检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

B细胞分化成熟的microRNA研究进展

现代免疫学 2009年第2期29卷 157-160页

作者：袁敏沈南唐元家上海交通大学医学院附属仁济医院风湿病科、上海市风湿病学研究所上海200001 中国科学院上海生命科学研究院/上海交通大学医学院健康科学研究所分子风湿病学研究组上海200025

microRNA,新近发现的一类重要的转录后水平的调控分子,是一种长度介于18~25 bp之间的单链RNA分子,其一般通过与靶序列3′UTR区配对碱基的相互作用,影响mRNA的稳定性或者翻译效率从而起到对靶基因功能的调控作用。该小分子作为生命过程... 详细信息

microRNA,新近发现的一类重要的转录后水平的调控分子,是一种长度介于18~25 bp之间的单链RNA分子,其一般通过与靶序列3′UTR区配对碱基的相互作用,影响mRNA的稳定性或者翻译效率从而起到对靶基因功能的调控作用。该小分子作为生命过程中一类重要调节分子参与细胞的生长、发育、分化、凋亡等基本的生理过程,对于细胞的信号转导、组织器官的分化发育也有一定的调节作用。在人类疾病（白血病、肿瘤、精神病及自身免疫性疾病等）中发现了特征性的异常microRNA表达,进一步说明该分子在生理病理状态下的重要作用。最近的许多研究表明一系列的microRNA参与免疫反应的调控,包括T/B细胞的发育分化、抗体类型的转换、单核/中性粒细胞的增殖、炎症因子的释放等过程。本文主要阐述近年来microRNA在免疫学方面B淋巴细胞分化发育中的作用。

关键词： microRNA B细胞免疫

MicroRNA参与系统性红斑狼疮发病机制的研究进展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

现代免疫学 2010年第4期30卷 346-349页

作者：范薇沈南唐元家上海交通大学医学院附属仁济医院上海市风湿病学研究所上海200001

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种累及多系统多器官的自身免疫性疾病,其病因未明及发病机制复杂。MicroRNA(miRNA)作为新发现的参与高等生物基因表达调控的重要分子,参与了SLE的发病过程,本文主要阐述目前miRNA... 详细信息

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种累及多系统多器官的自身免疫性疾病,其病因未明及发病机制复杂。MicroRNA(miRNA)作为新发现的参与高等生物基因表达调控的重要分子,参与了SLE的发病过程,本文主要阐述目前miRNA参与SLE发病机制的一些研究进展。

关键词：系统性红斑狼疮 miRNA 发病机制

系统性红斑狼疮发病机制相关MicroRNA的研究现状

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

免疫学杂志 2012年第6期28卷 534-537页

作者：吴玲玲唐元家沈南上海交通大学医学院仁济临床医学院 200027 上海交通大学中国科学院健康科学研究所 200027

MicroRNA(miRNA)是新发现的参与高等生物基因表达调控的重要分子,很多新的证据显示miRNA在免疫功能的调控方面占据着举足轻重的地位。系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是自身免疫性疾病的原型,它以抗核抗体为代表的自... 详细信息

MicroRNA(miRNA)是新发现的参与高等生物基因表达调控的重要分子,很多新的证据显示miRNA在免疫功能的调控方面占据着举足轻重的地位。系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是自身免疫性疾病的原型,它以抗核抗体为代表的自身抗体的产生、免疫复合物沉积及多系统损害为特征。SLE的发病机制长期以来是风湿免疫研究领域的难点。本文综述目前所知的与系统性红斑狼疮发病机制相关的microRNA。

关键词： miRNA 系统性红斑狼疮发病机制

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

miR-146在免疫系统中的研究进展

现代免疫学 2009年第6期29卷 510-513页

作者：赵遐沈南唐元家上海交通大学医学院附属仁济医院上海市风湿病学研究所上海200001

近年来的研究表明,微小RNA(miRNA)在发育、分化、凋亡、病毒感染和癌症等多种生物学过程中有着重要的生理、病理生物学意义。揭示miRNA在细胞中的作用,将会给基因功能和基因治疗的研究带来新的机遇,已成为科学家们的研究热点。文章以miR... 详细信息

