衰老的过程,由此,老龄化关系着每个个体的发展。然而,一个社会中老年人口的比例不断升高,意味着这个庞大的群体创造价值的能力逐渐减弱,其影响会严重冲击经济以及社会的和谐发展。因此,采取怎样的措施来积极应对日益严峻的老龄化趋势所带来的负面效应,怎样切实有效地使社会上需要救助的老年群体得到均等公平的养老服务,成为每个政府亟待解决的社会问题。就我国的实际情况来说,对于老年群体的养老责任承担问题,普遍存在着一个误区,即养老是独立的社会群体自身应当承担的责任,比如家庭成员,或者养老机构等单一主体。这在一定程度上忽视了政府作为管理公共事务、主导宏观调控、进行利益均等分配的社会职能。就目前我国存在的养老模式来看,不论是家庭养老、机构养老、居家养老还是新兴的以房养老,都只是单纯作为养老的方式孤立的存在,而如何能使各种养老模式在现有的基础上发挥其根本性的作用,政府的养老职责不容忽视。在政府履行养老职责的现实考察中,有部分省份根据本省人口结构和经济发展状况,因地制宜的出台了不少为老服务的规章制度,比如浙江省和江苏省,有些做法在吸收域外优秀经验的基础上更是成为全国首创,为其他省份的老年福利政策的制定提供了借鉴价值。但从总体上来说,目前我国还没有建立起全国范围内的统一的政府养老职责制度,基于此,笔者萌生了本文的创作理念,希望通过本文的分析论述,能够为构建政府养老职责制度提供一些理论依据,加速相关制度的出台。通过以上分析,笔者分别从以下三大部分来分别阐述在我国构建政府养老职责制度的问题。第一部分：主要是从基础理论的角度论述政府养老职责制度。首先,对于现有的我国养老模式进行整体的概述与比较,分析出个各种养老模式的特点以及不足之处,进而引出政府承担养老职责的重要性和必然性;其次,在上述理论的基础上探讨建立政府养老职责制度的现实意义,这部分内容主要从保障公民权利、健全养老保障体系、符合人口结构和流动需要以及继承养老传统四个方面来说明。第二部分：针对上述有关政府养老职责制度理论基础的铺垫,对我国政府养老制度的现实进行考察。选取在养老保障方面政府发挥主导作用已经取得实效的浙江省和江苏省作为案例来进行分析说明。分别从两个省份在政府养老实践中形成的主要制度和做法以及吸收借鉴的优秀域外经验两个层次来加以说明。第三部分：这是本文最为重要的制度构建设计部分。主要从以下四个方面来阐述在我国建立统一的政府养老职责制度的构想。首先,从完善政府养老法律保障的角度出发,分别以老年团体参与立法、公民“养老权”入法以及老年法律援助制度三个方面为出发点展开论述;其次,就政府多元投入制度来明确政府在养老保障中的资金、基础设施、康复医疗等方面的职责;再次,通过设置养老服务准入制度,来对机构养老、居家养老进行完善,与此同时督促政府应当从提升养老服务执行力等方面加强监管;最后,建立完整的养老服务监督评估制度,建立为老服务监督管理机制。结语是笔者对政府养老职责制度构建所做的集中概括和总结。

关键词：政府养老制度构建养老服务体系

苹果转录因子MdWRKY24的克隆及在不同砧穗组合中的表达分析

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苹果转录因子MdWRKY24的克隆及在不同砧穗组合中的表达分析

作者：宋雅萍河北农业大学

学位级别：硕士

世界苹果栽培的主要趋势为矮砧密植集约栽培,矮砧密植果园具有冠幅小、光照利用率高、早花早果、果实品质好、管理便捷和经济效益高等优点。然而截至目前关于苹果矮化砧木的致矮机制研究仍有许多不明之处,矮化砧木的应用与致矮机制研究... 详细信息

世界苹果栽培的主要趋势为矮砧密植集约栽培,矮砧密植果园具有冠幅小、光照利用率高、早花早果、果实品质好、管理便捷和经济效益高等优点。然而截至目前关于苹果矮化砧木的致矮机制研究仍有许多不明之处,矮化砧木的应用与致矮机制研究不匹配,使得分子辅助育种在矮化砧木育种过程中的应用受到极大的限制。本试验以矮化砧木M9和SH40,乔化砧木八棱海棠为中间砧的盆栽红富士苹果树为试材,通过转录测序筛选关键转录因子,进行基因克隆及表达分析,旨在阐述关键转录因子特征,为揭示苹果矮化砧木致矮机制提供参考。主要研究结果如下:1.对不同中间砧富士苹果树的茎尖和新梢韧皮部进行转录组测序。共得到460差异表达的转录因子,其中M9与八棱海棠做中间砧相比,显著差异表达的转录因子有13个,8个转录因子上调表达,5个转录因子下调表达;SH40与八棱海棠做中间砧相比差异显著表达的转录因子有45个,9个转录因子上调表达,36个转录因子下调表达。SH40与M9做中间砧相比差异显著表达的转录因子有57个,20个转录因子上调表达,37个转录因子下调表达。3种试材两两比较均差异表达的基因共有1个,命名为MdWRKY24。2.在秋梢生长期,取3种试材的茎尖、新梢韧皮部,进行qRT-PCR分析,以M9为中间砧的试材茎尖、新梢韧皮部中MdWRKY24基因的表达量显著高于其它两种试材,表达趋势与转录组测序结果一致。3.通过克隆得到MdWRKY24基因CDs序列长657bp,共编码218个氨基酸,含有WRKYGQK结构域且包含C2H2型锌指结构,属于第Ⅱ类的WRKY亚族。对MdWRKY24基因启动子进行预测,包含脱落酸,茉莉酸,生长素相关顺式作用元件以及其他9个基因家族21转录因子结合位点。4.测序结果分析表明,在植物激素合成与代谢通路中,2种矮化砧木M9、SH40与乔化砧木八棱海棠比较,得到1个共同的差异显著表达基因CYP707A1;在植物激素信号转导途径代谢通路得到3个共有的显著差异表达的基因,IAA9,HA3和SnKR2.10;对3种试材内与激素相关的显著差异基因的启动子进行分析,得到2个显著差异表达且含MdWRKY24基因蛋白结合基序W-box的基因SnRK2.10,CYP707A1。5.取秋梢生长期3种试材新梢茎尖,测定激素代谢通路中存在差异表达的基因调控的激素含量。以矮化砧木M9、SH40为中间砧与以平邑甜茶为基砧的富士比较,矮砧试材内ABA含量显著高于乔砧试材,且ABA的含量随树体的矮化性增强而逐渐增大。矮砧试材IAA和GA3的含量显著低于乔砧试材,并随植株的生长势增强而增大。

