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水牛—猪异种体细胞核移植

水牛—猪异种体细胞核移植

作者：孙如玉广西大学

学位级别：硕士

水牛-猪异种体细胞核移植(iSCNT)是指将水牛体细胞注射到猪去核卵子中,通过激活、培养等步骤观察其后续发育情况。异种体细胞核移植对于研究核-质互作、细胞核重编程等机制提供很好的理论依据,利用异种体细胞核移植还可以保护濒临灭绝... 详细信息

水牛-猪异种体细胞核移植(iSCNT)是指将水牛体细胞注射到猪去核卵子中,通过激活、培养等步骤观察其后续发育情况。异种体细胞核移植对于研究核-质互作、细胞核重编程等机制提供很好的理论依据,利用异种体细胞核移植还可以保护濒临灭绝的珍稀物种,尤其对于卵母细胞不易获得的物种,近年来异种核移植还用来作为人类器官移植的供体,以猪卵子作为受体结合转基因技术生产与人类器官相似的组织,研究人类疾病发病机理及解决方法。本实验采用不同的融合液组分,研究钙离子浓度对本实验条件下猪同种核移植发育的影响;筛选最适合水牛-猪异种核移植胚胎发育的激活条件,此外,探究了培养滴体积与胚胎个数的比例对于其发育的效果,并坚定了水牛-猪异种核移植。本实验的结果如下：1.不同激活电压对水牛-猪异种核移植发育的影响：采用1.0mM的融合激活液,分别采用120v/mm,150v/mm,180v/mm的电场强度,30us、2DC的激活参数。结果发现电场强度对胚胎发育的作用没有统计学上的差异。2.不同融合激活方法对水牛-猪异种核移植发育的影响：采用电融合激活与电融合后化学激活(离子霉素+6--DMAP)的方法,这两种方法对水牛-猪异种体细胞核移植发育没有差异。3.培养滴体积与胚胎个数的比例对其发育的效果：不同重构胚个数放在20ul大小的PZM-3中培养,对异种核移植发育没有影响。4.转基因水牛-猪异种核移植发育的鉴定：采用转染了绿色荧光蛋白的转基因水牛体细胞进行核移植结果发现各个时期的胚胎均可观察到绿色荧光,表明水牛-猪异种核移植可以在体外发育到囊胚。综上得出结论：水牛-猪异种核移植胚胎可以在体外培养发育到囊胚阶段,但是本实验未发现融合激活方法、重构胚个数与培养滴体积比例等对胚胎发育存在统计学差异,且转基因异种核移植胚胎可以发育到囊胚。

关键词：异种体细胞核移植水牛猪转基因

DPF2/BAF45D在成体小鼠脑组织神经发生区和人胰腺癌组织中的表达研究

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DPF2/BAF45D在成体小鼠脑组织神经发生区和人胰腺癌组织中的表达...