近年来的研究表明,微小RNA(miRNA)在发育、分化、凋亡、病毒感染和癌症等多种生物学过程中有着重要的生理、病理生物学意义。揭示miRNA在细胞中的作用,将会给基因功能和基因治疗的研究带来新的机遇,已成为科学家们的研究热点。文章以miR-146为例,综述了miR-146在遗传、免疫、病毒感染、肿瘤等多方面的生物学意义,并重点概述miR-146在免疫系统的最新研究进展,揭示同一miRNA在不同组织、疾病中作用的多样性和复杂性,并在生物体内的多样化调控途径中扮演着关键性角色。

关键词： miR-146 自身免疫生物学作用多样性

构建反转录病毒小向导RNA表达载体用于小鼠T细胞基因功能研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

上海交通大学学报（医学版） 2020年第12期40卷 1585-1590页

作者：赵艳娜邱荣沈南唐元家上海交通大学医学院附属仁济医院风湿病科上海市风湿病学研究所上海200125 中国科学院大学上海营养与健康研究所上海200031

目的·构建反转录病毒小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)表达载体,用于小鼠T细胞分化调控及其基因功能的研究。方法·表达短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的反转录病毒载体(MSCV-LTR-miR30-PIG,LMP)经过Xho1和Sal1双酶切后,回收得... 详细信息

目的·构建反转录病毒小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)表达载体,用于小鼠T细胞分化调控及其基因功能的研究。方法·表达短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的反转录病毒载体(MSCV-LTR-miR30-PIG,LMP)经过Xho1和Sal1双酶切后,回收得到反转录病毒载体骨架。以慢病毒sgRNA表达载体为模版,通过PCR扩增获得U6-sgRNA-PGK-Puro-BFP片段。利用同源重组将U6-sgRNA-PGK-Puro-BFP片段组装进反转录病毒载体骨架。为了验证系统的有效性,设计靶向Il17a、Rorc和Irf4的sgRNA序列并进行克隆。分离Cas9转基因小鼠CD4 T细胞分别进行sgRNA反转录病毒感染,诱导其向Th17细胞分化。细胞因子染色,流式检测Il17a阳性细胞比例。2组独立样本数据比较采用非配对t检验。结果·①成功构建反转录病毒sgRNA载体。②利用反转录病毒载体向小鼠CD4 T细胞递送sgRNA并实现Il17a基因敲除。③Rorc-sgRNA和Irf4-sgRNA阳性群体中,Il17a阳性群体比率显著降低(P<0.05)。结论·利用sgRNA反转录病毒载体成功向目的细胞递送sgRNA并实现基因敲除。Rorc和Irf4基因敲除结果提示该系统可用于小鼠T细胞基因功能研究。

关键词： CRISPR/Cas9 Cas9转基因小鼠反转录病毒载体 Th17细胞分化

长链非编码RNA AC073046.25在系统性红斑狼疮易感基因TET3表达调节中的作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

