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应激诱导蛋白Sestrin2对脂多糖诱发树突状细胞坏死性凋亡的影响

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中华危重病急救医学 2024年第3期36卷 237-243页

作者：吴梦瑶姚人骐段昱王陆郑丽玉贺鹏翼董宁吴瑶姚咏明解放军总医院医学创新研究部北京100853 解放军总医院第一医学中心普通外科北京100853 解放军总医院第一医学中心重症医学科北京100853

目的探讨应激诱导蛋白Sestrin2(SESN2)对脂多糖(LPS)联合泛天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)抑制剂zVAD诱导小鼠树突状细胞(DC)坏死性凋亡的影响。方法将培养至第3~10代小鼠骨髓来源树突状细胞系DC2.4给予LPS刺激0、6、12、24 h,... 详细信息

目的探讨应激诱导蛋白Sestrin2(SESN2)对脂多糖(LPS)联合泛天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)抑制剂zVAD诱导小鼠树突状细胞(DC)坏死性凋亡的影响。方法将培养至第3~10代小鼠骨髓来源树突状细胞系DC2.4给予LPS刺激0、6、12、24 h,并按照刺激时间点进行分组,采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测各组细胞SESN2蛋白表达水平。将过表达空载慢病毒(NC)、SESN2基因过表达RNA序列慢病毒(SESN2 LV-RNA)、小干扰空载慢病毒(NS)以及SESN2基因小干扰RNA序列慢病毒(SESN2 siRNA)分别转染至DC2.4细胞中,转染后72 h,于倒置荧光显微镜下观察细胞荧光表达改变。各转染组细胞给予LPS刺激24 h,同时设立空白对照组给予磷酸盐缓冲液(PBS)并培养24 h,采用Western blotting检测SESN2蛋白表达水平;给予LPS+zVAD刺激24 h,同时设立空白对照组给予PBS并培养24 h,采用Western blotting检测混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)、磷酸化MLKL(p-MLKL)蛋白表达水平,使用激光共聚焦显微镜观察p-MLKL变化及阳性细胞数量,采用流式细胞术和Hoechst染色检测坏死性凋亡细胞比例。结果与LPS刺激0 h组相比,LPS刺激24 h组细胞SESN2蛋白表达明显升高,故将24 h作为后续实验LPS刺激时间点。成功转染慢病毒后培养24 h,SESN2 siRNA+LPS+zVAD组细胞MLKL磷酸化水平明显高于NS+LPS+zVAD组;SESN2 LV-RNA+LPS+zVAD组细胞MLKL磷酸化水平明显低于NC+LPS+zVAD组;且NS+LPS+zVAD组和NC+LPS+zVAD组MLKL磷酸化水平分别高于NS+PBS组、NC+PBS组。激光共聚焦显微镜下显示,各组细胞p-MLKL蛋白荧光表达数量及荧光强度变化趋势与上述结果一致。流式细胞术和Hoechst染色检测结果均显示,SESN2 siRNA+LPS+zVAD组坏死性凋亡细胞比例明显高于NS+LPS+zVAD组〔流式细胞术:(30.800±1.153)%比(20.800±1.114)%,Hoechst染色:(75.267±0.451)%比(46.267±3.371)%,均P明显低于NC+LPS+zVAD组〔流式细胞术:(7.160±0.669)%比(19.240±2.322)%,Hoechst染色:(32.433±3.113)%比(48.567±4.128)%,均P明显抑制效应,干预SESN2有助于调节脓毒症时DC介导免疫反应进程。

关键词：应激诱导蛋白Sestrin2 坏死性凋亡脓毒症树突状细胞免疫反应

干扰素刺激因子对脂多糖诱导的小鼠树突状细胞坏死性凋亡的影响

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中国急救医学 2024年第7期44卷 611-617页

作者：李金儒段昱凌花李琼姚咏明戴新贵南方医科大学第一临床医学院广东广州510515 南方医科大学附属郴州医院(郴州市第一人民医院)重症医学科湖南郴州423000 解放军总医院医学创新研究部转化医学研究中心第四医学中心北京100853

目的探讨干扰素刺激因子(STING)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠树突状细胞(DC)坏死性凋亡的影响。方法 LPS 1μg/mL刺激第3~10代对数生长期小鼠DC2.4细胞系,将DC分为对照组、LPS 6 h组、LPS 12 h组、LPS 24 h组和LPS 72 h组,采用蛋白质印迹法... 详细信息

