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乳腺癌细胞EGFR表达水平与长春瑞滨敏感度的相关性研究

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中国细胞生物学学报 2014年第3期36卷 343-348页

作者：宁永玲谢叶文陈洁周洪戚春建南京医科大学基础医学院南京210029 南京医科大学附属常州市第二人民医院常州213003

乳腺癌是较早开始个体化治疗的肿瘤之一。表皮细胞生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达与乳腺癌组织学分期、生长速度呈正相关,可作为乳腺癌患者预后的指标之一。临床上,长春瑞滨(Vinorelbine,NVB)主要作为耐药... 详细信息

乳腺癌是较早开始个体化治疗的肿瘤之一。表皮细胞生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达与乳腺癌组织学分期、生长速度呈正相关,可作为乳腺癌患者预后的指标之一。临床上,长春瑞滨(Vinorelbine,NVB)主要作为耐药性晚期乳腺癌的挽救性化疗药物,单药治疗亦具有一定疗效。该研究结果发现,乳腺癌组织EGFR表达与NVB的敏感性相关(P=0.001),而与紫杉醇、阿霉素及5-氟尿嘧啶无相关性。EGFR阴性乳腺癌细胞MDA-MB-435s对NVB耐药,而EGFR阳性细胞MCF-7则敏感,但是EGFR中和性抗体会降低敏感性。进一步研究发现,NVB会引起MCF-7表面EGFR表达上调,以及胞内ERK1/2激酶的磷酸化,且这一效应会被抗EGFR抗体部分抑制。研究结果表明,乳腺癌细胞对NVB的敏感性与膜表面EGFR表达水平相关,提示EGFR可作为NVB治疗敏感性的预测分子。

关键词：长春瑞滨表皮细胞生长因子受体乳腺癌

全葡聚糖颗粒促进肿瘤微环境驯化的小鼠树突状细胞成熟并抑制调节性T细胞分化

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细胞与分子免疫学杂志 2017年第9期33卷 1171-1176页

作者：白煜宁永玲周洪戚春建南京医科大学基础医学院江苏南京210029 南京医科大学附属常州市第二人民医院中心实验室江苏常州213164

目的体外模拟肿瘤微环境驯化免疫抑制性树突状细胞(TEDC),研究全葡聚糖颗粒(WGP)对其免疫功能的影响。方法采用重组小鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)法诱导C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC),同时加入白细胞介素10(IL-10)、转化生长... 详细信息

目的体外模拟肿瘤微环境驯化免疫抑制性树突状细胞(TEDC),研究全葡聚糖颗粒(WGP)对其免疫功能的影响。方法采用重组小鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)法诱导C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC),同时加入白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子β(TGF-β)共培养,诱导得到TEDC,再加入WGP激发2 d。磁珠分选出OT-Ⅱ小鼠淋巴结和脾脏中的CD4+T细胞,加入特异性抗原卵清蛋白(OVA),再与TEDC共培养。流式细胞术检测细胞的CD11c、CD86、CD40、CD80、MHC-Ⅱ的水平和CD4+FOXP3+调节性T细胞(Treg)的分化情况。实时荧光定量PCR检测TEDC的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-12p40、IL-10、IL-6、IL-4、TGF-β1 m RNA水平;ELISA检测TEDC培养上清中的TNF-α、IL-23、IL-12p70、IL-4水平。结果WGP可以上调TEDC表面MHC-Ⅱ、CD86、CD80和CD40的表达,提高TNF-α、IL-12p40、IL-6水平,降低TGF-β1水平;抑制其诱导CD4+FOXP3+T细胞分化能力。结论β-葡聚糖可以改变TEDC的成熟和分化状态,改善其免疫抑制功能。

关键词：全葡聚糖颗粒(WGP) 树突状细胞(DC) 调节性T细胞(Treg)

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肿瘤细胞外泌体在肿瘤免疫中的作用

中国免疫学杂志 2017年第2期33卷 305-307页

作者：张晓航张淑雯宁永玲戚春建南京医科大学附属常州市第二人民医院中心实验室常州213164

外泌体作为一种纳米级囊泡逐渐成为现在肿瘤免疫的研究热点。外泌体中含有大量的蛋白质、脂质、核酸等物质,在细胞间的信息传递中起着重要作用[1]。肿瘤细胞来源的外泌体（Tumor-derived exosome,TEX）不仅可以抑制宿主免疫应答,促进肿... 详细信息

