检索结果-南通市图书馆

乙型肝炎病毒x蛋白通过激活p38和JNK信号通路促进肝癌细胞增殖

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中华实验和临床病毒学杂志 2019年第4期33卷 394-399页

作者：娄晓丽侯彦强上海市松江区中心医院中心实验室上海201600

目的探讨乙型肝炎病毒x(HBx)蛋白对人肝癌细胞增殖的分子作用机制。方法构建HBx蛋白的绿色荧光蛋白真核表达载体HBx-pEGFP-C1,利用脂质体转染技术将质粒HBx-pEGFP-C1转染人肝癌细胞系HepG2细胞株,荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,RT... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒x(HBx)蛋白对人肝癌细胞增殖的分子作用机制。方法构建HBx蛋白的绿色荧光蛋白真核表达载体HBx-pEGFP-C1,利用脂质体转染技术将质粒HBx-pEGFP-C1转染人肝癌细胞系HepG2细胞株,荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,RT-PCR和Western blot方法检测X基因的表达情况。采用生长曲线和TUNEL染色检测HBx蛋白对HepG2细胞增殖和凋亡的作用。采用Western blot方法检测caspase3、p-p38、p-JNK、p-Akt的表达变化。结果成功构建HBx-pEGFP-C1真核表达载体并转染HepG2细胞,转染HBx蛋白的HepG2细胞与对照组相比增殖率明显升高(t=-0.8999,P=0.012),但细胞凋亡率和caspase3表达水平无明显变化。HBx组p-p38(24 h)(t=-11.058,P=0.0004)、p-JNK(48 h)(t=-15.022,P=0.0001)与对照组相比表达升高明显。结论HBx蛋白通过激活p38和JNK信号通路促进人肝癌细胞HepG2增殖。

关键词： HBx蛋白 HepG2细胞 p38 JNK

肝癌C/EBPγ的高表达与促进肝癌细胞增殖迁移的相关性研究

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中华检验医学杂志 2020年第4期43卷 475-481页

作者：王宏侯彦强娄晓丽上海市松江区九亭医院检验科上海201600 上海市松江区中心医院检验科上海201600

目的:研究C/EBPγ在肝癌中的表达水平,探讨其对肝癌细胞增殖和迁移的相关性作用。方法:自2018年10月至2019年4月,在上海市松江区中心医院中心实验室,采用体外细胞实验,pLKO.1组为对照组,shg1组和shg2组为干扰组。采用Ocomine人类肿瘤芯... 详细信息

目的:研究C/EBPγ在肝癌中的表达水平,探讨其对肝癌细胞增殖和迁移的相关性作用。方法:自2018年10月至2019年4月,在上海市松江区中心医院中心实验室,采用体外细胞实验,pLKO.1组为对照组,shg1组和shg2组为干扰组。采用Ocomine人类肿瘤芯片数据库(https://***/resource/***)和荧光定量PCR比较分析C/EBPγ在肝癌组织及肝癌细胞株中的转录水平。肝癌细胞株HepG2和Hep3B采用DMEM(10%FBS)、THLE-3细胞应用BEBM加生长因子37℃、5%CO 2培养。构建shC/EBPγ-pLKO.1腺病毒载体,与包装载体pMD2G、pMDLG/REE和pRSV/Rev共转染293T细胞,空白载体pLKO.1作为对照,12~16 h后收集病毒上清感染HepG2细胞,重复感染4次后加入嘌呤霉素(puromycin 2μg/mL)选择培养48~72 h,1μg/mL嘌呤霉素维持培养,显微镜下观察细胞状态。采用生长曲线(0、2、4和6 d)检测增殖;采用无血清培养或加入抗氧化剂NAC培养0.5、1、3、6、12和24 h后,DFH-DA法检测ROS浓度,采用Real-time PCR检测氧化应激相关基因的转录水平;采用划痕实验检测细胞迁移能力。两独立样本比较采用t检验,三组以上采用单因素方差分析,两两比较采用LSD方法。结果:Oncomine数据库显示肝癌组织C/EBPγmRNA水平明显高于正常肝组织,且肝癌分级越高,其基因组中C/EBPγDNA重复序列拷贝数越高,荧光定量PCR结果显示肝癌细胞株(HepG2和Hep3B)C/EBPγmRNA水平明显高于正常肝细胞株(THLE-3)。C/EBPγ干扰组4 d(shg1:1.93±0.70;shg2:1.28±0.40)、6 d(shg1:3.05±0.90;shg2:1.31±0.60)增殖显著低于对照组(4 d:6.18±0.80;6 d:22.41±2.56)(F=1507.971,P<0.05);营养缺乏状态下,干扰组细胞活性氧(ROS)水平与对照组相比明显升高,干扰组氧化应激相关基因(HPRT1、NQO1-tv2和NQO1-tv4)转录水平12 h和24 h明显升高;划痕实验显示72 h干扰组(shg1∶174922.58±1239376.00;shg2∶1374656.00±248882.79)非愈合面积显著高于对照组(66690.82±1278954.00)(F=39.871,P<0.05);加入NAC后,C/EBPγ组6 h细胞增殖率明显提高,0.5、1和3 h细胞活性氧水平显著降低(F=7.587,4.657,3.903,P<0.05)。结论:C/EBPγ在肝癌细胞高表达;降低C/EBPγ表达后,肝癌细胞增殖和迁移明显抑制、活性氧水平和氧化应激相关基因明显升高,提示高表达的C/EBPγ通过降低活性氧水平促进肝癌细胞的增殖和迁移。