作者：孙如玉安徽医科大学

学位级别：硕士

【研究背景】DPF2,又被称为REQ(Requiem),UBID4,ubi-d4,BAF45D。目前的研究资料显示,DPF2基因定位于小鼠Chr 19和人11q13.1,属于新型Krüppel型锌指蛋白d4蛋白家族,还属于SWI/SNF(switch/sucrose nonfermentable complex)复合物(在哺乳动物中又名BAF复合物)亚基之一。DPF2在哺乳动物组织中普遍表达,目前在神经及神经干细胞、肿瘤及肿瘤干细胞等的研究中占有一定的地位。DPF2已知在小鼠胚胎脑组织中表达,在中枢神经系统(CNS)发育和神经分化中起重要作用,但目前在成体鼠脑神经发生区中的表达、分布和作用尚无充分的研究。OCT4被公认是人干细胞的核心调控基因,本课题组发现DPF2可调节OCT4蛋白水平和核分布,验证了其可能在人干细胞的分化中起作用。鉴于DPF2在人干细胞中的表现,其在肿瘤干细胞中是否起类似作用,尚无文献报道。DPF2基因位于染色体11q13位置上,这一区域常与多种形式的肿瘤发生有密切关系。DPF2在神经胶质瘤中有表达,通过维持未分化的细胞状态可促成恶性神经胶质瘤表型;另外DPF2在白血病细胞扩增和自我更新起一定作用,并且抑制造血干/祖细胞和急性髓性白血病细胞的髓样分化,它的组蛋白结合在驱动髓样分化的转录程序中起着重要的调节作用。DPF2在实体肿瘤中的表达、分布和作用还有待深入研究。胰腺癌(Pancreatic cancer PC)是癌症高死亡率的主要原因之一,是一种预后不良的致命疾病。与大多数其他国家一样,中国胰腺癌的健康负担正在增加,年死亡率几乎与发病率相等。胰腺癌的早期诊断仍然很困难,因而寻找特异性的早期诊断和评估预后的标志物是降低胰腺癌死亡率、提高患者生活质量的关键。目前,临床上胰腺癌的筛查和诊断主要依靠一些肿瘤标志物检查,影像学以及影像学引导下的穿刺活检,这些远不能满足医患的期望,因此有必要寻找新的肿瘤标志物。【研究目的】本课题一方面通过采集C57成年小鼠脑组织,分辨鼠脑神经发生区解剖结构,研究DPF2在成年小鼠脑中神经发生区的表达规律。另一方面收集人胰腺癌标本,检测DPF2在人胰腺癌组织中的表达。再检测DPF2在人胰腺癌细胞系PANC-1细胞中的表达情况。【研究方法】1.通过免疫组织化学和免疫荧光技术检测DPF2在成体小鼠脑中神经发生区的表达。2.通过细胞培养及细胞免疫荧光技术检测DPF2在人胰腺癌细胞系PANC-1细胞中的表达情况。3.通过免疫组织化学和免疫荧光技术检测DPF2在人胰腺正常组织、良性肿瘤组织、肿瘤性变组织和癌组织中的表达。4.通过Western blot技术检测DPF2在在人胰腺正常组织、良性肿瘤组织、肿瘤性变组织和癌组织中的表达。【结果】***2在成年小鼠海马齿状回(DG)的颗粒下区(SGZ)中表达。***2和GFAP在成年小鼠海马齿状回(DG)的颗粒下区(SGZ)中共表达。***2和GFAP在成年小鼠脑室(LV)的室管膜细胞中共表达。***2优先在成年小鼠脑的成熟神经元中表达。***2在人胰腺癌细胞系PANC-1细胞中高表达。***染色鉴别人胰腺正常组织和胰腺癌组织,胰腺正常组织结构清晰,内外分泌部分界明显,在放大的图中胰岛、胰腺腺泡、小叶内导管结构完整,细胞极性良好,细胞及细胞核大小较均一;而胰腺癌组织中胰腺的正常组织结构异形,紊乱,消失,并伴随着结缔组织增生,细胞极性消失,细胞核分裂相增多,核大小不一。***2在人正常胰腺组织中有表达,DPF2免疫阳性率,内分泌部较外分泌部高;在人胰腺癌组织中,DPF2免疫阳性率明显高于正常胰腺组织。***2在正常胰腺组织中多表现为弱胞质定位,而在胰腺癌组织中多表现为核定位。【结论】DPF2在成年小鼠脑神经干细胞和神经元中表达丰富。DPF2在人胰腺癌组织中高表达,可能参与胰腺癌的发生发展。

关键词： DPF2 成年小鼠神经发生区胰腺癌 PANC-1细胞

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新时代中国共产党坚持胸怀天下的路径研究

新时代中国共产党坚持胸怀天下的路径研究

作者：孙如玉辽宁大学

学位级别：硕士

党的二十大报告把“坚持胸怀天下”从历史经验提升到习近平新时代中国特色社会主义思想的世界观和方法论,体现出中国共产党人的理论创新。在新时代背景下,面对国内外深刻复杂的发展变化,对这一世界观和方法论进行深入研究,一方面能够将... 详细信息

