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致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05 Pfs基因的克隆、功能序列分析及原核表达

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西北农业学报 2015年第12期24卷 30-34页

作者：郑婷婷齐亚银王熙楚孔科委周霞石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

采用PCR技术从致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05基因组中扩增得到甲硫腺苷/S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(Pfs)基因的全序列,对其功能序列进行分析,同时与其他细菌相应序列及编码的氨基酸进行同源性分析,构建该基因的原核表达载体,对表达蛋白进行反应... 详细信息

采用PCR技术从致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05基因组中扩增得到甲硫腺苷/S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(Pfs)基因的全序列,对其功能序列进行分析,同时与其他细菌相应序列及编码的氨基酸进行同源性分析,构建该基因的原核表达载体,对表达蛋白进行反应原性分析。结果显示:XJ05的Pfs基因全长696bp,与XJ01、XJ08、XJ11,与屎肠球菌TX 2466之间的同源性在99.1%以上,其中,XJ05与V583为100%,且关键的功能序列相同,与肺炎链球菌同源性在55.8%以上、霍乱弧菌同源性在55.0%以上;pfs基因编码231个氨基酸,XJ05、XJ01、XJ08、XJ11与肺炎链球菌、霍乱弧菌、粪肠球菌V583、屎肠球菌TX 2466的同源性在86.43%以上;构建的重组质粒经诱导后表达蛋白分子量为28ku,Western blot检测显示特异性条带。结果表明,表达的融合蛋白具有良好的反应原性。

关键词：粪肠球菌 Pfs基因序列分析原核表达

致羔羊脑炎粪肠球菌生物被膜形成能力及相关基因检测研究

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中国畜牧兽医 2017年第3期44卷 679-685页

作者：孔静雅郭强强孔科委李劼周霞齐亚银石河子大学动物科技学院石河子832000

为观察致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05株生物被膜(BF)的形成能力并检测致羔羊脑炎粪肠球菌BF形成相关基因的携带情况,本研究以XJ05为研究对象,运用96孔板建立不同时间BF模型,染色后酶标仪测定D595nm值,并用倒置显微镜观察BF形态。同时检测11株... 详细信息

为观察致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05株生物被膜(BF)的形成能力并检测致羔羊脑炎粪肠球菌BF形成相关基因的携带情况,本研究以XJ05为研究对象,运用96孔板建立不同时间BF模型,染色后酶标仪测定D595nm值,并用倒置显微镜观察BF形态。同时检测11株菌中与BF形成相关基因(gelE、esp、ace、asa1、asa373、efaA、ef0591、ef3314、ahrc、eep)的携带情况,并对相关基因片段做同源性分析。结果显示,在不同时间段XJ05株BF的生成量与空白对照组相比差异显著(P<0.05),24h时D595nm值最高且与其他各个时间段相比均差异显著(P<0.05)。显微镜下观察6h时BF初具规模,可见散落的网状结构,12~24h矩阵网格结构明显,24h时形成高度有序的网格结构,24h后网状结构逐渐脱落,BF开始降解。11株菌中10种相关基因的携带情况不同,有6株携带8种基因,1株携带7种基因,1株携带6种基因,1株携带2种基因,有2株未检测到10种基因的任何一种。检出的基因片段同源性均在93.3%~100.0%之间。结果表明,XJ05株能形成完整的BF,11株分离的致羔羊脑炎粪肠球菌中有9株携带部分与BF形成相关的基因。

关键词：粪肠球菌生物被膜生物被膜相关基因同源性分析

细菌生物被膜形成的影响因素及检测方法的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2018年第3期 44-48页

作者：孔静雅郭强强邬琴孔科委李劼齐亚银周霞石河子大学动物科技学院

细菌生物被膜(BBF)的存在大大增加了生物被膜(BF)内细菌的存活率和耐药性,生物被膜的研究已经成为研究细菌耐药机制及致病性的重要方向,了解细菌生物被膜形成中的影响因素及生物被膜的检测方法,对生物被膜的研究有重要意义。文章重点综... 详细信息

细菌生物被膜(BBF)的存在大大增加了生物被膜(BF)内细菌的存活率和耐药性,生物被膜的研究已经成为研究细菌耐药机制及致病性的重要方向,了解细菌生物被膜形成中的影响因素及生物被膜的检测方法,对生物被膜的研究有重要意义。文章重点综述了细菌生物被膜形成的影响因素及常用的实验室检测方法。