关键词：肝癌增殖迁移活性氧

抗体依赖的增强作用在传染性疾病中的研究新进展

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中华预防医学杂志 2021年第2期55卷 171-176页

作者：娄晓丽高得勇侯彦强上海交通大学医学院附属松江医院中心实验室上海201600 上海交通大学医学院附属松江医院感染科上海201600

抗体依赖的增强作用(ADE)是指某些病毒特异性抗体(一般多为非中和抗体)与病毒结合后,通过其Fc段与某些表面表达FcR的细胞结合从而介导病毒内吞和复制,增强病毒感染的过程。本文概述了ADE在呼吸道合胞病毒、登革病毒、流感病毒等几种传... 详细信息

抗体依赖的增强作用(ADE)是指某些病毒特异性抗体(一般多为非中和抗体)与病毒结合后,通过其Fc段与某些表面表达FcR的细胞结合从而介导病毒内吞和复制,增强病毒感染的过程。本文概述了ADE在呼吸道合胞病毒、登革病毒、流感病毒等几种传染性疾病中的相关研究发现,借鉴ADE在几种病毒传染性疾病中发生的情况,探讨新型冠状病毒肺炎发生ADE的可能性及其作用机制,期望为新型冠状病毒肺炎发病机制、重症治疗和疫苗研发提供一些见解。

关键词：新型冠状病毒抗体依赖的增强作用严重急性呼吸综合征病毒中东呼吸综合征病毒血管紧张素转换酶-2

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诱骗受体3在疾病检测中的进展

中华检验医学杂志 2011年第10期34卷 877-880页

作者：娄晓丽梁冬雨侯彦强上海交通大学附属第一人民医院松江分院中心实验室 201600

DcR3又名TNFRSF6B／TR6／M68，其编码基因位于人类染色体20q13．3，是一种缺乏穿膜结构域的可溶性受体，DcR3编码长度为300个氨基酸（NCBI accession #NM_032945），产物相对分子质量为30000的糖基化蛋白，

关键词：诱骗受体3 检测疾病相对分子质量 DcR3 编码基因人类染色体可溶性受体

吡格列酮预处理对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡的影响

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中华消化杂志 2015年第4期35卷 235-240页

作者：徐萍娄晓丽陈诚上海交通大学附属第一人民医院松江分院松江区中心医院消化内科 201600 上海交通大学附属第一人民医院中心实验室 201600

目的研究吡格列酮预处理对雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞（AR42J细胞）凋亡的影响.方法 AR42J细胞分为空白对照组（常规培养）、吡格列酮组（40 μmol/L）、雨蛙肽组（1×10-8 mol/L）、吡格列酮＋雨蛙肽组（40 μmol/L吡格列酮＋1×10-8 m... 详细信息

