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应用斑点法检测植物病毒的研究

病毒学杂志 1990年第3期3卷 317-321页

作者：周雪平濮祖芹南京农业大学植物病理教研组南京210014

应用斑点法检测了病叶粗汁液中的芜菁花叶病毒(TuMV)、大豆花叶病毒(sMV)和黄瓜花叶病毒(CMV),病叶粗汁液可被检测的最大稀释度分别为1:5120、1:2560和1:1280。提纯的大豆花叶病毒和黄瓜花叶病毒可检测的最低限量分别为1.7ng和1.2ng。... 详细信息

应用斑点法检测了病叶粗汁液中的芜菁花叶病毒(TuMV)、大豆花叶病毒(sMV)和黄瓜花叶病毒(CMV),病叶粗汁液可被检测的最大稀释度分别为1:5120、1:2560和1:1280。提纯的大豆花叶病毒和黄瓜花叶病毒可检测的最低限量分别为1.7ng和1.2ng。以牛血清白蛋白、吐温和聚乙烯吡咯啉酮作封闭液,均可获得满意的结果。应用斑点法检测芜菁花叶病毒和大豆花叶病毒时,其抗血清稀释1:500倍可获得满意效果,稀释2000倍仍可用于检测。

关键词：斑点法植物病毒检测

从云南分离的烟草曲顶病毒为菜豆金色花叶病毒属的一个新种

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科学通报 2001年第17期46卷 1459-1462页

作者：谢艳周雪平张仲凯戚益军浙江大学生物技术研究所杭州310029 云南省农业生物技术重点实验室昆明650223

从我国云南省保山地区烟草上表现曲顶症状的植株上分离获得病毒分离物Y1, 经粉虱传毒及粒子形态观察, 证明为菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)病毒. 用14种单克隆抗体进行三抗体夹心ELISA测定, 结果表明Y1与我国及巴基斯坦、印度等国报... 详细信息

从我国云南省保山地区烟草上表现曲顶症状的植株上分离获得病毒分离物Y1, 经粉虱传毒及粒子形态观察, 证明为菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)病毒. 用14种单克隆抗体进行三抗体夹心ELISA测定, 结果表明Y1与我国及巴基斯坦、印度等国报道的双生病毒的抗原表位型均不同. 对Y1基因组DNA-A的全序列进行了分析, 全长2746个核苷酸, 其中病毒链含有两个ORF, 互补链含有4个ORF. Y1与其他双生病毒基因组DNA-A全序列、基因间隔区序列及各ORF编码的氨基酸序列的比较分析表明, Y1是一种新的Begomovirus病毒, 定名为烟草曲顶病毒, 英文名为Tobacco curly top virus, 简称TCTV. TCTV全基因组与印度报道的番茄曲叶病毒和番木瓜曲叶病毒的同源性最高, 达85%, 而其CP基因与巴基斯坦棉花曲叶病毒分离物72 b高度同源, 氨基酸水平的同源性达98%.

关键词：烟草曲顶病毒重组菜豆金色花叶病毒属粉虱传毒粒子形态粉虱传双生病毒

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柑桔碎叶病毒研究

微生物学报 1995年第3期35卷 173-180页

作者：陈集双周雪平李德葆张天淼浙江农业大学生物技术研究所杭州310029 台州农业技术学校黄岩317400

用汁液摩擦接种方法对柑桔碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)进行了进一步的生物学鉴定.结果表明,该病毒除在豇豆上引起枯斑外,还侵染克里芙兰烟(Nicotianaclevilandii)产生系统斑驳和轻花叶,侵染昆诺藜(Chenopodium quinoa)和... 详细信息

用汁液摩擦接种方法对柑桔碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)进行了进一步的生物学鉴定.结果表明,该病毒除在豇豆上引起枯斑外,还侵染克里芙兰烟(Nicotianaclevilandii)产生系统斑驳和轻花叶,侵染昆诺藜(Chenopodium quinoa)和苋色藜(***)引起系统坏死和花叶,侵染鸡冠花(Celosia cristata)引起局部环斑.这些草本寄主均可作为CTLV的指示植物.在发病的柑桔叶汁液中,测得CTLV的稀释限点为10^(-5).经汁液摩擦接种,可以将CTLV从克里芙兰烟传播到木本指示植物柑桔和枳橙上.感病植物材料的组织超微结构观察结果表明:CTLV感染柑桔、枳橙、克里芙兰烟和昆诺藜均使其叶肉薄壁细胞的叶绿体出现淀粉沉积、叶绿体片层结构解体和消失;病毒在受感染的植株叶脉韧皮部细胞中紧密聚集,形成病毒结晶体;这种结构也出现在叶肉薄壁细胞中.这是关于该病毒组织病变的首次报道.用直接负染方法从感染CTLV的柑桔(枳橙)、克里芙兰烟和昆诺藜病叶中均能检查到线状病毒粒子,用改良的Deriick’s免疫电镜方法和琼脂双扩散方法测定均显示该病毒与苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)有强阳性反应,用ASGV抗血清可以进行植物材料中CTLV的检测.