关键词：苹果矮化砧木 MdWRKY24 克隆基因表达

FoxO1基因调控牛脂肪细胞增殖、分化和脂质代谢的作用机制研究

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FoxO1基因调控牛脂肪细胞增殖、分化和脂质代谢的作用机制研究

作者：宋雅萍宁夏大学

学位级别：硕士

脂肪组织是机体重要的内分泌器官,其所分泌的脂肪因子可通过旁分泌、自分泌和血液循环等途径影响一些器官(如骨骼肌、肝脏和大脑等)的代谢功能。重要的是,在生产动物中,脂肪组织的含量和分布与肉质的好坏密切相关。因此,解析脂肪生成的... 详细信息

脂肪组织是机体重要的内分泌器官,其所分泌的脂肪因子可通过旁分泌、自分泌和血液循环等途径影响一些器官(如骨骼肌、肝脏和大脑等)的代谢功能。重要的是,在生产动物中,脂肪组织的含量和分布与肉质的好坏密切相关。因此,解析脂肪生成的机制于畜牧业的肉质遗传改良而言有重要意义。作为一种多功能转录因子,叉头框转录因子O1(forkhead box protein O1,FoxO 1)参与细胞周期控制、抗氧化反应、细胞凋亡、葡萄糖代谢、脂质代谢和肿瘤抑制等生物学过程。近年来,FoxO1因其在细胞周期控制和脂肪细胞分化中发挥重要作用而作为减肥的靶因子备受学者们的关注。但FoxO1对脂肪细胞增殖、分化和脂质代谢的具体作用机制还尚不明晰。鉴于此,本学位论文以固原黄牛为研究对象,探究了 FoxO1对牛脂肪细胞增殖、分化和脂质代谢的调控作用及其机制。旨在阐明FoxO1对牛脂肪生成的作用机制,亦为牛的肉质遗传改良提供基因素材。主要研究结果如下:(1)本研究通过组织块法成功分离了具有较高纯度和分化潜能的牛脂肪细胞。亚细胞定位发现,FoxO1在牛脂肪细胞的细胞核和细胞质中均发挥着重要的生物学功能。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)发现,FoxO1在成年牛皮下脂肪和肾周脂肪中高度表达,且其在成年牛皮下脂肪中的表达量极显著高于犊牛(P<0.01)。此外,FoxO1的表达量在牛脂肪细胞增殖过程中逐渐上调。再者,FoxO1在牛脂肪细胞分化第2 d、第4 d和第8 d的表达量极显著高于分化第0d(P<0.01)。(2)FoxO1通过负调控增殖标志基因(PCNA、CDK1、CDK2、CCNA2、CCNB1和CCNE2)和蛋白(PCNA、CDK2和CCNA2)的表达抑制牛脂肪细胞G1/S期的转化,进而抑制牛脂肪细胞增殖。再者,FoxO1负调控牛脂肪细胞增殖的同时,促进了促凋亡标志蛋白BAD的表达,从而促进了牛脂肪细胞的早期和晚期凋亡。此外,FoxO1可通过正调控成脂分化标志基因(PPARγ和C/EBPα)和脂质合成代谢标志基因(ACC、FASN、SCD1、SREBP1、FABP4、ACSL1、LPL和DGAT1)的表达,增加牛脂肪细胞中甘油三酯(triglyceride,TG)的含量,并促进了脂滴的生成。(3)利用靶向FoxO1的小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)转染牛脂肪细胞,并诱导细胞分化至第4d进行转录组测序(RNA-sequencing,RNA-seq)和非靶代谢测序。结果显示,共筛选出222个DEGs和52个差异代谢物(POS模式28个、NEG模式24个)。联合分析发现,FoxO1可通过调控AMPK和PI3K/AKT通路的活性调控牛脂肪生成。此外,基于测序筛选到FoxO1调控牛脂肪生成的下游靶标CD36和STEAP4。(4)通过染色质免疫共沉淀(chromatin Immunoprecipitation,ChIP)和双荧光素酶报告试验发现,FoxO1可通过结合CD36和STEAP4启动子区域,并影响CD36和STEAP4的转录活性,进而调控牛脂肪生成。综上所述,本研究探究了FoxO1对牛脂肪细胞增殖、分化和脂质代谢的调控作用,并鉴定了FoxO1调控牛脂肪生成的下游靶标CD36和STEAP4。本研究不仅丰富了脂肪生成的分子网络,亦为牛的肉质遗传改良工作提供了理论依据。

关键词：牛 FoxO1 脂肪细胞细胞增殖与分化脂质代谢