关键词：生物被膜(BF) 影响因素毒力基因检测方法染色

不同动物来源大肠埃希菌iss基因检测及致病性研究

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西北农业学报 2014年第3期23卷 20-23页

作者：孔科委李迪李爽郭秉娇秦瑶王熙楚周霞石河子大学动物科技学院新疆石河子832003

研究不同动物来源大肠埃希菌iss基因分布及其致病性。分别将分离于发病猪、鸡和犊牛的44株大肠埃希菌计数后腹腔注射小白鼠，观察临床症状，记录发病及死亡情况；采用PCR方法分别扩增不同动物来源的44株大肠埃希菌的iss基因存在情况，... 详细信息

研究不同动物来源大肠埃希菌iss基因分布及其致病性。分别将分离于发病猪、鸡和犊牛的44株大肠埃希菌计数后腹腔注射小白鼠，观察临床症状，记录发病及死亡情况；采用PCR方法分别扩增不同动物来源的44株大肠埃希菌的iss基因存在情况，同时对部分PCR扩增产物测序并进行同源性分析。感染后小白鼠出现不同程度的临床症状。其中有14株对小白鼠的致病性最强，感染小鼠的死亡率达100％；有25株致病性较弱，死亡率为20％～80％；而另有5株接种感染后小鼠均无死亡；iss基因在致病性大肠埃希菌中的PCR扩增总频率为79．5％；在毒力较强大肠埃希菌中的PCR扩增频率为92．8％；在无致病力（或低毒力）大肠埃希菌中的PCR扩增频率为16．7％；部分基因片段核苷酸序列与参考序列之间同源性在91．6％～99．0oA。iss基因致病性强的菌株扩增频率明显高于其他菌株，且不同来源菌株iss基因片段变异程度不大。

关键词：大肠埃希菌 iss基因致病力

羔羊脑炎粪肠球菌XJ05 Pfs基因的克隆、功能序列分析及原核表达

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羔羊脑炎粪肠球菌XJ05 Pfs基因的克隆、功能序列分析及原核表达

绵羊脑炎单增李斯特菌生物膜形成及相关基因的检测

中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：郑婷婷王熙楚孔科委刘顺磊周霞石河子大学动物科技学院

引言细菌对自诱导分子(Autoinducer,AI)能产生应答并调控如生物膜形成、毒力因子产生、耐药性等相关基因的表达。S-腺苷甲硫氨酸(SAM)参与DNA、RNA、蛋白质等代谢过程并可生成毒性的S.腺苷高半胱氨酸(SAH),而SAH则可在S-腺苷高半胱氨酸...

引言细菌对自诱导分子(Autoinducer,AI)能产生应答并调控如生物膜形成、毒力因子产生、耐药性等相关基因的表达。S-腺苷甲硫氨酸(SAM)参与DNA、RNA、蛋白质等代谢过程并可生成毒性的S.腺苷高半胱氨酸(SAH),而SAH则可在S-腺苷高半胱氨酸裂解酶(Pfs)催化下生成形成不同结构的AI分子。因此Pfs是AI生成的关键酶。致羔羊脑炎粪肠球菌XJ05是否携带Pfs基因以及与其他

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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动物医学进展 2016年第7期37卷 13-16页

作者：邬琴闫圆圆王振梁淋渊郑婷婷孔科委王熙楚周霞石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

为了检测绵羊脑炎李斯特菌生物膜形成情况并确定生物膜形成相关基因在该菌中的分布情况,采用结晶紫染色结合测定OD值的方法观察羊脑炎李斯特菌生物膜在不同时间段形成情况,并应用分子生物学方法检测生物膜形成相关基因(flaA、recA、relA... 详细信息

为了检测绵羊脑炎李斯特菌生物膜形成情况并确定生物膜形成相关基因在该菌中的分布情况,采用结晶紫染色结合测定OD值的方法观察羊脑炎李斯特菌生物膜在不同时间段形成情况,并应用分子生物学方法检测生物膜形成相关基因(flaA、recA、relA、prfA、yneA、agrA、luxS、degU、motB、sigB、hpt)在该菌中的分布情况。结果表明,在37℃,绵羊脑炎李斯特菌生物膜在2h^8h的OD值与0h和对照组对比差异显著(P<0.05),9h^48hOD值呈平稳趋势,与对照组比较差异显著(P<0.05)。2h开始生物膜初具形态,呈现散落的网格结构,2h^6h矩阵网格结构明显,6h^8h形成高度有序的网格结构,9h^48h依然具备生物膜网状结构特征,但个别网状结构脱落。11种生物膜相关基因在绵羊脑炎李斯特菌中的检测结果为阳性,测序结果与GenBank公布的相应序列同源性为87.22%~99.29%。结果表明2h^6h生物膜进入黏附期和生长期,6h^8h进入成熟稳定阶段,9h^48h逐渐进入播散期;LM90携带11种与生物膜形成相关的基因。

