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两段发酵法培养重组酿酒酵母生产乙肝表面抗原

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华东理工大学学报（自然科学版） 2005年第1期31卷 68-71,75页

作者：张凌周祥山邵明非范卫民张元兴华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

通过具有选择性压力合成培养基的使用和大豆蛋白胨的补加,建立了两段法重组酿酒酵母表达乙肝表面抗原的发酵生产工艺,使总的抗原表达量比原始批培养提高了25%,单位菌体抗原表达量提高了68%。对合成培养基和过程进行了优化,降低了生产成... 详细信息

通过具有选择性压力合成培养基的使用和大豆蛋白胨的补加,建立了两段法重组酿酒酵母表达乙肝表面抗原的发酵生产工艺,使总的抗原表达量比原始批培养提高了25%,单位菌体抗原表达量提高了68%。对合成培养基和过程进行了优化,降低了生产成本,使两段发酵法更适合于实际生产。通过测定发酵过程中质粒的稳定性,证明抗原产量的提高是由于质粒稳定性提高所致。

关键词：重组酿酒酵母乙肝表面抗原 HBsAg 质粒

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毕赤酵母发酵液的脱色和重组水蛭素的分离

生物工程学报 2001年第6期17卷 683-687页

作者：周卫斌周祥山张元兴华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

用毕赤酵母表达重组水蛭素的发酵液中含有大量色素和一些杂蛋白。本文对发酵上清的脱色和重组水蛭素的分离进行了探讨。鉴于水蛭素的稳定性 ,用加热法预处理发酵上清取得了满意的效果。对离子交换、疏水层析、凝胶过滤、羟基磷灰石吸附... 详细信息

用毕赤酵母表达重组水蛭素的发酵液中含有大量色素和一些杂蛋白。本文对发酵上清的脱色和重组水蛭素的分离进行了探讨。鉴于水蛭素的稳定性 ,用加热法预处理发酵上清取得了满意的效果。对离子交换、疏水层析、凝胶过滤、羟基磷灰石吸附层析以及它们的优化组合进行了研究 ,结果表明 ,阳离子交换层析、凝胶过滤和阴离子交换层析的组合对发酵上清的脱色和重组水蛭素的分离是有效的。

关键词：重组水蛭素脱色分离毕赤酵母表达

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粟酒裂殖酵母细胞絮凝研究

无锡轻工大学学报（食品与生物技术） 1998年第2期17卷 22-27页

作者：马悦吴佩琮周祥山无锡轻工大学生物工程学院

利用一株具有自身絮凝能力的粟酒裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｐｏｍｂｅ）变异株作为进行无载体固定化细胞酒精发酵的出发菌株，对影响其絮凝的环境因子和诱导操作条件进行了研究，并利用响应面分析技术（ＲＳＡ... 详细信息

利用一株具有自身絮凝能力的粟酒裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｐｏｍｂｅ）变异株作为进行无载体固定化细胞酒精发酵的出发菌株，对影响其絮凝的环境因子和诱导操作条件进行了研究，并利用响应面分析技术（ＲＳＡ）对此菌株的絮凝诱导操作工艺进行优化，建立了经验模型和快速高效絮凝细胞颗粒技术的最佳工艺条件。

关键词：粟酒裂殖酵母絮凝颗粒诱导酵母

胞外唾液酸酶造成工程中国仓鼠卵巢细胞株所产人源重组促红素唾液酸含量降低

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生物工程学报 2012年第12期28卷 1492-1499页

作者：刘颖慰周祥山刘海峰宋志伟张元兴华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 山东阿华生物药业有限公司山东东阿252201 新加坡科技研究局生物过程技术研究所新加坡138668

为了对工程中国仓鼠卵巢(CHO)细胞所产人源重组促红素(rhEPO)的N-糖基化特点进行考察,静置培养工程细胞后,通过等电聚焦和凝集素共沉淀对培养上清中的rhEPO进行分析,并对无血清培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)和唾液酸酶活性进行检测,发现这... 详细信息

为了对工程中国仓鼠卵巢(CHO)细胞所产人源重组促红素(rhEPO)的N-糖基化特点进行考察,静置培养工程细胞后,通过等电聚焦和凝集素共沉淀对培养上清中的rhEPO进行分析,并对无血清培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)和唾液酸酶活性进行检测,发现这株CHO细胞可以表达唾液酸含量较高的rhEPO蛋白。但是随着培养时间的延长,细胞的存活率逐渐降低,死亡的细胞将胞内的唾液酸酶释放到胞外,唾液酸酶的降解作用会造成N-糖链分枝末端的唾液酸占有率降低,导致rhEPO蛋白糖基化形态的变化。所使用的方法及得到的结果为进一步对工业过程进行分析提供了参考。

关键词：中国仓鼠卵巢细胞株人源重组促红素 N-糖基化细胞活性唾液酸酶

比生长速率和氮源对毕赤酵母生产重组鲈鱼生长激素的影响

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微生物学通报 2008年第10期35卷 1522-1526页

作者：魏春周祥山张元兴华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

对毕赤酵母胞内表达重组鲈鱼生长激素(rljGH)的发酵罐上生产进行了研究。建立了指数流加甲醇的策略并考察了不同比生长速率对rljGH生产的影响。结果表明,随着比生长速率的增加,平均比生产速率相应增加,但是胞内持续积累rljGH的时间减少... 详细信息