外泌体作为一种纳米级囊泡逐渐成为现在肿瘤免疫的研究热点。外泌体中含有大量的蛋白质、脂质、核酸等物质,在细胞间的信息传递中起着重要作用[1]。肿瘤细胞来源的外泌体（Tumor-derived exosome,TEX）不仅可以抑制宿主免疫应答,促进肿瘤转移,在一定条件下也能够起到抗肿瘤免疫作用,因此探索肿瘤来源外泌体对免疫应答的影响及相关机制在肿瘤免疫治疗中具有重要意义。

关键词：肿瘤免疫治疗外泌体肿瘤细胞宿主免疫应答 exosome 信息传递细胞来源肿瘤转移

β-葡聚糖联合激发型抗CD40单克隆抗体对树突状细胞免疫功能影响的体外研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2020年第10期40卷 768-775页

作者：谢叶文丁骏潘洁陈洁宁永玲戚春建常州市第二人民医院中心实验室 213614

目的探讨β-葡聚糖联合激发型抗CD40单克隆抗体(5C11)对树突状细胞(DCs)的作用及分子机制。方法采用密度梯度离心法从健康人新鲜的浓缩白细胞中分离出单个核细胞,使用GM-CSF和IL-4细胞因子法诱导培养未成熟DCs,经不同刺激方式(5C11、β... 详细信息

目的探讨β-葡聚糖联合激发型抗CD40单克隆抗体(5C11)对树突状细胞(DCs)的作用及分子机制。方法采用密度梯度离心法从健康人新鲜的浓缩白细胞中分离出单个核细胞,使用GM-CSF和IL-4细胞因子法诱导培养未成熟DCs,经不同刺激方式(5C11、β-葡聚糖、5C11+β-葡聚糖)激发后,流式细胞术检测不同组DCs表面共刺激分子CD40、CD80、CD83、CD86和MHCⅡ类分子HLA-DR的表达,ELISA法检测IL-12、IL-6、TNF-α、IL-10等相关细胞因子的表达,Western blot检测MAPK信号通路中相关蛋白质的磷酸化水平。结果β-葡聚糖能够显著诱导CD40在DCs表面的表达(P<0.05),联合5C11后,其他表面分子CD80、CD83、CD86的表达进一步显著上调,尤其对DCs成熟的重要标志分子CD83的上调表现出强烈的协同效应(P<0.01);ELISA检测结果显示β-葡聚糖联合5C11可以诱导DCs大量分泌IL-12、IL-6、TNF-α等促炎因子,对发挥DCs功能的关键因子IL-12的分泌表现出协同效应(P<0.01);Western blot结果显示p38 MAPK、p44/42 MAPK的磷酸化水平显著上升,且磷酸化时间提前,维持时间也延长(P<0.01)。结论β-葡聚糖联合5C11可协同促进DCs的成熟并提高DCs的免疫功能,为肿瘤DCs疫苗的制备方案提供了新思路。

关键词： β-葡聚糖树突状细胞激发型抗CD40单克隆抗体

全葡聚糖颗粒对DC诱导CD4^+T细胞向Th17细胞分化的影响

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免疫学杂志 2020年第6期36卷 504-509页

作者：谢叶文宁永玲潘洁陈洁戚春建南京医科大学附属常州市第二人民医院中心实验室常州213164

目的研究全葡聚糖颗粒(whole glucan particle,WGP)对DC诱导CD4^+T细胞向Th17细胞分化的影响。方法采用重组小鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)法诱导C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)。用MACS磁珠分选法对OT-Ⅱ小鼠的脾脏和淋巴结中C... 详细信息

目的研究全葡聚糖颗粒(whole glucan particle,WGP)对DC诱导CD4^+T细胞向Th17细胞分化的影响。方法采用重组小鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)法诱导C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)。用MACS磁珠分选法对OT-Ⅱ小鼠的脾脏和淋巴结中CD4^+T细胞进行纯化,加入特异性抗原卵清蛋白(OVA),与DC共培养。实验分组为:CON组、WGP组、TGP-β组、WGP+TGF-β组,培养5 d后,利用流式细胞术(FCM)检测各组中CD4^+T细胞增殖和Th17细胞变化情况,ELISA检测各组细胞上清液中IL-17A的含量,Q-PCR检测各组细胞中Th17细胞核转录因子维甲酸孤儿受体-γt(retinoid-related orphan receptor-γt,ROR-γt)mRNA表达水平。结果TGF-β可以促进DC诱导CD4^+T细胞向Th17分化,而经WGP激发后,T细胞显著下调ROR-γt的转录水平,并减少对IL-17A的分泌。结论WGP显著抑制TGF-β诱导CD4+T细胞向Th17细胞分化。