关键词：绵羊脑炎李斯特菌生物膜膜相关基因

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某地下储油库分层开挖块体预测及支护分析

长江科学院院报 2024年

作者：刘四新应永健孔科崴麦智杰张奇华中国石化海南炼油化工有限公司中国地质大学(武汉)湖北巴东地质灾害国家野外科学观测研究站

地下储油洞库一般选址在坚硬的结晶岩地区，洞室围岩稳定问题主要表现为局部的块体失稳。块体理论采用几何拓扑学方法分析地质结构面相互切割形成的块体及其稳定问题，是分析地下洞室围岩稳定性的理想工具。本研究依托某在建地下水封洞... 详细信息

地下储油洞库一般选址在坚硬的结晶岩地区，洞室围岩稳定问题主要表现为局部的块体失稳。块体理论采用几何拓扑学方法分析地质结构面相互切割形成的块体及其稳定问题，是分析地下洞室围岩稳定性的理想工具。本研究依托某在建地下水封洞库工程，总结形成了工程岩体开挖现场块体预测分析流程。首先，根据前期勘察和主洞室顶层开挖获得的地质素描资料，分析总结主洞室结构面发育规律；然后，对结构面进行组合，利用全空间赤平投影法，判别各组合在主洞室中下层边墙可能出现的可动块体和关键块体；随后，采用最大块体形态分析方法，对关键块体进行几何形态分析，剔除“浅埋型”和“尖长型”这两种非支护关键块体，获得需支护关键块体；最后，对需支护的“端正型”关键块体提出支护建议。研究成果为洞室围岩支护设计提供了理论分析依据，在岩石地下工程建设中具有重要的推广价值。

关键词：块体理论块体预测围岩稳定全空间赤平投影需支护关键块体

基于曲线拟合及积分算法的山羊绒手扯长度检测方法

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毛纺科技 2024年第6期52卷 96-100页

作者：穆奎刘慧慧唐孔科赵霞山东省产品质量检验研究院山东济南250102

针对传统山羊绒手扯长度计算方法中手绘曲线费时费力、计算结果不够准确的问题,通过构建山羊绒手扯长度的数学模型,拟合山羊绒手扯长度的曲线函数并建立回归方程,利用Origin软件计算山羊绒手扯长度曲线的面积与曲线宽度的比值得到山羊... 详细信息

针对传统山羊绒手扯长度计算方法中手绘曲线费时费力、计算结果不够准确的问题,通过构建山羊绒手扯长度的数学模型,拟合山羊绒手扯长度的曲线函数并建立回归方程,利用Origin软件计算山羊绒手扯长度曲线的面积与曲线宽度的比值得到山羊绒的手扯长度。结果表明:函数拟合相关系数R^(2)接近1,曲线拟合度高,回归方程可用;曲线积分面积计算的手扯长度较传统手扯长度测试方法的误差小,误差率低,结果重现性好;该方法能够快速绘制山羊绒的手扯长度曲线,并能简捷准确地计算手扯长度。

关键词：山羊绒手扯长度曲线拟合回归方程积分算法

阻流板对规则波中船舶阻力及运动特性影响研究

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中国舰船研究 2024年第S1期19卷 28-34页

作者：宋科委龚杰杨海燕葛珅玮江苏航运职业技术学院船舶与海洋工程学院江苏南通226010 武汉理工大学高性能舰船技术教育部重点实验室湖北武汉430063 武汉理工大学船海与能源动力工程学院湖北武汉430063

[目的]旨在分析阻流板对规则波中船舶阻力及运动特性的影响。[方法]以一条半排水型方尾船为研究对象,基于RANS方法并结合重叠网格技术进行阻流板安装前后船舶在规则波中的阻力与运动特性数值仿真,总结船舶阻力、姿态与运动响应随波长与... 详细信息

[目的]旨在分析阻流板对规则波中船舶阻力及运动特性的影响。[方法]以一条半排水型方尾船为研究对象,基于RANS方法并结合重叠网格技术进行阻流板安装前后船舶在规则波中的阻力与运动特性数值仿真,总结船舶阻力、姿态与运动响应随波长与航速的变化规律。[结果]结果表明:阻流板在规则波中的减阻率比静水减阻率大1.03%~2.43%;阻流板对垂荡和纵摇传递函数的影响随着波长的增大而变大,λ=2L_(PP)工况下的垂荡传递函数T_(F3)和纵摇传递函数T_(F5)平均降低了3.5%和1.4%;当船舶出现甲板上浪时,阻流板可使T_(F3)和T_(F5)的降低率分别达到9%和3%。[结论]研究方法与研究成果可为船舶节能装置设计与性能预报提供技术参考。

关键词：船舶阻力规则波阻流板运动响应数值模拟