上海交通大学学报（医学版） 2020年第8期40卷 1030-1035页

作者：徐宁周甜侯国俊沈南唐元家上海交通大学医学院附属仁济医院风湿病科上海市风湿病学研究所上海200127

目的·探究长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)AC073046.25在单核细胞中对Tet 甲基胞嘧啶双加氧酶3(Tet methylcytosine dioxygenase 3,TET3)表达的调控作用,分析其作为系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)诊断的生物标志物的可行性。方法·通过表观遗传学修饰及胞浆胞核定位对AC073046.25的细胞特异性及功能进行预测。在U-937细胞中利用反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)对AC073046.25进行敲低(knock down),通过实时荧光定量PCR分析ASO敲低AC073046.25后对TET3表达水平的影响。收集健康志愿者(n=32)与SLE患者(n=46)的单核细胞,通过皮尔逊系数分析AC073046.25与TET3表达水平之间的相关性。将健康志愿者记为健康对照组,同时按系统性红斑狼疮疾病活动指数(systemic lupus erythematosus disease activity index,SLEDAI)评分标准将SLE患者分为疾病稳定组和疾病活跃组,采用非配对双侧student's t检验比较AC073046.25与TET3在健康对照组及不同疾病活动组间的差异。结果·表观遗传学数据及胞浆胞核定位实验提示,AC073046.25可能在单核细胞中参与TET3的表达调控。在U-937细胞中,ASO敲低AC073046.25后,TET3表达水平降低(ASO组均P=0.002)。相关性分析显示,原代单核细胞中AC073046.25与TET3的表达呈正相关(r=0.650,P=0.000)。非配对双侧student's t检验结果显示,分别与健康对照组和疾病稳定组相比,AC073046.25在疾病活跃组中的表达水平降低(P=0.002,P=0.000)。结论·在单核细胞中AC073046.25能够调控TET3的表达,在疾病活动度较高的SLE患者单核细胞中其表达水平显著降低;继而提示,AC073046.25可作为活跃性SLE的生物标志物辅助疾病活动性诊断。

关键词：长链非编码RNA Tet甲基胞嘧啶双加氧酶3 系统性红斑狼疮易感基因

CRISPR/Cas9介导的同源重组在非编码区疾病相关位点功能研究中的应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

上海交通大学学报（医学版） 2021年第1期41卷 8-15页

作者：徐宁周甜侯国俊沈南唐元家上海交通大学医学院附属仁济医院风湿病科上海市风湿病学研究所上海200127

目的·以全基因组关联研究报道的系统性红斑狼疮相关单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点rs1978421为例,利用规律成簇间隔短回文重复序列/相关蛋白9[clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR associated protein 9,CRISPR/Cas9]系统建立非编码区疾病相关的遗传突变位点功能的研究策略。方法·针对SNP rs1978421位点设计单链导向RNA(single guide RNA,sgRNA),利用T7核酸内切酶Ⅰ(T7 endonucleaseⅠ,T7EⅠ)实验在HEK293T细胞中验证sgRNA对靶点的切割效率。以电穿孔转染的方式将融合Cas9-绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和sgRNA的表达质粒及同源重组的模板转染至U-937细胞内,通过流式分选得到单个的GFP阳性U-937细胞,培养14 d后进行基因型鉴定。筛选得到同源重组的细胞克隆后,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)对rs1978421上下游2 Mbp范围内的基因及miR-146a进行定量,分析rs1978421不同等位基因对miR-146a及其周围基因的表达影响。结果·T7EⅠ实验表明,约有24%的HEK293T细胞中的rs1978421位点发生切割。在U-937细胞内进行的同源重组实验中,共计得到141个细胞株;其中6个同源重组成功,成功率为4.3%。qPCR结果显示,在野生型TT与同源重组成功CC的U-937细胞中,miR-146a及所检测基因的表达情况均无显著变化(均P>0.05)。结论·SNP rs1978421对其周围2 Mb范围内的基因及miR-146a并无调控作用,但该研究证明了CRISPR介导的同源重组技术用于非编码区SNP位点功能研究的可行性。

关键词：规律成簇间隔短回文重复序列同源重组全基因组关联研究单核苷酸多态性

构建诱导型CRISPR/Cas9系统用于小鼠免疫细胞基因功能研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

