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硒化镉量子点对人皮肤细胞的毒性效应研究

硒化镉量子点对人皮肤细胞的毒性效应研究

作者：宋方茗第二军医大学

学位级别：硕士

近年来,半导体量子点由于其独特的性质越来越受到人们的重视,其研究内容涉及物理、化学、材料、生物等多学科,已成为一门新兴的交叉学科。目前研究较多的是CdS、CdSe、CdTe、ZnS等。半导体纳米微晶体(又称量子点)由于其特有的物理和化... 详细信息

近年来,半导体量子点由于其独特的性质越来越受到人们的重视,其研究内容涉及物理、化学、材料、生物等多学科,已成为一门新兴的交叉学科。目前研究较多的是CdS、CdSe、CdTe、ZnS等。半导体纳米微晶体(又称量子点)由于其特有的物理和化学性质,如激发光谱宽、发射光谱窄,而且可通过改变量子点内核心材料的尺寸大小对其发射光波长进行调频等,它开始被作为一种新型的荧光标记物在生物医学中获得广泛使用。随着量子点的应用,人体暴露机会日益增加,其安全性问题也日益受到关注。本论文从人黑色素瘤细胞(A375,A375.s2)以及正常人表皮细胞(HaCaT)的基本培养入手,对于细胞培养过程中需要的传代、冻存、复苏等基础而必需的实验环节进行了摸索和完善;通过CCK-8试剂盒,绘制出了三种细胞系的增殖曲线,以及三种细胞系的生长曲线,并观察了处于对数生长期细胞的形态;同时以量子点(QDs-545和QDs605)为研究对象,以人黑色素瘤细胞(A375,A375.s2)为模型,人正常表皮细胞HaCaT为阴性模型,首先采用CCK-8法检测两种不同粒径量子点QDs-605,QDs-545分别对A375,A375.s2,HaCaT细胞增殖的影响;其次采用荧光显微镜观察两种不同粒径量子点QDs-605,QDs-545分别对A375,A375.s2,HaCaT细胞形态的影响,以及三种细胞系分别与两种不同粒径量子点QDs-605,QDs-545非特异性结合;然后根据荧光显微镜与CCK-8法所得结果,分别筛选低剂量量子点QDs-605,QDs-545浓度,通过流式细胞仪检测A375,A375.s2,HaCaT细胞与量子点QDs-605,QDs-545的非特异性作用;然后利用PI单染法流式细胞术检测低剂量量子点QDs-545导致A375,A375.s2,HaCaT细胞凋亡;最后利用水飞蓟宾能够有效调节氧化带来的损伤,考查了其对量子点在细胞中毒性的干预作用。论文初步探讨了不同粒径CdSe/ZnS量子点QDs-605和QDs-545的细胞毒性及相关的毒性机制,并且首次考查药物调节量子点对细胞的氧化损伤,为CdSe/ZnS量子点的安全性提供一定的实验依据。实验结果表明: 1、CCK-8法检测CdSe/ZnS QDs-545和CdSe/ZnS QDs-605对A375,A375.s2,HaCaT细胞的毒性随着QDs-605浓度的增加,A375,A375.s2细胞存活率随之下降。不同浓度的QDs-605作用于A375,A375.s2细胞,24h后其细胞存活率均低于空白组,并具有显著性差异(P<0.05或P<0.001),而不同浓度的QDs-605作用于HaCaT细胞24h,只有QDs-605浓度为162,81,2.025,1.0125nmol/L时与空白组比较有显著性差异,其它浓度与空白组无显著性差异。并且在高剂量162nmol/L QDs-605作用A375,A375.s2,HaCaT细胞24 h时,A375,A375.s2细胞存活率分别为7.3%,10.3%,接近90%的细胞死亡,而HaCaT细胞存活率为50%。不同浓度的QDs-545作用于A375,A375.s2细胞,24h后其细胞存活率均低于空白组,并具有显著性差异(P<0.05或P<0.001),而不同浓度的QDs-545作用HaCaT细胞24h,只有QDs-545浓度为162,54nmol/L与空白组比较有显著性差异,而其它浓度与空白组均无显著性差异。并且在高剂量162nmol/L QDs-545作用A375,A375.s2,HaCaT细胞24 h时,A375,A375.s2细胞存活率分别为24%,16%,接近80%的细胞死亡,而HaCaT细胞存活率为89.7%。这说明两种不同粒径量子点QDs-605,QDs-545可抑制A375,A375.s2细胞的增殖,但是对HaCaT细胞的增殖没有明显影响。 2、荧光显微镜观察CdSe/ZnS QDs-545和CdSe/ZnS QDs-605对A375,A375.s2,HaCaT细胞的影响随着不同浓度CdSe/ZnS QDs-545和CdSe/ZnS QDs-605分别在人黑色素瘤细胞A375,A375.s2,以及人正常表皮细胞HaCaT孵育24h后,A375,A375.s2细胞均随着量子点(QDs-545和QDs-605)剂量的增加,荧光强度逐渐增强,发生明显非特异性结合,同时A375,A375.s2细胞形态也相应发生明显变化,并且在81nmol/L62nmol/L剂量作用A375,A375.s2细胞24h后,A375,A375.s2细胞呈现大面积凋亡。而人正常表皮细胞HaCaT在高剂量54071 nmol/L形态没有发生变化,并且在量子点浓度为27 nmol/L 62n

