检索结果-南通市图书馆

加快仪器设备更新,推进生物化学实验教学创新发展

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基础医学教育 2024年第6期26卷 486-490页

作者：李梦瑶杨旭东宁启兰武丽涛西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系西安710061

随着科学技术的逐步发展,各种实验设备也在不断更迭。先进的实验设备在推动科学进步的同时,也在培养学生的实验动手能力、数据分析能力和创新科研能力中发挥着重要的作用。另一方面,先进设备的引进,极大助力了新型实验的开展。近几年,... 详细信息

随着科学技术的逐步发展,各种实验设备也在不断更迭。先进的实验设备在推动科学进步的同时,也在培养学生的实验动手能力、数据分析能力和创新科研能力中发挥着重要的作用。另一方面,先进设备的引进,极大助力了新型实验的开展。近几年,生物化学实验室通过更新多种仪器设备,在实验教学过程中为学生提供了更加准确和稳定的实验结果,加强了学生对理论知识的理解和掌握,在培养学生的实验能力上取得了良好的教学实践。另外,在更新和引进新设备的同时,生物化学实验教学平台也在不断推进生物化学创新实验的开展,促进生物化学实验教学改革。综上所述,仪器设备的更新和引进在医学实验教育、科技创新人才培养以及推进实验教学改革中起到了不可替代的作用。

关键词：生物化学实验教学教学改革设备更新人才培养

EGFR siRNA序列的筛选及其对HepG2细胞活性的影响

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分子诊断与治疗杂志 2024年第5期16卷 935-939,944页

作者：许楠杨旭东薛丽宁启兰王慧莲耿燕西安交通大学第二附属医院医学检验科陕西西安710004 西安交通大学医学部遗传与分子生物学系陕西西安710061

目的构建EGFR shRNA重组真核表达载体,并筛选抑制效果最好的EGFR shRNA序列。方法应用在线工具设计人EGFR siRNA序列,采用限制性内切酶BamHI和HindIII切割真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建三种人EGFR的siRNA干扰序列载体(psilencer 4.1-CMV... 详细信息

目的构建EGFR shRNA重组真核表达载体,并筛选抑制效果最好的EGFR shRNA序列。方法应用在线工具设计人EGFR siRNA序列,采用限制性内切酶BamHI和HindIII切割真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建三种人EGFR的siRNA干扰序列载体(psilencer 4.1-CMV neo-EGFR siRNA)。将重组质粒载体转化大肠杆菌DH5α感受态并筛选阳性克隆,通过DNA测序鉴定重组质粒。应用脂质体lipo2000将三种人EGFR siRNA干扰序列载体转染到HepG2细胞,通过荧光显微镜观察转染效率,实时定量PCR检测EGFR mRNA表达水平,MTT法检测细胞活性。结果Psilencer 4.1-CMV neo-EGFR siRNA重组质粒被成功克隆。EGFR shRNA-1、EGFR shRNA-2和EGFR shRNA-3敲低EGFR mRNA的效率分别是80%、60%和70%以上。shRNA-2和shRNA-3使细胞活性分别下降50%(P0.05)。结论重组psilencer 4.1-CMV neo-EGFR siRNA质粒可下调肝癌细胞株EGFR表达水平和细胞活性。EGFR shRNA-3较EGFR shRNA-1和shRNA-2对HepG2细胞的抑制作用更显著。

关键词：基因治疗肝癌 HepG2 EGFR 小干扰RNA

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实验教学中醋酸纤维素薄膜电泳的条件优化

南阳师范学院学报 2024年第1期23卷 74-78页

作者：武丽涛李梦瑶宁启兰吴锋杨旭东闫小飞蒋小英蒋晓刚李冬民西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系陕西西安710061 西安交通大学医学研究生教学实验中心陕西西安710061

醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白是生物化学实验课中的一项基础实验技术。目前,诸多医学院校基础医学及生物学专业均开设了此项实验。但是由于实验方法的不同,且实验过程中的影响因素较多,学生获得的实验结果也存在多种问题。经过多年... 详细信息

醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白是生物化学实验课中的一项基础实验技术。目前,诸多医学院校基础医学及生物学专业均开设了此项实验。但是由于实验方法的不同,且实验过程中的影响因素较多,学生获得的实验结果也存在多种问题。经过多年实验教学探索,西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物系实验教学团队优化了醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白的实验方案,增强了实验教学内容的互动性,确保了实验结果的稳定性,使学生更好地掌握了水平电泳分离蛋白质的理论知识并获得了成功的实验验证。

关键词：生物化学实验教学醋酸纤维素薄膜电泳血清蛋白的分离

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大型仪器实验平台助力实验教学及未来发展

基础医学教育 2024年第3期26卷 265-269页

作者：武丽涛杨旭东宁启兰李梦瑶蒋小英闫小飞李亚昭蓝茜郑芳李冬民西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系西安710061 西安交通大学第一附属医院转化医学中心

大型仪器实验平台在基础医学实验教学中扮演着至关重要的角色,为培养创新型医学人才提供了有力支持。随着高精度、高准确度的实验设备和先进的实验技术的引入,大型仪器实验平台提供了高质量的实验教学,从而帮助学生掌握前沿的医学及生... 详细信息

大型仪器实验平台在基础医学实验教学中扮演着至关重要的角色,为培养创新型医学人才提供了有力支持。随着高精度、高准确度的实验设备和先进的实验技术的引入,大型仪器实验平台提供了高质量的实验教学,从而帮助学生掌握前沿的医学及生物学知识和技能。同时,平台协同加强了师资队伍建设,实验室技术人员也进一步提升了专业技能,以确保设备的正常运行和实验教学的顺利开展。文章主要探讨了大型仪器实验教学平台在本科生实验教学中的意义、应用现状以及未来的发展方向,以期更好地提高本科实验教学的质量和效果,助力创新型医学现代化人才的培养。

关键词：基础医学大型仪器实验教学教学优化人才培养

靶向巨噬细胞膜蛋白Vsig4特异性纳米抗体的构建和筛选

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西安交通大学学报（医学版） 2017年第1期38卷 7-12页

作者：郑芳罗思羽韩燕宁启兰温玉荣西安交通大学医学部基础医学院西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室陕西西安710061 西安交通大学生命科学与技术学院陕西西安710049

目的构建V-set and immunoglobulin domain containing 4(Vsig4)特异性纳米抗体,以期作为巨噬细胞的分子探针。方法用Vsig4重组蛋白对羊驼进行免疫,分离血液中的淋巴细胞,利用噬菌体展示技术,构建噬菌体展示文库,经过连续3次生物淘筛获... 详细信息

目的构建V-set and immunoglobulin domain containing 4(Vsig4)特异性纳米抗体,以期作为巨噬细胞的分子探针。方法用Vsig4重组蛋白对羊驼进行免疫,分离血液中的淋巴细胞,利用噬菌体展示技术,构建噬菌体展示文库,经过连续3次生物淘筛获得与Vsig4蛋白结合的噬菌体,经测序和基因比对所得VHH序列,用ELISA法筛选出抗Vsig4的高亲和力纳米抗体,并用Vsig4稳定表达细胞系验证纳米抗体的结合能力。结果成功构建了插入率为70%、库容量为7.27×107的噬菌体表达文库,经过克隆筛选获得136个Vsig4阳性单克隆,经测序获得15个不同的VHH基因,将这些基因克隆至原核表达体系,表达和纯化后获得了高纯度的Vsig4纳米抗体,其中Nb119的亲和力最高,并且可以与Vsig4稳定表达细胞系结合。结论成功构建并筛选了特异性、高亲和力的Vsig4纳米抗体,以期用于检测巨噬细胞表面Vsig4的表达和构建特异性分子探针。

关键词： Vsig4 纳米抗体噬菌体展示文库生物淘筛亲和力鉴定

纤维蛋白原Bβ448基因多态性与冠心病及原发性高血压的相关研究

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中华血液学杂志 2000年第11期21卷 601-602页