目的研究吡格列酮预处理对雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞（AR42J细胞）凋亡的影响.方法 AR42J细胞分为空白对照组（常规培养）、吡格列酮组（40 μmol/L）、雨蛙肽组（1×10-8 mol/L）、吡格列酮＋雨蛙肽组（40 μmol/L吡格列酮＋1×10-8 mol/L雨蛙肽）、吡格列酮＋GW9662＋雨蛙肽组（40 μmol/L吡格列酮＋5 μmol/L GW9662＋1×10-8 mol/L雨蛙肽）.吡格列酮、GW9662早于雨蛙肽30 min加入.在实验的3、6、12和24 h采用MTT法检测各组细胞的增殖率,采用异硫氰酸荧光素Ⅴ/碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞凋亡率,脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸（dUTP）缺口末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡,检测各组半胱天冬酶（caspase）-3、半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-9的活性,采用JC-1染色流式细胞术检测细胞的线粒体膜电位.采用单因素方差分析和LSD检验分析数据.结果作用6、12、24 h时吡格列酮组和吡格列酮＋雨蛙肽组细胞的增殖活性分别为0.19±0.02、0.22±0.02、0.36±0.02和0.20±0.04、0.23±0.02、0.38±0.02,分别明显低于空白对照组（0.25±0.04、0.28±0.03、0.46±0.02,t=-3.16、-4.61、-6.25）和雨蛙肽组（0.23±0.02、0.29±0.01、0.46±0.05,t=-1.58、-4.61、-6.15,P均＜0.05）,吡格列酮＋GW9662＋雨蛙肽组细胞增殖活性（0.23±0.02、0.27±0.02、0.45±0.01）高于吡格列酮＋雨蛙肽组（t=2.25、3.87、4.56,P均＜0.05）.作用6、12、24 h后,异硫氰酸荧光素Ⅴ/碘化丙啶染色流式细胞术发现吡格列酮组和吡格列酮＋雨蛙肽组细胞的凋亡率分别为（11.80±0.47）％、（9.62±2.63）％、（14.92±2.52）％和（8.78±0.47）％、（11.89±2.80）％、（14.25±2.67）％,两组间差异均无统计学意义（P均＞0.05）,但这两组分别明显高于空白对照组的（5.52±0.64）％、（5.30±0.97）％、（5.47±0.88）％和雨蛙肽组的（5.98±1.21）％、（7.47±0.58）％、（8.11±1.32）％,差异均有统计学意义（t照组=9.81、4.45、10.74,t蛙肽组=4.38、7.62、6.98,P均＜0.05）;吡格列酮＋GW9662＋雨蛙肽组细胞的凋亡率[（5.82±0.26）％、（6.05±0.83）％、（9.23±0.90）％]与雨蛙肽组无明显差异,与吡格列酮＋雨蛙肽组相比明显降低（t=-4.63、-10.07、-5.70,P均＜0.05）.作用12h时TUNEL染色发现,吡格列酮组的凋亡率[（3.93±0.40）％]明显高于空白对照组[（2.73±0.68）％],吡格列酮＋雨蛙肽组细胞凋亡率[（8.43±1.65）％]明显高于雨蛙肽组[（2.80±0.56）％],吡格列酮＋GW9662＋雨蛙肽组细胞凋亡率[（3.87±0.35）％]低于吡格列酮＋雨蛙肽组（t=7.93、8.92、-5.35,P均＜0.05）.作用24 h时吡格列酮＋雨蛙肽组细胞的半胱天冬酶-3、半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-9活性（1.28±0.05、1.38±0.04、1.53±0.09）与雨蛙肽组（1.12±0.88、1.22±0.02、0.53±0.07）相比显著升高（t=3.20、8.62、1.29,P均＜0.05）,经GW9662干预后,半胱天冬酶类的活性部分恢复.吡格列酮组、吡格列酮＋雨蛙肽组线粒体膜电位改变细胞数目明显多于雨蛙肽处理组[（28.50±0.91）％、（28.20±2.56）％比（15.00±3.67）％,t=8.10、10.02,P均＜0.05],而加入GW9662可使膜电位部分恢复[（20.67±2.20）％].结论吡格列酮可能通过激活半胱天冬酶的活性,改变细胞膜电位促进AR42J细胞的凋亡,而其拮抗剂GW9662能部分抑制吡格列酮的促凋亡功能.