关键词： CdSe/Zns QDs-545 CdSe/Zns QDs-605 A375,A375.s2,HaCaT细胞细胞毒性干预作用

硒化镉量子点对人黑素瘤细胞和正常表皮细胞的毒性

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第二军医大学学报 2010年第5期31卷 465-467页

作者：宋方茗郑红娄子洋第二军医大学药学院药物分析测试中心上海200433

目的通过cellcountingkit-8(CCK-8)检测不同粒径硒化镉(CdSe/ZnS)量子点对人恶性黑素瘤细胞A375、A375.s2以及正常人表皮细胞HaCaT的细胞毒性,研究硒化镉量子点对黑素瘤细胞生长的影响。方法分别取处于对数生长期的A375、A375.s2以及Ha... 详细信息

目的通过cellcountingkit-8(CCK-8)检测不同粒径硒化镉(CdSe/ZnS)量子点对人恶性黑素瘤细胞A375、A375.s2以及正常人表皮细胞HaCaT的细胞毒性,研究硒化镉量子点对黑素瘤细胞生长的影响。方法分别取处于对数生长期的A375、A375.s2以及HaCaT细胞铺入96孔板内,次日分别向铺有细胞的孔内加入浓度为162、81、54、40.5、27、10.125、4.05、2.025、1.0125nmol/L水溶性量子点(QDs)-605与QDs-545进行孵育,24h后每孔加入10μlCCK-8,测定2种硒化镉量子点对A375、A375.s2及HaCaT细胞增殖的影响。结果 CCK-8法显示,随着QDs-605与QDs-545浓度的增加,A375和A375.s2细胞存活率随之下降。不同浓度的QDs-605与QDs-545作用于A375、A375.s2细胞,24h后其细胞存活率均低于对照组(P<0.05,P<0.01),但是对HaCaT细胞没有抑制作用。结论硒化镉量子点对A375、A375.s2人黑素瘤细胞有一定的抑制作用,而对HaCaT正常人表皮细胞抑制作用不明显。

关键词：硒化镉量子点黑素瘤表皮细胞细胞增殖细胞毒性

从诊断到治疗：展望量子点在生物医学方面的研究进展

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国际生物医学工程杂志 2010年第2期33卷 109-111,117页

作者：宋方茗郑红娄子洋第二军医大学药学院分析测试中心上海200433

量子点因其具有独特的物理和化学性质（如激发光谱宽、发射光谱窄，而且可通过改变量子点内核心材料的尺寸大小对其发射光波长进行调频等）被作为一种新型的荧光标记物在生物医学中获得广泛使用。就量子点的光学特性及其在生物、医学等... 详细信息