关键词：柑桔碎叶病毒寄主反应组织病变

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杭州地区甘蔗花叶病病原鉴定

农业生物技术学报 2002年第4期10卷 377-380页

作者：蒋军喜周雪平洪健江西农业大学农学院南昌 330045 杭州 310029 杭州 310029 浙江大学生物技术研究所浙江大学生物技术研究所浙江大学生物技术研究所杭州 310029

从杭州田间表现典型花叶症的甘蔗病叶中得到病毒分离物SC-ZJ,按照SCMV亚组中甘蔗花叶病毒(Sugarcanemosaic virus,SCMV)、玉米矮花叶病毒(Maize dwarf mosaic Virus,MDMV)、高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)、约翰逊草花叶病毒(Johnsongrass mosaic virus,JGMV)等4种病毒基因组序列设计特异性引物,对SC-ZJ进行IC-RT-PCR扩增,结果用SrMV特异性引物扩增到1条长约1.1 kb的片段,而用其它3种病毒特异性引物扩增不出任何片段。扩增片段经克隆后测定序列,序列包含1135核苷酸(nt),编码378个氨基酸(aa),取其中的近全长外壳蛋白(CP)氨基酸序列(312 aa),与SrMV、MDMV、SCMV、JGMV等4种病毒对应的序列进行同源性比较,结果核苷酸序列同源性依次为95.3％、75.2％、61.2％和53.6％,氨基酸序列同源性依次为97.1％、78.1％、72.9％和56.2％。根据IC-RT-PCR扩增鉴定及序列同源性比较结果,将SC-ZJ鉴定为SrMV。并根据CP氨基酸序列的同源性进一步分析了4种病毒的亲缘关系。

关键词：甘蔗花叶病高粱花叶病毒免疫捕获反转录PCR 鉴定

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开展扶贫政策落实跟踪审计应把握好四个关系

中国审计 2016年第24期 59-60页

作者：曾稳祥朱飞周雪平审计署重庆特派办

党的十八大以来，中央着眼干落实扶贫攻坚战略，出台了一系列政策措施，要求各地抓紧抓实，切实做到精准扶贫、精准脱贫，确保在2020年实现农村贫困人口全部脱贫，贫困县全部摘帽。审计机关在推动精准扶贫、精准脱贫政策落实中肩负着重... 详细信息

党的十八大以来，中央着眼干落实扶贫攻坚战略，出台了一系列政策措施，要求各地抓紧抓实，切实做到精准扶贫、精准脱贫，确保在2020年实现农村贫困人口全部脱贫，贫困县全部摘帽。审计机关在推动精准扶贫、精准脱贫政策落实中肩负着重要职责。自2015年下半年以来，审计署结合国家重大政策措施贯彻落实跟踪审计，持续组织开展扶贫政策落实跟踪审计，取得了较好效果。但实践一年多来也遇到了一些新情况、新问题，需要系统加以总结，

关键词：扶贫政策跟踪审计扶贫攻坚战略农村贫困人口审计机关脱贫贫困县审计署

含卫星RNA的黄瓜花叶病毒弱株系的分离鉴定及在病毒病防治上的应用

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中国病毒学 1994年第4期9卷 319-326页

作者：周雪平濮祖芹方中达浙江农业大学生物技术研究所南京农业大学植保系

从豌豆上分离获得黄瓜花叶病毒分离物ＣＭＶＰ１，摩擦接种９科２９种植物，ＣＭＶＰｌ在大多数植物上症状很轻或无任何症状，提纯的病毒颗粒为球形，直径约２８ｎｍ，病毒衣壳蛋白亚基分子量约２７．５ｋＤ，所含核酸有五个组份，即Ｃ... 详细信息

从豌豆上分离获得黄瓜花叶病毒分离物ＣＭＶＰ１，摩擦接种９科２９种植物，ＣＭＶＰｌ在大多数植物上症状很轻或无任何症状，提纯的病毒颗粒为球形，直径约２８ｎｍ，病毒衣壳蛋白亚基分子量约２７．５ｋＤ，所含核酸有五个组份，即ＣＭＶＰ１含有卫星ＲＮＡ。ＣＭＶＰ１接种三生烟后８－１２天内呈轻花叶，此时组织中病毒含量最高，随后症状消失，去除卫星ＲＮＡ能加重ＣＭＶＰ１在番茄上的症状，因而是卫星ＲＮＡ减轻了ＣＭＶＰｌ的病状。当ＣＭＶＰ１保护接种番茄后攻强毒，番茄发病率低，病情轻，保护率达９０％以上，并有一定的刺激生长作用，还能提早开花４天，植株结果数增多，成熟果实的颜色、形态、品质和重量均正常。ＣＭＶＰ１对烟草亦具有很好的保护效果。保护接种的植株能明显减少强毒株侵染，可减少９０％以上。