党的二十大报告把“坚持胸怀天下”从历史经验提升到习近平新时代中国特色社会主义思想的世界观和方法论,体现出中国共产党人的理论创新。在新时代背景下,面对国内外深刻复杂的发展变化,对这一世界观和方法论进行深入研究,一方面能够将其内含的价值理念展现给世界,让世界各国更加深入地了解中国共产党。另一方面通过整合和分析中国共产党坚持胸怀天下的相关内容,提出了一些实践观点,对中国共产党坚持胸怀天下具有一定的理论和方法指导。坚持胸怀天下的提出彰显了中国共产党致力于推动世界和平、促进人类共同进步的坚定信念,体现了中国共产党不仅是为中国人民谋幸福、为中华民族谋复兴,也是为人类谋进步,为世界谋大同的党。本文从四个方面对新时代中国共产党坚持胸怀天下的路径进行阐述和讨论。第一章绪论部分主要从本选题的研究目的与研究意义出发,在此基础上,分析了国内外学者对中国共产党坚持胸怀天下相关问题的研究现状,并通过归纳和总结,厘定了论文的研究方法,即文献分析法、史论结合法、跨学科分析法,概括了论文的主要创新之处,为后续研究提供了重要的理论来源。第二章阐述了新时代中国共产党坚持胸怀天下的基本理论问题。具体阐述了胸怀天下的基本内涵,并考察分析了各个历史时期胸怀天下的演进过程。在此基础上,中国共产党通过对马克思主义的坚持,从中华优秀传统文化中汲取精华,并站在人类历史发展规律的高度上对世界大势进行深刻把握,形成了胸怀天下的价值自觉。同时,结合党的初心使命、时代大势和人类发展大潮流阐释了新时代中国共产党坚持胸怀天下的逻辑必然。第三章分析了新时代中国共产党坚持胸怀天下的现状。在新时代背景下,中国共产党坚持胸怀天下既面临着机遇,也面临着挑战。中国发展的巨大成就、中国国际影响力的提升、西方国家主导的国际治理体系失灵以及信息网络时代的到来为中国共产党坚持胸怀天下提供了有利契机。但与此同时,党内存在的突出问题、逆全球化现象、不公的国际秩序以及全球治理难度的加大也一定程度上阻碍着中国共产党胸怀天下的实现。第四章探究了新时代中国共产党坚持胸怀天下的路径。在深刻分析中国共产党坚持胸怀天下面临的机遇和挑战的基础上,提出中国共产党坚持胸怀天下的路径,具体包括四个方面。一是要明确胸怀天下的原则立场,二是要夯实胸怀天下的思想立场,三是要筑牢胸怀天下的大局意识,四是要强化胸怀天下的责任担当,进一步为中国共产党继续创造更加美好的未来提供了方法论指导。

关键词：新时代中国共产党胸怀天下初心使命

DPF2基因RNA干扰对人胰腺癌细胞PANC-1增殖、凋亡和细胞周期的作用研究

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中国药理学通报 2017年第5期33卷 647-653页

作者：刘超孙如玉黄健刘丽华方圣云安徽医科大学基础医学院安徽合肥230032 安徽医科大学临床药理研究所安徽合肥230032 美国马里兰大学生物医学工程技术中心马里兰巴尔的摩21201

目的已知DPF2参与白血病以及肿瘤的发生,但是DPF2是否参与胰腺癌发生和进展还不清楚,因此观察了DPF2基因RNA干扰对胰腺癌细胞系PANC-1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用慢病毒介导的DPF2基因RNA干扰敲低PANC-1细胞的DPF2表达,... 详细信息

目的已知DPF2参与白血病以及肿瘤的发生,但是DPF2是否参与胰腺癌发生和进展还不清楚,因此观察了DPF2基因RNA干扰对胰腺癌细胞系PANC-1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用慢病毒介导的DPF2基因RNA干扰敲低PANC-1细胞的DPF2表达,通过克隆形成实验和MTT实验检测DPF2基因RNA干扰对PANC-1细胞增殖的作用,通过流式细胞术检测DPF2基因RNA干扰对PANC-1细胞凋亡和细胞周期的作用。结果慢病毒介导的DPF2基因RNA干扰中剂量和高剂量(2μL和4μL)使PANC-1细胞的DPF2表达明显降低。与阴性对照组比较,DPF2基因RNA干扰明显抑制PANC-1细胞活力和克隆形成,还促进PANC-1的凋亡。此外,DPF2基因RNA干扰引起细胞周期的S期阻滞,明显减少G2/M周期的细胞数量。结论 DPF2可能参与胰腺癌细胞PANC-1的增殖、凋亡过程和细胞周期的调控,通过慢病毒介导的DPF2基因RNA干扰敲低DPF2蛋白表达,可能为寻找潜在的抗胰腺癌的新方法提供实验依据。