量子点因其具有独特的物理和化学性质（如激发光谱宽、发射光谱窄，而且可通过改变量子点内核心材料的尺寸大小对其发射光波长进行调频等）被作为一种新型的荧光标记物在生物医学中获得广泛使用。就量子点的光学特性及其在生物、医学等方面的最新研究进展及应用前景进行简要综述，同时讨论了量子点存在的细胞毒性等主要问题。

关键词：量子点生物医学纳米微晶体应用细胞毒性

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医学教育改革中的翻转课堂

科教导刊 2017年第3Z期 93-95页

作者：宋方茗广西医科大学再生医学研究中心广西南宁530021

翻转课堂作为当下教育改革方法的热点之一,特别是它充分适应于当前移动数字生活时代背景。因此充分了解这种教学方式,为提高教育质量、扩大教育资源奠定了基础。

关键词：翻转课堂教育改革

PBL教学法在分析化学实验教学中的应用探讨

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教育教学论坛 2017年第22期 268-269页

作者：宋方茗广西医科大学再生医学研究中心广西南宁530021

对药学本科学生在分析化学实验教学中引入PBL教学法。结果显示能够有效地提高学生的学习主动能力以及提升对所学内容的兴趣,同时有利于学生在设计实验方面和动手操作方面的提高,从而有助于提升教学质量,并非常值得推广和实施。

关键词：分析化学 PBL教学应用

黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响

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中草药 2018年第4期49卷 879-884页

作者：余展鹏宋方茗蔡琰孟盈黄夏宁黄元姣广西医科大学生物化学与分子生物学教研室广西南宁530021 广西医科大学再生医学研究中心广西南宁530021 广西医科大学生命科学研究院广西南宁530021

目的研究黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其阻滞细胞周期和诱导凋亡的机制。方法通过CCK-8法和克隆形成实验检测黄芩素对CNE2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,荧光显微镜观察细胞形态改变,试剂... 详细信息

目的研究黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其阻滞细胞周期和诱导凋亡的机制。方法通过CCK-8法和克隆形成实验检测黄芩素对CNE2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,荧光显微镜观察细胞形态改变,试剂盒检测Caspase-3蛋白活性变化,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测P53、P21、CDK2、Caspase-3m RNA表达情况。结果黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖具有显著的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,与对照组比较,不同浓度的黄芩素作用于CNE2细胞48 h后,细胞出现典型的凋亡特征,并出现周期阻滞,Caspase-3活性增强,P53及其下游基因P21、Caspase-3 m RNA表达水平增高,CDK2 m RNA表达水平下降。结论黄芩素可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖,可能是通过上调P53表达诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期于S期。

关键词：黄芩素鼻咽癌凋亡细胞周期 P53

医学类高校多校区办学研究生教育及管理模式初探

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高教学刊 2022年第4期8卷 63-66页

作者：王闻楚蒋周凌宋方茗广西医科大学广西南宁530021 广西开放大学广西南宁530021

医学类高校一校多区对提高学校整体水平起着不可忽视的作用,不仅拓宽了教学科研空间,而且增强了地区影响力,有利于推动整个地域医疗卫生事业的发展。但是就研究生教育而言,尚存在管理运行模式滞后、科研资源分配不够均衡、思政教育欠缺... 详细信息

医学类高校一校多区对提高学校整体水平起着不可忽视的作用,不仅拓宽了教学科研空间,而且增强了地区影响力,有利于推动整个地域医疗卫生事业的发展。但是就研究生教育而言,尚存在管理运行模式滞后、科研资源分配不够均衡、思政教育欠缺等问题。文章以医学类高校多校区办学的研究生教育及管理模式为出发点,立足医学教育研究的特殊性和规律性,分析问题,提出相关的对策,全面保障各校区研究生培养均衡有效发展。