目的探讨干扰素刺激因子(STING)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠树突状细胞(DC)坏死性凋亡的影响。方法 LPS 1μg/mL刺激第3~10代对数生长期小鼠DC2.4细胞系,将DC分为对照组、LPS 6 h组、LPS 12 h组、LPS 24 h组和LPS 72 h组,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测磷酸化干扰素刺激因子(P-STING)、STING、磷酸化混合系激酶区域样蛋白(P-MLKL)、MLKL蛋白的表达。将转染含STING基因小干扰RNA序列慢病毒的DC分为敲减STING+磷酸盐缓冲液(PBS)组、敲减STING+LPS组,将转染空载慢病毒的DC分为空载体+PBS组、空载体+LPS组,给予相应刺激并培养12 h,通过流式细胞术检测细胞凋亡率,行核酸染料(SYTOX Green)染色观测细胞凋亡情况并计算凋亡率,Western blot检测P-STING、STING、P-MLKL、MLKL蛋白表达。结果与对照组比较,LPS 12 h组STING蛋白表达显著升高(P明显升高(P=0.011);但与敲减STING+PBS组比较,敲减STING+LPS组P-MLKL/MLKL比值差异不显著(P=0.889)。结论 LPS刺激下小鼠DC中STING蛋白表达增强,并于12 h达到活化高峰,且活化的STING蛋白对细胞坏死性凋亡具有显著的促进效应。

关键词：脓毒症树突细胞坏死性凋亡干扰素刺激因子免疫功能障碍

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改善脓毒症患者长期预后的康复治疗对策

中华烧伤与创面修复杂志 2022年第3期38卷 201-206页

作者：姚咏明张卉解放军总医院第四医学中心、医学创新研究部转化医学研究中心北京100048

脓毒症存活患者出院后仍然面临较高的二次感染和死亡风险,并且长期遗留认知功能、精神和肢体运动功能障碍,严重影响患者的长期预后和生活质量。本文浅析脓毒症预后不良的主要因素,进而从心理干预、早期活动、营养支持和免疫调理等方面... 详细信息

脓毒症存活患者出院后仍然面临较高的二次感染和死亡风险,并且长期遗留认知功能、精神和肢体运动功能障碍,严重影响患者的长期预后和生活质量。本文浅析脓毒症预后不良的主要因素,进而从心理干预、早期活动、营养支持和免疫调理等方面阐述有利于改善脓毒症患者长期预后的康复治疗对策。

关键词：脓毒症预后康复认知感染

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重症新型冠状病毒肺炎的免疫调理新策略

中华急诊医学杂志 2022年第2期31卷 135-139页

作者：张卉董宁姚咏明中国人民解放军总医院医学创新研究部、第四医学中心创伤修复与组织再生研究中心北京100048 中国人民解放军总医院医学创新研究部转化医学研究中心北京100853

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是由2019年新发现的严重急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome-coronavirus-2, SARS-CoV-2)感染引起的急性传染性疾病。SARS-CoV-2传播速度快、范围广, 目前全球感染确诊病例数已超过2.... 详细信息

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是由2019年新发现的严重急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome-coronavirus-2, SARS-CoV-2)感染引起的急性传染性疾病。SARS-CoV-2传播速度快、范围广, 目前全球感染确诊病例数已超过2.5亿例, 死亡病例超过510余例, 成为威胁全人类健康的最严峻公共卫生事件。脓毒症最新的定义为宿主对感染反应失调而导致危及生命的器官功能障碍。重症COVID-19本质上可以理解为由SARS-CoV-2病毒感染引起的脓毒症。相较于细菌感染引起的脓毒症, 重症COVID-19脓毒症有其独特之处, 例如:患者外周血中性粒细胞异常增多、T淋巴细胞数目更少、炎症标志物水平更高等[1]。充分认识重症COVID-19免疫反应特征和有效调理途径对我国新冠肺炎防治工作具有重要临床意义。

关键词：细菌感染公共卫生事件器官功能障碍急性传染性疾病传播速度免疫反应肺炎脓毒症

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靶向树突状细胞的脓毒症免疫调理新策略

中华烧伤与创面修复杂志 2023年第7期39卷 606-611页

作者：姚咏明张卉吴瑶解放军总医院医学创新研究部转化医学研究中心、第四医学中心北京100853

树突状细胞是介导机体天然免疫和获得性免疫应答的主要抗原提呈细胞。脓毒症状态下,树突状细胞数目减少,抗原提呈能力减弱,分泌细胞因子异常,造成T淋巴细胞活化障碍。既往研究提示,树突状细胞数目和功能变化是导致免疫功能抑制的主要原... 详细信息

树突状细胞是介导机体天然免疫和获得性免疫应答的主要抗原提呈细胞。脓毒症状态下,树突状细胞数目减少,抗原提呈能力减弱,分泌细胞因子异常,造成T淋巴细胞活化障碍。既往研究提示,树突状细胞数目和功能变化是导致免疫功能抑制的主要原因之一。笔者针对脓毒症时树突状细胞的变化特点,结合其目前的研究进展,简要分析并提出了靶向树突状细胞凋亡、分化和功能等方面的免疫调理新策略,以期为严重烧创伤并发脓毒症的有效防治提供新思路。

关键词：脓毒症免疫,细胞树突细胞免疫反应免疫调理干预策略

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核糖体相关质量控制与核糖体自噬研究进展

生物化学与生物物理进展 2022年第9期49卷 1648-1657页

作者：郑丽玉姚人骐姚咏明解放军总医院医学创新研究部转化医学研究中心北京100853 温州医科大学附属第一医院急诊科温州325015 海军军医大学长海医院烧伤中心上海200433