关键词： DPF2 RNA干扰慢病毒 PANC-1 增殖凋亡细胞周期

基于小组合作的初中英语导学案的设计要点及实施策略

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中文科技期刊数据库（全文版）教育科学 2021年第10期 163-164,189页

作者：孙如玉广东省河源市龙川县新城初级中学广东河源517300

随着新课程改革的不断深入,传统的初中英语课堂教学模式发生了重大变化。以往教师的“一言堂”、“满堂灌”模式不仅忽视了学生主体性,而且逐渐削弱了学生学习英语的兴趣。但是目前,初中英语教学更强调培养学生的自学能力和合作探究能... 详细信息

随着新课程改革的不断深入,传统的初中英语课堂教学模式发生了重大变化。以往教师的“一言堂”、“满堂灌”模式不仅忽视了学生主体性,而且逐渐削弱了学生学习英语的兴趣。但是目前,初中英语教学更强调培养学生的自学能力和合作探究能力。导学案教学模式的引入不仅激发了学生学习英语的兴趣和动力,而且培养了学生的多元化思维和创造性思维,有助于实现以学生为中心的教学理念和高效的英语课堂。对此,本文主要从学习目标、课前、课中、课后、评价等几个方面入手,阐述了初中英语导学案的设计要点以及导学案在小组合作课堂中的相关实施策略。文中案例均出自人教版英语Go for it。

关键词：初中英语导学案小组合作课堂策略

互联网媒介对农户购买农业社会化服务的影响研究——基于中国家庭追踪调查(CFPS)数据的实证分析

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新媒体研究 2023年第18期9卷 17-22,47页

作者：韩家彬孙如玉辽宁工程技术大学工商管理学院

基于2016年与2018年两期中国家庭追踪调查(CFPS)数据,构建计量模型实证检验互联网媒介对农户购买农业社会化服务的影响及其机制。结果表明:与传统媒介相比,互联网媒介可以显著促进农户选择购买农业社会化服务,提高农户农业社会化服务购... 详细信息

基于2016年与2018年两期中国家庭追踪调查(CFPS)数据,构建计量模型实证检验互联网媒介对农户购买农业社会化服务的影响及其机制。结果表明:与传统媒介相比,互联网媒介可以显著促进农户选择购买农业社会化服务,提高农户农业社会化服务购买规模,在解决内生性问题后,此结论依然成立;机制分析发现,互联网媒介能够通过增加社会资本间接推动农户购买农业社会化服务;异质性分析发现,互联网媒介对中低收入水平农户购买农业社会化服务的促进作用更加明显。因此,政府应完善农村信息基础设施建设、构建专业农业社会化服务在线平台、开展差异化农村互联网信息技术培训,更好地推动小农经营方式向现代化转型。

关键词：互联网媒介社会资本农业社会化服务农户

供体细胞、去核方法以及TSA处理对巴马小型猪手工克隆胚胎发育的影响

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基因组学与应用生物学 2013年第3期32卷 296-302页

作者：苏克同燕志光孙如玉卢晟盛亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室广西大学动物科技学院南宁530005 广东湛江久和医院湛江524094

本文用不同的供体细胞、去核方法以及TSA处理浓度研究其对巴马小型猪手工克隆胚发育的影响,试验结果发现:克隆胚的发育率在相同代次的不同供体细胞之间,极体定向和化学辅助去核法之间均无显著性差异(p>0.05);TSA浓度为40nmol/L时克隆胚... 详细信息

本文用不同的供体细胞、去核方法以及TSA处理浓度研究其对巴马小型猪手工克隆胚发育的影响,试验结果发现:克隆胚的发育率在相同代次的不同供体细胞之间,极体定向和化学辅助去核法之间均无显著性差异(p>0.05);TSA浓度为40nmol/L时克隆胚的囊胚率最高,但与对照组相比无显著性差异(p>0.05)。这说明三种供体细胞均能支持巴马小型猪克隆胚的早期发育,化学辅助和极体定向去核法均为较好的去核方法。

关键词：供体类型去核方法 TSA 手工核移植巴马小型猪