关键词：医学高校多校区研究生

雷帕霉素对LPS刺激RAW264.7细胞炎症因子TNF-α和IL-1β表达的影响

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现代免疫学 2013年第5期33卷 387-392页

作者：潘浩徐丽慧宋方茗王遥曾龙辉何贤辉欧阳东云暨南大学生命科学技术学院免疫生物学系广州510632 暨南大学生命科学技术学院细胞生物学系广州510632 广西医科大学药学院南宁530021

探讨雷帕霉素(RAPA)对LPS诱导的小鼠RAW 264.7巨噬细胞炎症因子表达的调节效应及可能机制。采用胞内细胞因子染色法检测炎症因子TNF-α和IL-1β的表达,以RT-PCR检测细胞因子mRNA水平,免疫印迹法检测mTOR底物(4E-BP1、p70S6K和AKT)及NF-... 详细信息

探讨雷帕霉素(RAPA)对LPS诱导的小鼠RAW 264.7巨噬细胞炎症因子表达的调节效应及可能机制。采用胞内细胞因子染色法检测炎症因子TNF-α和IL-1β的表达,以RT-PCR检测细胞因子mRNA水平,免疫印迹法检测mTOR底物(4E-BP1、p70S6K和AKT)及NF-κB的活化水平。结果显示,RAPA上调LPS诱导的细胞内TNF-α和IL-1β蛋白的表达,低浓度RAPA时上调效应更为显著。在mRNA水平,LPS+RAPA处理组与LPS刺激组相比,在LPS刺激1h和6h时,TNF-α和IL-1β的mRNA表达水平没有显著差异,低浓度RAPA预处理组与高浓度RAPA预处理组之间也没有明显差异。同时,LPS激活细胞内mTOR信号通路,RAPA处理可完全抑制p70S6K的活化(磷酸化),却上调4E-BP1和AKT的磷酸化,且低浓度RAPA的上调效应显著高于高浓度RAPA。此外,低浓度RAPA还上调LPS诱导NF-κB(p65)的活性。结果表明,RAPA浓度依赖性上调LPS激活的炎症因子表达可能与其差异调控mTOR下游底物和NF-κB信号通路有关。

关键词：雷帕霉素细菌脂多糖 RAW 264 7细胞细胞因子免疫调节

雪胆素乙对小鼠淋巴细胞体外活化及增殖的影响

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免疫学杂志 2013年第3期29卷 190-194页

作者：王遥刘坤鹏宋方茗潘浩徐丽慧欧阳东云何贤辉暨南大学生命科学技术学院免疫生物学系广州510630 广西医科大学药学院南宁530021 暨南大学生命科学技术学院细胞生物学系广州510630

目的分析雪胆素乙(Cucurbitacin IIb,CuIIb)对丝裂原刺激的小鼠淋巴细胞体外活化、增殖及促炎因子表达的影响,探讨其潜在的抗炎效应及作用机制。方法以WST法检测CuIIb对刀豆蛋白A(Con A)刺激的淋巴细胞增殖的作用,利用流式细胞术分析小... 详细信息

目的分析雪胆素乙(Cucurbitacin IIb,CuIIb)对丝裂原刺激的小鼠淋巴细胞体外活化、增殖及促炎因子表达的影响,探讨其潜在的抗炎效应及作用机制。方法以WST法检测CuIIb对刀豆蛋白A(Con A)刺激的淋巴细胞增殖的作用,利用流式细胞术分析小鼠淋巴细胞活化抗原CD69和CD25以及促炎因子肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)表达的影响。结果 CuIIb能明显抑制Con A刺激引起的淋巴细胞的增殖作用,并呈现剂量依赖性;经CuIIb处理后,T细胞早期活化标志分子CD69和中期活化分子CD25的表达受到明显抑制;同时,CuIIb以剂量依赖方式抑制Con A诱导的促炎因子TNF-α和IL-6在CD3+T细胞中的表达。结论 CuIIb对小鼠淋巴细胞的活化、增殖均具有明显抑制作用,同时减少炎症相关细胞因子的表达,提示其通过对适应性免疫的调控发挥抗炎效应。

关键词：雪胆素乙淋巴细胞 CD69 刀豆蛋白A 促炎因子