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微RNA-200家族对程序性死亡配体1的调控及其在非小细胞肺癌中的临床意义

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第二军医大学学报 2020年第7期41卷 780-786页

作者：孙伟白宗科姜梨华邵晓轶南通大学医学院免疫学系南通226000 中国药科大学生命科学与技术学院南京211198 海军军医大学(第二军医大学)东方肝胆外科医院仪器设备科上海201805

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)免疫检查点分子程序性死亡配体1(PD-L1)的表达及其与miRNA-200家族之间的调控关系,阐明PD-L1在NSCLC中的临床意义及调控机制。方法选取138例NSCLC患者癌组织及配对的癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色检测P... 详细信息

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)免疫检查点分子程序性死亡配体1(PD-L1)的表达及其与miRNA-200家族之间的调控关系,阐明PD-L1在NSCLC中的临床意义及调控机制。方法选取138例NSCLC患者癌组织及配对的癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色检测PD-L1表达,qRT-PCR检测miRNA-200家族(miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c、miRNA-429、miRNA-141)的表达水平。培养肺癌A549细胞,通过转染miRNA-200家族5个miRNA模拟物使其过表达,采用蛋白质印迹法检测miRNA-200家族过表达对PD-L1表达的影响,CCK-8实验检测miRNA-200家族过表达对A549细胞增殖活性的影响,荧光素酶报告基因实验验证miRNA-200家族对PD-L1的调控作用。结果138例NSCLC患者癌组织PD-L1总阳性率为58.7%(81/138),高于癌旁组织(3.6%,5/138),差异有统计学意义(P<0.05);PD-L1表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型无关,而与淋巴结转移、脉管侵犯、临床TNM分期有关(P均<0.05)。NSCLC癌组织中miRNA-200家族表达水平均低于癌旁组织(P均<0.01),且PD-L1表达阳性的患者具有更低水平的miRNA-200家族表达水平(P均<0.01)。A549细胞过表达miRNA-200家族能下调PD-L1的表达(P均<0.01),且抑制癌细胞增殖活性(P均<0.01)。荧光素酶报告基因实验证实miRNA-200家族直接负调控PD-L1的表达(P均<0.01)。结论PD-L1高表达预示NSCLC患者预后不良。PD-L1是miRNA-200家族的靶基因,miRNA-200家族表达水平低可能是NSCLC患者高表达PD-L1的重要原因。

关键词：非小细胞肺癌微RNA-200家族程序性死亡配体1 分子调控机制免疫治疗

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化疗对CD133＋结肠癌细胞的作用效果

中华实验外科杂志 2011年第1期28卷 30-31页

作者：周育宏方国恩薛绪潮钱其军姜梨华第二军医大学附属长海医院普通外科上海200433 第二军医大学附属东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室

目的观察化疗前后结肠癌细胞株HT29、SW620中CD133^＋结肠癌细胞的数量变化，探讨化疗对CD133^＋结肠癌细胞的作用效果。方法取对数生长的结肠癌细胞株HT29、SW620，采用80mg／L5-氟尿嘧啶（***）和25mg／L奥沙利铂（Oxaliplatin）分别... 详细信息

目的观察化疗前后结肠癌细胞株HT29、SW620中CD133^＋结肠癌细胞的数量变化，探讨化疗对CD133^＋结肠癌细胞的作用效果。方法取对数生长的结肠癌细胞株HT29、SW620，采用80mg／L5-氟尿嘧啶（***）和25mg／L奥沙利铂（Oxaliplatin）分别作用8h，并设对照组，利用CD133抗体进行标记后再用流式细胞仪进行检测，观察化疗前后CD133^＋细胞的比例。结果流式细胞仪检测结肠癌细胞株HT29，80mg／L5-Fu处理8h组中CD133^＋肿瘤细胞为45．00％，与未处理组（32．80％）比较结果差异有统计学意义（P〈0．01）；25mg／L奥沙利铂处理8h组中CD133^＋肿瘤细胞为55．30％，与未处理组和80mg／L5-Fu处理8h组比较结果差异有统计学意义（P〈0．01）。流式细胞仪检测结肠癌细胞株SW620，80mg／L5-Fu处理8h组中CD133^＋肿瘤细胞为47．10％，与未处理组（33．90％）比较结果差异有统计学意义（P〈0．01）；25mg／L奥沙利铂处理8h组中CD133。肿瘤细胞为56．50％，与未处理组和80mg／L5-Fu处理8h组比较结果差异有统计学意义（P〈0．01）。结论CD133^＋结肠癌细胞能明显抵抗化疗。