作者：曹春柏春梅马西吴锋宁启兰车金西安交通大学第二附属医院血液科西安交通大学西区实验血液学研究室

前,关于纤维蛋白原(Fg)Bβ 448多态性与心血管疾病相关性的研究还很少.本研究的目的是探测中国汉族人群是否存在Fg Bβ 448基因多态性,以及它与冠心病及原发性高血压的相关性.对象和方法1 研究对象1.1 冠心病(CHD)组:34例(包括陈旧性心... 详细信息

前,关于纤维蛋白原(Fg)Bβ 448多态性与心血管疾病相关性的研究还很少.本研究的目的是探测中国汉族人群是否存在Fg Bβ 448基因多态性,以及它与冠心病及原发性高血压的相关性.对象和方法1 研究对象1.1 冠心病(CHD)组:34例(包括陈旧性心肌梗死6例,心绞痛28例),男18例,女16例,年龄42～79岁[(59.8±8.9)岁].按WHO制定的标准经临床、心电图、冠状动脉造影确定诊断.采血时均为心绞痛稳定期或急性心肌梗死后至少2个月.1.2 原发性高血压(EH)组:67例(均为Ⅰ、Ⅱ期),男35例,女32例,年龄32～86岁[(57.6±11.1)岁].按WHO制定的标准确定诊断.

关键词：冠心病原发性高血压 FgBβ448多态性相关研究

含人谷胱苷肽过氧化物酶基因重组腺病毒的构建

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西安交通大学学报（医学版） 2013年第1期34卷 7-10页

作者：宁启兰许楠王慧莲西安交通大学医学院遗传与分子生物学系陕西西安710061

目的构建含人谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)基因的重组腺病毒载体,为基因治疗提供一种新的方法。方法从人血中分离出白细胞,提取总RNA,采用RT-PCR法获得人GPx-1和人GPx-2的全长cDNA,克隆到pcD-NA3.1+中,构建pcDNA3.1+GPx-1和pcDNA3.1+GPx-... 详细信息

目的构建含人谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)基因的重组腺病毒载体,为基因治疗提供一种新的方法。方法从人血中分离出白细胞,提取总RNA,采用RT-PCR法获得人GPx-1和人GPx-2的全长cDNA,克隆到pcD-NA3.1+中,构建pcDNA3.1+GPx-1和pcDNA3.1+GPx-2载体,酶切和基因测序鉴定阳性克隆;采用酶切法把GPx-1和GPx-2基因克隆至入门载体pENTR1A中,构建pENTR1A-GPx-1和pENTR1A-GPx-2载体。采用LR反应,体外重组pENTR1A-GPx-1或pENTR1A-GPx-2和pAd/CMV/V5-DEST,得重组腺病毒表达载体pAd/CMV/V5-DEST-GPx-1和pAd/CMV/V5-DEST-GPx-2。PCR和序列测定鉴定重组腺病毒载体。293A细胞中包装和扩增GSH-Px-1和GSH-Px-2的重组腺病毒。结果获得GSH-Px-1和GSH-Px-2的重组腺病毒载体和重组腺病毒。结论成功构建了pAd/CMV/V5-DEST-GPx-1和pAd/CMV/V5-DEST-GPx-2重组腺病毒载体,并在293A中获得该重组腺病毒,为进一步研究人GSH-Px基因在基因治疗中的作用奠定了基础。

关键词：重组腺病毒谷胱苷肽过氧化物酶(GSH—Px) 活性氧基因治疗

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降植烷通过内质网应激诱导大鼠巨噬细胞自噬

西安交通大学学报（医学版） 2022年第3期43卷 368-372页

作者：朱文华韩燕宁启兰张富军孟列素吕社民西安交通大学基础医学院生物化学与分子生物学系陕西西安710061 西安交通大学分子转化医学研究所陕西西安710061 环境与疾病相关基因教育部重点实验室陕西西安710061

目的探讨佐剂降植烷诱导自噬增强的确切机制。方法构建降植烷刺激的大鼠巨噬细胞系模型;Western blotting检测细胞模型能量代谢分子腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及内质网应激通路真核起始因子2α(eIF2α)和... 详细信息