关键词：吡格列酮雨蛙肽 AR42J细胞急性胰腺炎

PI3K抑制剂对急性胰腺炎细胞因子和组织病理学评分的影响

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世界华人消化杂志 2012年第36期20卷 3663-3669页

作者：陈诚徐萍王静娄晓丽南京医科大学附属上海松江中心医院消化内科上海市201600 南京医科大学附属上海松江中心医院中心实验室上海市201600

目的:研究磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylino-sitol 3-kinase,P13K)/丝/苏氨酸激酶(ser-ine threonine kinase,Akt)信号通路抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠细胞因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6]转录和表达以及胰腺组织病理评分的影响,探讨其对SAP大鼠的保护作用.方法:将60只SD大鼠随机分为重症急性胰腺炎组(S组)、假手术组(C组)、生理盐水组(NS组)、溶剂(DMSO)对照组(R组)、PI3K/Akt抑制剂wortmannin组(W组).采用改良的Aho法制作SAP模型,分别在造模3、6h后抽血并处死大鼠,收集胰腺组织.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)表达.Real-time PCR方法检测胰腺组织细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)mRNA转录水平变化,并常规HE染色进行胰腺组织病理评分,同时观察各组腹水量、血清及腹水淀粉酶的变化.结果:S组和R组大鼠术后3、6h的腹水量、血清及腹水淀粉酶水平、胰腺组织病理评分较C组和NS组差异有统计学意义(P<0.05);W组的腹水量、血清及腹水淀粉酶水平、胰腺组织病理评分较同时段的S组和R组有所降低,差异有统计学意义(P<0.05).与C组和NS组相比,S组和R组大鼠术后3、6h的血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平和胰腺组织内TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA转录水平差异有统计学意义(P<0.05);W组的上述指标均低于S组和R组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:PI3K抑制剂wortmanin通过抑制PI3K/Akt信号转导通路下调SAP大鼠细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的转录和表达水平,减轻胰腺组织的病理损伤,对SAP大鼠具有保护作用.

关键词：重症急性胰腺炎磷脂酰肌醇-3激酶丝苏氨酸激酶渥曼青霉素肿瘤坏死因子-α 白介素-1β 白介素-6

吡格列酮对胰腺炎相关性腹水诱导的人单核细胞炎症信号通路的影响

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第二军医大学学报 2012年第11期33卷 1182-1185页

作者：徐萍王静侯彦强李清华陈诚娄晓丽上海交通大学附属第一人民医院松江分院消化科上海201600 上海交通大学附属第一人民医院松江分院中心实验室上海201600 南京医科大学南京210029

目的用胰腺炎相关性腹水(PAAF)刺激人单核细胞,探讨PPARγ激动剂吡格列酮对细胞炎症信号通路的影响。方法 PAAF收集自重症胰腺炎患者。将体外培养的人单核细胞THP-1分为4组:对照组(C组)、实验组(A组)、吡格列酮组(P组)、GW9662(G组)。A... 详细信息

目的用胰腺炎相关性腹水(PAAF)刺激人单核细胞,探讨PPARγ激动剂吡格列酮对细胞炎症信号通路的影响。方法 PAAF收集自重症胰腺炎患者。将体外培养的人单核细胞THP-1分为4组:对照组(C组)、实验组(A组)、吡格列酮组(P组)、GW9662(G组)。A组用PAAF刺激细胞;P组加入终浓度为20μmol/L吡格列酮,2h后再用PAAF刺激细胞;G组先加入PPARγ拮抗剂GW9662,30min后加入吡格列酮,2h后再用PAAF刺激细胞。12h后收集4组细胞,采用实时定量PCR方法检测细胞TNF-α、IL-6的mRNA表达,蛋白质印迹法检测NF-κB p65、p38MAPK的活化程度和IκB蛋白表达变化。结果 PAAF刺激后,A组细胞促炎细胞因子TNF-α、IL-6的mRNA表达增加,NF-κB、p38MAPK活化,IκB蛋白水平降低,与C组相比差异有统计学意义(P<0.05);P组经吡格列酮干预后,TNF-α、IL-6的mRNA表达降低,NF-κB、p38MAPK活性下调,IκB蛋白表达升高,与A组比较差异有统计学意义(P<0.05);G组应用GW9662后可拮抗吡格列酮降低促炎细胞因子的作用,TNF-α、IL-6的mRNA表达增加,NF-κB、p38MAPK活化,IκB蛋白水平降低,与P组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论吡格列酮可能通过抑制NF-κB、p38MAPK炎症信号通路活化,减少促炎细胞因子产生,控制炎症发生发展。