关键词：全葡聚糖颗粒 DC细胞转化生长因子-β Th17细胞

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肺癌生物治疗新进展

江苏医药 2008年第7期34卷 727-729页

作者：王勇钱科卿张科宁永玲时宏珍南京医科大学附属常州第二人民医院心胸外科常州213003 南京医科大学附属常州第二人民医院肿瘤科常州213003 南京得康生物技术有限公司

对于晚期肺癌患者,常规治疗有一定局限性,疗效也很不尽如人意。近几年,以靶向治疗、基因治疗、树突状细胞肿瘤疫苗(DC肿瘤疫苗)等为代表的生物技术与产品在肺癌临床研究与应用中取得可喜进展,本文综述肺癌生物治疗领域的新进展,为肺癌... 详细信息

对于晚期肺癌患者,常规治疗有一定局限性,疗效也很不尽如人意。近几年,以靶向治疗、基因治疗、树突状细胞肿瘤疫苗(DC肿瘤疫苗)等为代表的生物技术与产品在肺癌临床研究与应用中取得可喜进展,本文综述肺癌生物治疗领域的新进展,为肺癌的综合治疗提供先进的理念与工具。

关键词：肺癌患者生物治疗肺癌临床研究肿瘤疫苗树突状细胞常规治疗靶向治疗基因治疗

lncRNA12753在β-葡聚糖诱导小鼠树突状细胞成熟中的作用

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中国免疫学杂志 2021年第16期37卷 1921-1926页

作者：苏明明沈凯丁骏宁永玲戚春建(指导) 南京医科大学附属常州市第二人民医院中心实验室肿瘤研究所常州213164

目的:研究lncRNA12753在β-葡聚糖诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)成熟和免疫应答中的作用及可能机制。方法:通过转录组测序和实时定量PCR,研究经β-葡聚糖诱导成熟的DC中差异表达的lncRNA;转染小干扰RNA(siRNA)敲低lncRNA12753的表达;... 详细信息

目的:研究lncRNA12753在β-葡聚糖诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)成熟和免疫应答中的作用及可能机制。方法:通过转录组测序和实时定量PCR,研究经β-葡聚糖诱导成熟的DC中差异表达的lncRNA;转染小干扰RNA(siRNA)敲低lncRNA12753的表达;流式细胞术检测DC表面主要组织相容性复合体Ⅱ(MHCⅡ)及共刺激分子CD86、CD80和CD40等的表达;ELISA检测DC培养上清液中细胞因子TNF-α、IL-12、IL-6和IL-10等的水平;OT-Ⅱ转基因小鼠T细胞共培养检测DC诱导抗原特异性CD4^(+)T细胞增殖和分化的方向。结果:经β-葡聚糖诱导成熟后,DC中lncRNA12753水平显著上调;敲低lncRNA12753表达后,成熟DC表面MHCⅡ分子表达下调,同时降低Th1细胞因子IL-12的分泌,而增加Th2细胞因子IL-10的产生。进一步研究发现下调lncRNA12753会制约DC诱导OVA特异性CD4+T细胞的增殖和IFN-γ+Th1细胞分化的能力。String蛋白相互作用网络分析结果表明,lncRNA12753调节DC免疫功能可能是通过IRF7来实现的。结论:lncRNA12753参与了β-葡聚糖诱导的DC成熟,通过调节DC抗原提呈分子MHCⅡ的表达和Th1细胞极化细胞因子的分泌影响其诱导CD4+T细胞的增殖和分化。

关键词： lncRNA12753 β-葡聚糖树突状细胞 T细胞分化

三基序蛋白23在树突状细胞分化成熟中的调控作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2023年第4期43卷 285-293页