上海交通大学学报（医学版） 2021年第3期41卷 297-301页

作者：赵艳娜邱荣沈南唐元家上海交通大学医学院附属仁济医院风湿病科上海市风湿病学研究所上海200127 中国科学院上海营养与健康研究所上海200031

目的·结合Dox诱导型单链导向RNA(single guide RNA,sgRNA)表达载体和Cas9转基因小鼠,构建诱导型CRISPR/Cas9系统用于小鼠免疫细胞基因功能研究。方法·根据四环素诱导表达系统原理,基因合成U6-TetO-sgRNA和EF1α-T2A-Puro-BFP-T2ATetR... 详细信息

目的·结合Dox诱导型单链导向RNA(single guide RNA,sgRNA)表达载体和Cas9转基因小鼠,构建诱导型CRISPR/Cas9系统用于小鼠免疫细胞基因功能研究。方法·根据四环素诱导表达系统原理,基因合成U6-TetO-sgRNA和EF1α-T2A-Puro-BFP-T2ATetR片段。通过同源重组将2个片段组装进反转录病毒载体骨架,获得Dox诱导型sgRNA反转录病毒载体。为了验证系统有效性,分离Cas9转基因小鼠骨髓细胞并诱导其向巨噬细胞方向分化。设计对照(non-targeting control,NC)组和实验组(靶向F4/80)的sgRNA,利用反转录病毒感染细胞,分化条件设置添加Dox组(Dox^(+))和不添加Dox组(Dox^(-))。通过流式细胞术和T7核酸内切酶Ⅰ(T7 endonucleaseⅠ,T7EⅠ)实验检测基因敲除效果。结果·①成功构建Dox诱导型sgRNA反转录病毒表达载体和Cas9转基因小鼠。②流式结果显示,在NC Dox^(-)组、NCDox^(+)组和F4/80 Dox^(-)组中,几乎无F4/80阴性细胞群体;而在F4/80 Dox^(+)组中,F4/80阴性细胞群体高达50%。③T7EⅠ结果显示,在F4/80 Dox^(-)组中,DNA条带完整,而在F4/80 Dox^(+)组中发生基因突变,DNA条带被切开。结论·结合Dox诱导型sgRNA表达载体和Cas9转基因小鼠,成功构建诱导型CRISPR/Cas9系统。利用该系统成功在小鼠免疫细胞中实现可诱导性基因敲除。

关键词：诱导型CRISPR/Cas9系统 Dox诱导型sgRNA表达载体造血干细胞基因编辑巨噬细胞

利用CRISPR/Cas9系统和TALEN技术干预XIST基因的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国细胞生物学学报 2014年第12期36卷 1652-1660页

作者：剌婷马健阳沈南唐元家上海交通大学医学院/中国科学院上海生命科学研究院健康科学研究所分子风湿病学研究组上海200025 上海交通大学医学院附属仁济医院上海市风湿病研究所上海200001

XIST是维持雌性哺乳动物X染色体稳定失活的重要长链非编码基因。X染色体失活异常导致X连锁基因的过量表达从而参与了癌症等疾病的发生。干预XIST的表达在XIST的生物学功能和相关疾病发生的研究中是必不可少的。该研究利用CRISPR/Cas9系... 详细信息

XIST是维持雌性哺乳动物X染色体稳定失活的重要长链非编码基因。X染色体失活异常导致X连锁基因的过量表达从而参与了癌症等疾病的发生。干预XIST的表达在XIST的生物学功能和相关疾病发生的研究中是必不可少的。该研究利用CRISPR/Cas9系统和TALEN技术在293T细胞中对已知的XIST核心启动子进行编辑,建立了通过酶切、测序等鉴定突变效率的方法,并且结合极限稀释法、片段分析和TA克隆测序得到基因型确定的XIST低表达的单克隆细胞系。结果显示,CRISPR/Cas9和TALEN对XIST核心启动子的突变可以有效地抑制XIST的表达。该研究表明,针对XIST核心启动子的基因组编辑可以干预XIST的表达,这为长链非编码RNA基因的敲低提供了新的思路。

关键词： XIST CRISPR/Cas9 TALEN 基因敲低:长链非编码RNA