关键词：结肠癌细胞化疗 CD133

双重调控选择增殖型腺病毒CNHK500的构建及初步研究

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中华实验外科杂志 2004年第11期21卷 1366-1368页

作者：张琪彭林辉吴红平崔贞福钱炎珍姜梨华苏长青吴孟超钱其军第二军医大学东方肝胆外科医院病毒和基因治疗中心上海200438

目的　研制出一种双重调控的选择增殖型腺病毒载体系统。方法　先后经 2次定点突变重叠聚合酶链反应 (PCR)技术使腺病毒E1A及E1B启动子缺失 ,并将人工合成的人端粒酶逆转录酶启动子和缺氧反应启动子分别插入E1A及E1B基因的上游 ,得到腺... 详细信息

目的　研制出一种双重调控的选择增殖型腺病毒载体系统。方法　先后经 2次定点突变重叠聚合酶链反应 (PCR)技术使腺病毒E1A及E1B启动子缺失 ,并将人工合成的人端粒酶逆转录酶启动子和缺氧反应启动子分别插入E1A及E1B基因的上游 ,得到腺病毒载体质粒pSG5 0 0。通过 pSG5 0 0与质粒 pBHGE3在 2 93细胞中同源重组得到重组病毒CNHK5 0 0。扩增、纯化病毒 ,用TCID5 0方法测病毒滴度。通过病毒增殖实验观察重组病毒的选择性增殖能力。结果　成功构建了由双重调控选择增殖型腺病毒CNHK5 0 0 ,病毒滴度为 1.9× 10 10 pfu/ml ,增殖实验结果证实CNHK5 0 0可以选择性地在端粒酶阳性肿瘤中增殖。结论　CNHK5 0 0为肿瘤的生物治疗提供了一种新的策略。

关键词：双重调控增殖型腺病毒 CNHK500 聚合酶链反应肿瘤生物治疗

携带RGD多肽的嵌合型腺病毒载体AD11-RGD-4C-EGFP的构建及其感染效率的研究

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第二军医大学学报 2010年第2期31卷 178-182页

作者：刘辉王春红陈亚龙李林芳吴红平钱炎珍姜梨华钱其军浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所杭州310018 第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室上海200438

目的在嵌合型腺病毒的fiber中插入具有整合素特异性的RGD肽,构建可提高腺病毒感染效率的腺病毒载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2、BEL-7404以及成纤维细胞BJ的感染效率。方法将RGD-4C插入到AD5/11嵌合型腺病毒载体fiber的HI区,与腺病毒... 详细信息

目的在嵌合型腺病毒的fiber中插入具有整合素特异性的RGD肽,构建可提高腺病毒感染效率的腺病毒载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2、BEL-7404以及成纤维细胞BJ的感染效率。方法将RGD-4C插入到AD5/11嵌合型腺病毒载体fiber的HI区,与腺病毒骨架质粒pPE3共转染大肠杆菌BJ5183,同源重组产生腺病毒重组质粒(pPE3-F11-RGD-4C),该重组质粒与PDC328-EF1-EGFP共转染人胚肾293细胞进行包装,产生重组腺病毒(AD11-RGD-4C-EG-FP)。用该重组腺病毒感染HepG2、BEL-7404以及BJ细胞,通过荧光显微镜观察感染效率。结果所构建的重组腺病毒PCR扩增出1 123 bp包含目的片段的基因片段。同时,制备了高滴度的重组病毒,纯化后病毒滴度为1.3×1010pfu/ml。当MOI=10,48 h时该重组病毒对HepG2、BEL-7404及BJ细胞的感染效率明显高于对照组腺病毒(AD11-EGFP)。结论成功构建了可提高腺病毒感染效率的嵌合型腺病毒(AD11-RGD-4C-EGFP),为进一步的研究奠定了基础。