对毕赤酵母胞内表达重组鲈鱼生长激素(rljGH)的发酵罐上生产进行了研究。建立了指数流加甲醇的策略并考察了不同比生长速率对rljGH生产的影响。结果表明,随着比生长速率的增加,平均比生产速率相应增加,但是胞内持续积累rljGH的时间减少。最大比rljGH产量(0.58mg/gWCW)在比生长速率为0.029/h时获得。进一步考察了在诱导阶段添加硫酸铵、蛋白胨和酵母抽提物的影响。结果表明,添加硫酸铵和蛋白胨对于rljGH生产没有显著影响;添加2.5g/L酵母抽提物有助于胞内rljGH的积累,并使胞内积累持续时间由17h增加到23h,提高了发酵稳定性。

关键词：巴斯德毕赤酵母胞内生产指数流加比生长速率

ErbB2受体酪氨酸激酶激酶区的表达与纯化

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微生物学通报 2008年第9期35卷 1393-1397页

作者：江希周祥山张元兴华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

以GFP融合表达的形式在毕赤酵母中表达具有生物活性的受体酪氨酸激酶ErbB2的激酶区。构建受体酪氨酸激酶激酶区与GFP的融合表达载体pPIC3.5K,转化毕赤酵母GS115,通过组氨酸营养缺陷型筛选,G418高拷贝菌株筛选,以及摇瓶诱导表达筛选,选... 详细信息

以GFP融合表达的形式在毕赤酵母中表达具有生物活性的受体酪氨酸激酶ErbB2的激酶区。构建受体酪氨酸激酶激酶区与GFP的融合表达载体pPIC3.5K,转化毕赤酵母GS115,通过组氨酸营养缺陷型筛选,G418高拷贝菌株筛选,以及摇瓶诱导表达筛选,选取较高水平表达菌株进行5升罐培养,以镍亲和层析手段纯化得到蛋白表达产物,进行SDS-PAGE分析和酶联免疫反应检测酶活。结果表明在毕赤酵母中成功诱导表达了约100kD的激酶融合蛋白并具有激酶活性。该研究为筛选ErbB2的抑制剂奠定了基础。

关键词：受体酪氨酸激酶毕赤酵母克隆表达 RTK活性

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鲑鱼降钙素前体多肽在毕赤酵母中的分泌表达

中国医药工业杂志 2007年第6期38卷 411-415页

作者：季青周祥山张元兴华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

将鲑鱼降钙素前体多肽(sCTGly)基因克隆到表达载体pPIC9K上,然后转化毕赤酵母营养缺陷型菌株GS115,利用酿酒酵母分泌信号肽α-factor将目的产物分泌到发酵上清液中。经组氨酸缺陷筛选、G418高拷贝筛选及摇瓶表达筛选,获得较高水平表达菌... 详细信息

将鲑鱼降钙素前体多肽(sCTGly)基因克隆到表达载体pPIC9K上,然后转化毕赤酵母营养缺陷型菌株GS115,利用酿酒酵母分泌信号肽α-factor将目的产物分泌到发酵上清液中。经组氨酸缺陷筛选、G418高拷贝筛选及摇瓶表达筛选,获得较高水平表达菌株GS115-sCTGly。酶联免疫反应检测上清液中酶的活性,表明sCTGly产量在10mg/L以上。通过5L发酵罐发酵条件优化,表达水平提高到200mg/L以上。

关键词：鲑鱼降钙素前体毕赤酵母分泌表达

毕赤酵母碳源阻遏因子编码基因PpMIG1和PpMIG2的克隆与序列分析

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生物技术通报 2010年第11期26卷 223-229页

作者：张平周祥山张元兴华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

通过MIG基因的同源性设计简并引物,采用PCR方法从毕赤酵母(Pichia pastoris)中成功克隆了两个MIG同源基因的核心片段,同时利用Genome Walking的方法获得了基因的全长及其侧翼序列,并分别命名为PpMIG1和PpMIG2。序列分析显示,PpMIG1基因... 详细信息

通过MIG基因的同源性设计简并引物,采用PCR方法从毕赤酵母(Pichia pastoris)中成功克隆了两个MIG同源基因的核心片段,同时利用Genome Walking的方法获得了基因的全长及其侧翼序列,并分别命名为PpMIG1和PpMIG2。序列分析显示,PpMIG1基因全长1335bp,编码444个氨基酸;PpMIG2基因全长1365bp,编码454个氨基酸。这个两个基因所编码的蛋白质均与酿酒酵母碳源阻遏因子ScMig1同源,在氨基末端具有两个典型的C2H2锌指结构域,该结构域能够与受葡萄糖阻遏的许多基因的启动子相结合。PpMig阻遏因子的获得为毕赤酵母碳源阻遏机制的研究奠定了基础。

关键词：毕赤酵母碳源阻遏因子克隆

基于RNA-Seq技术的毕赤酵母基因组重注释及新型强启动子的发现与序列分析

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华东理工大学学报（自然科学版） 2014年第2期40卷 167-175页

作者：亓飞蔡孟浩周祥山张元兴华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

使用RNA-Seq技术,对毕赤酵母进行了转录组测序。基于测序结果,对现有毕赤酵母基因组进行了重注释,修正了基因组序列中的错误位点861处,发现了新转录本249个及可变剪切现象83个,并更正了553个转录本的错误注释。经过表达谱分析,在毕赤酵... 详细信息

使用RNA-Seq技术,对毕赤酵母进行了转录组测序。基于测序结果,对现有毕赤酵母基因组进行了重注释,修正了基因组序列中的错误位点861处,发现了新转录本249个及可变剪切现象83个,并更正了553个转录本的错误注释。经过表达谱分析,在毕赤酵母中发现了2个新型强启动子,分别命名为P437和P1431,其驱动的转录本的最高转录水平分别为AOX1基因的1.78倍和3.40倍。序列分析显示,P437和P1431序列中存在着多个酵母转录因子的结合位点。

关键词：毕赤酵母 RNA-Seq 基因组重注释启动子