作者：丁骏段雪含谢叶文潘洁夏蕾宁永玲何树燕戚春建南京医科大学附属常州市第二人民医院中心实验室常州213614 南通大学附属江阴医院肿瘤科无锡214400

目的探讨三基序蛋白23(tripartite motif-containing 23, Trim23)对树突状细胞分化成熟的影响及相关作用机制。方法采用FMS样酪氨酸激酶3配体(FMS-like tyrosine kinase 3 ligand, Flt3L)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells, BMDCs), 经脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激发后, 荧光定量PCR及Western blot检测BMDCs中Trim23的表达。构建Trim23过表达载体并转染BMDCs, pcDNA3.1空载体作为对照组。经LPS激发后, 流式细胞术检测BMDCs表面分子CD80、CD86、CD40以及MHCⅡ的表达, ELISA检测培养上清中细胞因子IL-12p40、TNF-α、IL-6、IL-10的含量;磁珠分选出OT-Ⅰ和OT-Ⅱ小鼠脾脏和淋巴结中的CD8^(+)和CD4^(+)T细胞, 加入特异性抗原卵清蛋白(ovalbumin, OVA), 与LPS激发的BMDCs共培养。流式细胞术检测不同转染组BMDCs诱导CD8^(+)或CD4^(+)T细胞增殖分化的方向。Western blot检测BMDCs内p38、ERK1/2、AKT蛋白的磷酸化水平。构建缺失RING结构域或ARF结构域的两个Trim23短截体(Trim23 ΔRING和Trim23 ΔARF), 将Trim23、Trim23 ΔRING、Trim23 ΔARF载体分别转染BMDCs, 经LPS激发后, 流式细胞术及ELISA检测BMDCs表面分子及细胞因子的表达水平。结果经LPS激发后, BMDCs中Trim23表达水平显著下调;过表达Trim23后, 其表面分子MHCⅡ、CD86、CD80的表达及细胞因子TNF-α、IL-6的分泌均显著下降;与T细胞共培养结果显示, 过表达Trim23可显著抑制BMDCs诱导CD4^(+)T细胞增殖分化以及诱导CD8^(+)T细胞增殖的能力;Western blot结果显示, 过表达Trim23的BMDCs中p38和ERK1/2的磷酸化水平明显降低。与Trim23组比较, RING结构域的缺失显著逆转了过表达Trim23对LPS诱导的BMDCs表面分子MHCⅡ、CD86及细胞因子TNF-α、IL-6表达水平的抑制作用。结论过表达Trim23能够抑制BMDCs的分化成熟及免疫活化功能, 其作用机制可能依赖于MAPK信号通路及Trim23的RING功能域, 本研究将为靶向Trim23提高肿瘤树突状细胞疫苗的免疫应答效应提供实验参考。

关键词：树突状细胞 Trim23 功能域免疫功能

鸟苷酸结合蛋白2调控β-葡聚糖诱导的小鼠树突状细胞成熟

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细胞与分子免疫学杂志 2017年第9期33卷 1153-1159页

作者：张淑雯冯同保宁永玲张晓航戚春建南京医科大学附属常州市第二人民医院中心实验室肿瘤研究所江苏常州213000

目的研究鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)对树突状细胞(DC)成熟和功能的影响。方法通过基因芯片和实时定量PCR研究β-葡聚糖诱导的DC基因的变化情况,转染GBP2小干扰RNA(si RNA),敲低GBP2的表达,流式细胞术检测DC表面CD11c、主要组织相容性复合体... 详细信息

目的研究鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)对树突状细胞(DC)成熟和功能的影响。方法通过基因芯片和实时定量PCR研究β-葡聚糖诱导的DC基因的变化情况,转染GBP2小干扰RNA(si RNA),敲低GBP2的表达,流式细胞术检测DC表面CD11c、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)、CD80水平,ELISA检测细胞上清中白细胞介素6(IL-6)、IL-12p70、TNF-α和IL-10水平。T细胞增殖实验检测全葡聚糖颗粒(WGP)刺激的成熟DC在转染GBP2-si RNA后,对卵清蛋白(OVA)特异性CD4+T细胞的促增殖效应。结果β-葡聚糖诱导后,DC的GBP2 m RNA水平显著降低;敲低DC的GBP2水平后,其表面CD11c、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)、CD80水平降低,同时,IL-6、IL-12、TNF-α分泌下降;经WGP刺激的成熟DC在转染GBP2-si RNA后,对OVA特异性CD4+T细胞的促增殖效应降低。结论 GBP2能调控β-葡聚糖诱导的DC成熟,进一步抑制T细胞的增殖。

关键词： β-葡聚糖树突状细胞鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)