关键词： RGD-4C HI环腺病毒载体肝细胞癌

表达人内啡肽的腺病毒腺相关杂合病毒的构建及体外表达分析

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微生物学报 2005年第6期45卷 856-859页

作者：徐学武俞卫锋崔贞福王星华李泉吴飞翔董刚姜梨华第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科上海200438 第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室上海200438

应用分子生物学方法将人β_内啡肽融合基因序列克隆入腺病毒穿梭质粒pDC312_AAVEE,后者与骨架质粒共转染HEK293细胞,包装得到含转基因腺病毒腺相关杂合病毒AdAAV_EE。用PCR方法对杂合病毒进行鉴定,TCID50法测定病毒滴度。杂合病毒感染... 详细信息

应用分子生物学方法将人β_内啡肽融合基因序列克隆入腺病毒穿梭质粒pDC312_AAVEE,后者与骨架质粒共转染HEK293细胞,包装得到含转基因腺病毒腺相关杂合病毒AdAAV_EE。用PCR方法对杂合病毒进行鉴定,TCID50法测定病毒滴度。杂合病毒感染体外培养细胞观察转基因表达,ELISA法测定培养液中表达产物浓度。PCR法证实转基因正确插入了杂合病毒基因组内,且没有野生型病毒污染,病毒滴度为1.29×1010PFUmL。结果表明转基因从第1天到第14天的表达水平呈上升趋势,第14天达到3141pgmL。

关键词： β-内啡肽腺病毒腺相关病毒杂合病毒构建表达

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特定条件下化疗诱导结肠癌细胞凋亡的研究

临床肿瘤学杂志 2008年第3期13卷 222-225页

作者：李小秋周育宏姜梨华李蓉武警江西省总队医院内一科南昌330030 上海第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室 200438

目的:研究结肠癌化疗药物氟尿嘧啶(5-FU)和奥沙利铂(OXA)分别诱导结肠癌细胞株HT-29细胞凋亡的作用。方法:用80μg/ml5-FU和25μg/mlOXA分别作用HT-29细胞8h,并应用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术对细胞凋亡进行检测,观察凋亡细胞... 详细信息

目的:研究结肠癌化疗药物氟尿嘧啶(5-FU)和奥沙利铂(OXA)分别诱导结肠癌细胞株HT-29细胞凋亡的作用。方法:用80μg/ml5-FU和25μg/mlOXA分别作用HT-29细胞8h,并应用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术对细胞凋亡进行检测,观察凋亡细胞的比例。结果:80μg/ml5-FU处理8h组与空白对照组比较,凋亡细胞比例上升约9.2%(P<0.01);25μg/mlOXA处理8h组与空白对照组比较,凋亡细胞比例上升约21.1%(P<0.01)。25μg/mlOXA处理8h组与80μg/ml5-FU处理8h组比较,凋亡细胞比例约高于11.9%(P<0.01)。结论:在特定条件下,5-FU和OXA均能明显诱导结肠癌细胞株HT-29细胞凋亡;OXA对结肠癌细胞的诱导凋亡作用要强于5-FU。

关键词：结肠癌氟尿嘧啶奥沙利铂细胞凋亡流式细胞术

人肝癌细胞系EH-H1的建立及其相关生物学特性

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中国肿瘤生物治疗杂志 2009年第1期16卷 84-87页

作者：钱炎珍黎江李林芳刘辉刘韬姜梨华施乐华苏长青吴孟超钱其军第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室上海200438 浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所杭州310018

目的:采用原代培养的方法建立一株人肝癌细胞系EH-H1,并对其生物学特性进行分析。方法:将取自东方肝胆外科医院诊断为原发性肝细胞癌的组织标本分离成单细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养,在普通显微镜以及电子... 详细信息