目的探讨佐剂降植烷诱导自噬增强的确切机制。方法构建降植烷刺激的大鼠巨噬细胞系模型;Western blotting检测细胞模型能量代谢分子腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及内质网应激通路真核起始因子2α(eIF2α)和肌醇依赖酶1α(IRE1α)的表达与活化,及转录因子EB(TFEB)的表达及入核情况;采用二硫苏糖醇(DTT)、4-苯基丁酸(4-PBA)调控细胞内质网应激水平并观察对mTOR表达和细胞自噬的影响。结果降植烷刺激的NR8383细胞模型中,eIF2α在刺激0.5 h活化,mTOR表达在刺激后1、3 h较对照组(0 h)显著降低,AMPK及IRE1α无明显变化。降植烷刺激的NR8383细胞模型的mTOR表达下调,在4-PBA干预时表达回升,而增强的LC3-II表达受到抑制;在DTT干预细胞模型时,mTOR表达则进一步下调,同时LC3-II表达则更高。降植烷诱导细胞的TFEB表达升高并活化入核。结论降植烷可能通过诱导内质网应激实现巨噬细胞自噬增强。

关键词：降植烷油性佐剂内质网应激自噬巨噬细胞

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定点突变法显示在高龄SHR大鼠心脏组织中KCNE2第98位氨基酸可能存在磷酸化修饰

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浙江大学学报（医学版） 2007年第4期36卷 364-370页

作者：王慧莲吕社民宁启兰杨旭东韩燕钟波 Gea-Ny TSENG 西安交通大学医学院遗传与分子生物学系佛吉尼亚联邦大学生理学系美国Richmond VA23298

目的:探究在高龄SHR大鼠心室膜蛋白中,KCNE2蛋白是否发生了磷酸化修饰。方法:用碱性磷酸酶处理高龄SHR大鼠心室膜蛋白,以抗KCNE2的抗体(Ab2)为一抗进行免疫印迹;将在蛋白离体系统中翻译出的含c-myc的KCNE2融合蛋白经碱性磷酸酶处理后,... 详细信息

目的:探究在高龄SHR大鼠心室膜蛋白中,KCNE2蛋白是否发生了磷酸化修饰。方法:用碱性磷酸酶处理高龄SHR大鼠心室膜蛋白,以抗KCNE2的抗体(Ab2)为一抗进行免疫印迹;将在蛋白离体系统中翻译出的含c-myc的KCNE2融合蛋白经碱性磷酸酶处理后,分别以Ab2和抗c-myc的抗体为一抗的免疫印迹;以及一系列的c-myc-hKCNE2的单点(KCNE2Y96F和KCNE2S98A)和双点突变(KCNE2Y96F/S98A)实验。结果:高龄SHR大鼠心室膜蛋白样品经碱性磷酸酶处理后,极大地减弱了Ab2对KCNE2蛋白的识别能力;另外,蛋白离体系统中翻译出的含c-myc的KCNE2融合蛋白经碱性磷酸酶处理后,虽然极大地减弱了Ab2对其融合蛋白的识别能力,却没有影响抗c-myc抗体对KCNE2融合蛋白的识别能力。定点突变的结果显示,虽然以抗c-myc抗体为一抗的免疫印迹结果显示,蛋白质离体翻译系统成功地翻译出了单突变子KCNE2S96A及双突变子KCNE2Y96F/S98A蛋白,但不论样品被碱性磷酸酶处理与否,Ab2在这些样品中均检测出很弱的KCNE2蛋白免疫条带。结论:在高龄SHR大鼠心室组织中,KCNE2第98位丝氨酸可能发生了磷酸化修饰。然而该位点的磷酸化修饰是否会通过影响心脏的电生理,而在SHR大鼠心脏病变过程中起着一定的作用,有待于从电生理的水平上进一步研究。

关键词：磷酸化点突变心脏 Q—T延长综合征钾通道 KCNE2蛋白大鼠,近交SHR