细胞中蛋白质处于不断合成和降解的动态更新过程中,其稳态与细胞功能密切相关。细胞中存在多种蛋白质质量控制(protein quality control,PQC)机制来监测蛋白质合成和降解过程的异常,以确保蛋白质组的完整性和细胞适应性。核糖体是细胞... 详细信息

细胞中蛋白质处于不断合成和降解的动态更新过程中,其稳态与细胞功能密切相关。细胞中存在多种蛋白质质量控制(protein quality control,PQC)机制来监测蛋白质合成和降解过程的异常,以确保蛋白质组的完整性和细胞适应性。核糖体是细胞内数量最多的细胞器,系细胞内蛋白质合成的主要场所。现已明确,核糖体相关质量控制(ribosome-associated quality control,RQC)与核糖体自噬能通过溶酶体依赖和非依赖途径调节细胞内核糖体数量及功能以维持蛋白质稳态,从而增强细胞在应激状态下的适应能力。RQC失调、核糖体自噬障碍则参与多种疾病的发生及发展过程,靶向RQC和核糖体自噬可能成为防治多种疾病的有效手段。本综述聚焦核糖体相关的PQC途径,并进一步讨论了它们在蛋白质稳态维持中的重要地位及其在人类疾病发生发展中的潜在作用。

关键词：核糖体相关质量控制核糖体自噬蛋白质稳态

提高对脓毒症免疫血栓发生机制和干预策略的认识

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中华急诊医学杂志 2023年第2期32卷 137-141页

作者：张卉吴瑶姚咏明中国人民解放军总医院医学创新研究部转化医学研究中心北京100048

脓毒症是由于感染引起机体宿主反应失调,最终导致多脏器功能障碍的临床综合征,是当今重症监护病房(ICU)患者的主要死亡原因之一。据统计,2017年全球脓毒症患者病死率已达到22.5%,约占全球总死亡患者的五分之一^([1])。脓毒症发病机制复... 详细信息

脓毒症是由于感染引起机体宿主反应失调,最终导致多脏器功能障碍的临床综合征,是当今重症监护病房(ICU)患者的主要死亡原因之一。据统计,2017年全球脓毒症患者病死率已达到22.5%,约占全球总死亡患者的五分之一^([1])。脓毒症发病机制复杂,主要涉及过度炎症反应、免疫功能紊乱、凝血功能障碍等,多系统功能失调相互影响、相互促进,通过网络状效应加剧脓毒症的恶性发展^([2])。免疫应答与凝血系统相互作用失调时,易导致多级血管中形成微小的免疫血栓(immunothrombosis),是诱发弥散性血管内凝血(DIC)和多器官衰竭的主要原因。

关键词：多脏器功能障碍多器官衰竭宿主反应凝血功能障碍临床综合征凝血系统功能失调脓毒症

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新型冠状病毒肺炎:重症肺炎与免疫紊乱

中国实用内科杂志 2022年第3期42卷 177-181,209页

作者：任超姚咏明中国人民解放军总医院医学创新研究部第四医学中心转化医学研究中心北京100853

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染所引起的急性呼吸道传染性疾病,已成为现阶段严重威胁人类生命健康的突出难题。免疫应答障碍在COVID-19的发生及进展中具有重要意义,被认为是多器官功能损伤甚至死亡的主要... 详细信息

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染所引起的急性呼吸道传染性疾病,已成为现阶段严重威胁人类生命健康的突出难题。免疫应答障碍在COVID-19的发生及进展中具有重要意义,被认为是多器官功能损伤甚至死亡的主要原因。重症COVID-19患者循环固有免疫及适应性免疫细胞出现显著功能障碍及凋亡增加,引发机体免疫应答失调。多种免疫调理措施,如糖皮质激素、细胞因子抗体、胸腺肽α及恢复期患者血浆等,在减缓重症COVID-19进展及改善预后方面可能发挥保护效应。

关键词：新型冠状病毒肺炎新型冠状病毒重症肺炎免疫反应

白介素-33对树突状细胞的免疫调控效应及其在疾病中的作用

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生物化学与生物物理进展 2023年第2期50卷 265-276页

作者：贺鹏翼郑丽玉祝筱梅姚咏明中国人民解放军总医院医学创新研究部第四医学中心北京100853

白介素(interleukin,IL)-33是近年来广泛研究的白介素-1家族细胞因子。既往研究大多集中在IL-33对其经典靶细胞,如肥大细胞、2型固有淋巴细胞的作用。树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前所知功能最强的专职抗原呈递细胞。已证实,IL-3... 详细信息

白介素(interleukin,IL)-33是近年来广泛研究的白介素-1家族细胞因子。既往研究大多集中在IL-33对其经典靶细胞,如肥大细胞、2型固有淋巴细胞的作用。树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前所知功能最强的专职抗原呈递细胞。已证实,IL-33可以通过其特异性受体对DC发挥免疫调控作用,进而影响机体免疫功能状态和介导疾病的发生与发展过程。本文就IL-33调控DC的作用及机制做一综述,为进一步探究其免疫效应与调理途径提供新线索。

关键词：白介素-33 树突状细胞免疫调控疾病