目的:采用原代培养的方法建立一株人肝癌细胞系EH-H1,并对其生物学特性进行分析。方法:将取自东方肝胆外科医院诊断为原发性肝细胞癌的组织标本分离成单细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养,在普通显微镜以及电子显微镜下观察细胞的形态,并绘制细胞的生长曲线。用放射免疫法检测细胞系AFP和HBV的含量,采用染色体G显带方法进行细胞染色体核型的分析,裸鼠皮下接种细胞检测该细胞的成瘤能力。结果:成功建立一株新的人肝癌细胞系,命名为EH-H1。EH-H1细胞体外连续传代80代以上,细胞形态不变,生长周期恒定在24 h。放射免疫检测EH-H1各代细胞HBV均为阴性,AFP分泌微量(0.6μg/L)。染色体G带显示,EH-H1细胞染色体为非整倍体,以超2倍体为主。该细胞经皮下接种可使裸鼠致瘤(10/10),移植瘤病理组织学类型和分化程度与肝细胞癌一致。结论:通过原代培养建立的肝癌细胞系EH-H1与原发癌保持相似的生物学特性,可望成为一个稳定的细胞系。

关键词：肝癌细胞系原代培养生物学特性

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参数化S谱幅值调制及轴承故障诊断应用

西安交通大学学报 2024年第3期58卷 117-128页

作者：姜祖华张坤杨欢胥永刚北京工业大学材料与制造学部北京100124 北京市精密测控技术与仪器工程技术研究中心北京100124

针对传统谱幅值调制方法易受噪声影响的问题,利用参数化S变换得到信号在时频域中的幅值,提出了一种参数化S谱幅值调制方法。该方法首先使用参数化S变换将信号转换到时频域并得到幅值和相位,然后将不同权重赋予时频域中的幅值以改变不同... 详细信息

针对传统谱幅值调制方法易受噪声影响的问题,利用参数化S变换得到信号在时频域中的幅值,提出了一种参数化S谱幅值调制方法。该方法首先使用参数化S变换将信号转换到时频域并得到幅值和相位,然后将不同权重赋予时频域中的幅值以改变不同能量频率成分在信号中的占比,最后将调制后的幅值与原相位结合,使用参数化S逆变换重构一系列修正信号并计算其平方包络谱以提取故障特征。仿真和实验结果表明,该方法获得的幅值信息相比传统谱幅值调制方法更加准确和全面,对强噪声环境更具鲁棒性,能够有效实现滚动轴承的外圈、内圈和复合故障诊断。将所提方法与传统谱幅值调制方法和快速谱峭度方法进行对比,证明了参数化S谱幅值调制既能检测强噪声环境下的轴承故障信息,又能同时提取多种故障分量,在滚动轴承的故障特征提取中更具优越性。

关键词：滚动轴承故障诊断谱幅值调制参数化S谱幅值调制

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基于固态断路器主动注入式直流故障测距方法

电工技术学报 2024年第8期39卷 2360-2370页

作者：王伟帅智康李杨何梨梨方辰晨湖南大学电气与信息工程学院长沙410082

随着直流配电网的快速发展与深化应用,准确可靠的故障测距技术对直流故障检修和恢复至关重要。该文提出一种基于固态断路器(SSCB)主动注入式直流故障测距方法。首先,利用SSCB开断主动注入不同脉冲宽度的信号,并检测注入脉冲首末端和反... 详细信息

随着直流配电网的快速发展与深化应用,准确可靠的故障测距技术对直流故障检修和恢复至关重要。该文提出一种基于固态断路器(SSCB)主动注入式直流故障测距方法。首先,利用SSCB开断主动注入不同脉冲宽度的信号,并检测注入脉冲首末端和反射波首末端的时间差作为注入波形传播时间间隔,能够减小采样频率带来的误差。然后,提取电缆线路电压线模量作为检测量,削弱正负极线路之间的耦合作用,获得稳定波速。最后,基于小波变换原理提出改进自适应模极大值方法来检测脉冲首末端时刻,减小噪声和过渡电阻对测距精度的影响。仿真结果表明,基于SSCB主动注入式测距方法在直流配电网单极接地和极间短路故障情况下均能够实现准确且快速的定位。

关键词：直流配电网故障测距固态断路器主动注入自适应模极大值