关键词：吡格列酮胰腺炎单核细胞 NF-κB p38丝裂原活化蛋白激酶类

miR-148b靶向调控DcR3抑制LPS诱导的巨噬细胞极化

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中华预防医学杂志 2023年第8期57卷 1231-1237页

作者：杨丽媛娄晓丽王玥侯彦强上海交通大学医学院附属松江医院(筹)检验科上海201600

目的探讨脓毒症中微小RNA-148b(miR-148b)靶向抑制诱骗受体3(DcR3)对巨噬细胞极化的影响。方法2019年12月至2022年12月期间,在上海交通大学医学院附属松江医院(筹)检验科,检测3例脓毒症患者及3名健康对照血清microRNA表达。采用佛波酯(P... 详细信息

目的探讨脓毒症中微小RNA-148b(miR-148b)靶向抑制诱骗受体3(DcR3)对巨噬细胞极化的影响。方法2019年12月至2022年12月期间,在上海交通大学医学院附属松江医院(筹)检验科,检测3例脓毒症患者及3名健康对照血清microRNA表达。采用佛波酯(PMA)诱导人急性单核细胞白血病细胞THP-1分化为巨噬细胞,继而加入脂多糖(LPS)刺激建立脓毒症细胞模型,检测miR-148b和DcR3表达变化。过表达DcR3检测LPS(100 ng/ml)刺激巨噬细胞TNF-α、CD163及IL-10的表达水平。过表达miR-148b观察巨噬细胞极化分子标志物的变化。采用双荧光素酶报告基因实验测定miR-148b对DcR3的靶向调控作用。通过t检验分析各组间是否具有统计学差异。结果LPS刺激THP-1巨噬细胞miR-148b表达下调(P<0.05),DcR3表达升高(P<0.01);过表达DcR3抑制TNF-α的表达(P<0.05),促进CD163(P<0.01)和IL-10(P<0.01)的表达,而加入miR-148b模拟物则相反;双荧光素酶报告基因实验证实miR-148b靶向结合DcR3,抑制其转录和表达,流式细胞检测结果显示DcR3可逆转miR-148b对巨噬细胞CD86/CD163比值的促进作用(P<0.05)。结论miR-148b靶向抑制DcR3的表达,从而抑制LPS诱导的巨噬细胞模型M2极化。

关键词：脓毒症微小RNA-148b 诱骗受体3 巨噬细胞极化

新型冠状病毒肺炎与自身免疫性疾病关系的研究进展

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中华预防医学杂志 2023年第5期57卷 785-792页

作者：娄晓丽杨丽媛王玥侯彦强上海交通大学医学院附属松江医院(筹)检验科上海201600

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者体内可检测到多种自身抗体,严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)感染可诱发自身免疫性疾病(AID)。目前相关研究报道病例有儿童多系统炎症综合征(MIS-C)、格林-巴利综合征(GBS)、自身免疫性溶血性... 详细信息

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者体内可检测到多种自身抗体,严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)感染可诱发自身免疫性疾病(AID)。目前相关研究报道病例有儿童多系统炎症综合征(MIS-C)、格林-巴利综合征(GBS)、自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、免疫性血小板减少症(ITP)和甲状腺自身免疫性疾病等。本文主要从COVID-19与AID免疫反应的相似性、COVID-19诱发的AID、AID患者感染SARS-CoV-2及接种新冠疫苗的风险等方面进行阐述,为AID的预防管理和治疗提供策略和思路。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2型自身免疫性疾病自身抗体