关键词：黄瓜花叶病毒卫星RNA 交叉保护

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烟粉虱传播双生病毒研究进展

昆虫学报 2006年第3期49卷 513-520页

作者：纠敏周雪平刘树生浙江大学昆虫科学研究所杭州310029 浙江大学生物技术研究所杭州310029

综述了烟粉虱Bemisia tabaci对双生病毒的获取、传播及存留等方面的特性.烟粉虱最短的获毒和接种时间为15～30 min;双生病毒在烟粉虱体内可存留1至数周,有的终身存在.烟粉虱对双生病毒的传毒效率除了随其获毒及传毒时间的延长、传毒烟... 详细信息

综述了烟粉虱Bemisia tabaci对双生病毒的获取、传播及存留等方面的特性.烟粉虱最短的获毒和接种时间为15～30 min;双生病毒在烟粉虱体内可存留1至数周,有的终身存在.烟粉虱对双生病毒的传毒效率除了随其获毒及传毒时间的延长、传毒烟粉虱个体数量的增加以及病毒体浓度的增加而提高外,还与烟粉虱的龄期及性别有关.双生病毒除了在植物与粉虱之间直接传播外,还可通过烟粉虱交配及经卵携带的途径在烟粉虱个体和代别间进行传播.寄主植物、双生病毒的一些特殊蛋白以及烟粉虱内共生菌产生的GroEL蛋白,都可影响烟粉虱携带的双生病毒种类及传毒的可能性.双生病毒可对烟粉虱的发育、存活和生殖产生不利或有利的影响.雌成虫携带番茄黄化曲叶病毒（tomato yellow leaf curl virus,TYLCV）后,存活力和生殖力均下降;而携带番茄斑驳病毒（tomatomottle virus,ToMoV）后,生殖力提高.此外,植物感染双生病毒后,其对烟粉虱的适合性可能提高.

关键词：烟粉虱双生病毒病毒传播番茄黄化曲叶病毒番茄斑驳病毒

粉虱传双生病毒的TAS-ELISA及PCR快速检测

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植物病理学报 2002年第2期32卷 182-186页

作者：谢艳张仲凯李正和丁铭周雪平浙江大学生物技术研究所杭州310029 云南省农科院生物技术研究所昆明650223

利用粉虱传双生病毒 (WTGs)多克隆抗体及单克隆抗体 ,建立了三抗体夹心 EL ISA (TAS-EL ISA)检测 WTGs的方法 ,并发现了单克隆抗体 SCR18可广泛用于我国 WTGs的检测。利用根据WTGs基因组上基因间隔区及外壳蛋白基因保守序列设计的引物 ... 详细信息

利用粉虱传双生病毒 (WTGs)多克隆抗体及单克隆抗体 ,建立了三抗体夹心 EL ISA (TAS-EL ISA)检测 WTGs的方法 ,并发现了单克隆抗体 SCR18可广泛用于我国 WTGs的检测。利用根据WTGs基因组上基因间隔区及外壳蛋白基因保守序列设计的引物 ,建立了 PCR特异检测 WTGs的方法。对田间病样的 TAS- EL ISA和 PCR检测表明 ,粉虱传双生病毒在云南省烟草、番茄和南瓜上均存在 ,2种方法的测定结果是一致的。

关键词：植物病毒传播粉虱传双生病毒 TAS-ELISA PCR 快速检测

番茄花叶病毒外壳蛋白基因及3′端非编码区的克隆、序列分析及其表达

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中国病毒学 1998年第2期13卷 150-155页

作者：薛朝阳周雪平刘勇李德葆浙江农业大学生物技术研究所

根据已报道的番茄花叶病毒Ｌ株系（ＴｏＭＶＬ）序列人工合成引物，经ＲＴＰＣＲ扩增并克隆了我国番茄花叶病毒分离物（ＴｏＭＶＳ１）的外壳蛋白ＣＰ基因及３′端非编码区。序列测定结果表明，所得ｃＤＮＡ共长６８２个核苷酸，... 详细信息

根据已报道的番茄花叶病毒Ｌ株系（ＴｏＭＶＬ）序列人工合成引物，经ＲＴＰＣＲ扩增并克隆了我国番茄花叶病毒分离物（ＴｏＭＶＳ１）的外壳蛋白ＣＰ基因及３′端非编码区。序列测定结果表明，所得ｃＤＮＡ共长６８２个核苷酸，其中ＣＰ基因含４８０个核苷酸，编码１５８个氨基酸，３′端非编码区含２０２个核苷酸，其核苷酸序列与ＴｏＭＶＬ株系具有９９．５％的同源率。将该基因片段克隆到ｐＧＥＭＥＸ１载体中，转入Ｅ．ｃｏｌｉ后诱导表达，经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测证明，该基因已在大肠杆菌中正确表达。这是我国首次报道ＴｏＭＶＣＰ基因序列。

关键词：番茄花叶病毒外壳蛋白基因 3'端非编码区序列