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基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨miR-24对ox-LDL诱导的HUVECs自噬的调控机制

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右江医学 2024年

作者：杨鹏杨增艳翟阳周炜潜罗雪兰欧和生广西国际壮医医院科技部

目的探讨miR-24对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导下的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）自噬的影响及其相关机制，为进一步阐明miR-24在动脉粥样硬化（AS）中的作用提供理论依据。方法采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-24的表达；应... 详细信息

目的探讨miR-24对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导下的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）自噬的影响及其相关机制，为进一步阐明miR-24在动脉粥样硬化（AS）中的作用提供理论依据。方法采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测miR-24的表达；应用蛋白免疫印迹法（western blot）和qRT-PCR法检测Beclin-1、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、p-mTOR、p-PI3K、p-Akt的蛋白和mRNA表达水平；应用透射电子显微镜技术检测细胞的自噬小体生成情况；应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法、细胞划痕法、Caspase-3比色法和Hoechst 33258染色法分别检测细胞活性、迁移和凋亡情况。结果应用ox-LDL诱导HUVECs后，发现HUVECs中miR-24的表达显著降低（P＜0.05）。miR-24过表达可明显抑制ox-LDL诱导的HUVECs自噬（P＜0.05），而miR-24低表达则会增加ox-LDL诱导的HUVECs自噬（P＜0.05）。miR-24过表达可显著降低Beclin-1的表达水平，上调LC3Ⅰ/LC3Ⅱ的水平（P＜0.05），同时，miR-24过表达可显著促进p-PI3K、p-Akt和p-mTOR的表达（P＜0.05）。此外，miR-24过表达显著抑制HUVECs的活力和迁移，增加Caspase-3活性并促进其凋亡（P＜0.05）。结论 miR-24的过表达可激活PI3K/Akt/mTOR信号通路，降低ox-LDL诱导的HUVECs的自噬水平并促进其凋亡，miR-24可能成为AS的潜在治疗新靶点。

关键词： PI3K/Akt/mTOR信号通路 miR-24 自噬凋亡

27nt-miRNA对过氧化氢诱导血管平滑肌细胞凋亡的影响及分子机制

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广西医科大学学报 2022年第5期39卷 781-786页

作者：周福隆周炜潜杨鹏罗雪兰欧和生广西中医药大学附属国际壮医医院科技部南宁530201

目的:探讨27nt-miRNA对经过氧化氢(H_(2)O_(2))处理的血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡、活力和迁移的影响及作用机制。方法:将大鼠主动脉VSMCs分为5组:空白对照组、H_(2)O_(2)组、anti-27nt-miRNA+H_(2)O_(2)组、阴性对照+H_(2)O_(2)组和27nt-miRNA+H_(2)O_(2)组。空白对照组:不做任何处理;H_(2)O_(2)组:用500μmol/L H_(2)O_(2)处理6 h诱导细胞凋亡;anti-27nt-miRNA+H_(2)O_(2)组:转染27nt-miRNA反义序列慢病毒载体后,用500μmol/L H_(2)O_(2)处理6 h诱导细胞凋亡;阴性对照+H_(2)O_(2)组:转染随机阴性序列慢病毒载体后,用500μmol/L H_(2)O_(2)处理6 h诱导细胞凋亡;27nt-miRNA+H_(2)O_(2)组:转染27nt-miRNA高表达慢病毒载体后,再用500μmol/L H_(2)O_(2)处理6 h诱导凋亡。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和流式细胞术检测VSMCs存活率、凋亡率,划痕实验检测细胞迁移率,蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,H_(2)O_(2)组细胞活力和迁移率降低(P<0.05)、细胞凋亡率上升(P<0.05),提示成功构建VSMCs凋亡模型。对比阴性对照+H_(2)O_(2)组,27nt-miRNA+H_(2)O_(2)组可抑制细胞的活力和迁移能力(P<0.05),且细胞凋亡率上升(P<0.05),凋亡相关蛋白Bax表达水平上升,Bcl-2表达水平下降(P<0.05),而anti-27nt-miRNA+H_(2)O_(2)组细胞凋亡率降低、细胞活力和迁移率增加,Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:过表达27nt-miRNA可促进H_(2)O_(2)所诱导的VSMCs凋亡和抑制其活力和迁移能力,其机制可能与凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达改变密切相关。

关键词： 27nt-miRNA 血管平滑肌细胞凋亡过氧化氢

人骨髓间充质干细胞定向内皮分化前后miRNA的表达差异分析

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医学研究杂志 2023年第10期52卷 71-75页

作者：罗雪兰周炜潜杨鹏陈伟李龙春欧和生广西国际壮医医院壮瑶药制剂中心南宁530201 广西中医药大学研究生院南宁530200 广西国际壮医医院科技部南宁530201 济南市妇幼保健院药剂科 250001

目的探讨人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cell,hBMSC)定向内皮分化前后miRNA的表达差异分析,为进一步研究其调控hBMSC内皮分化的分子机制奠定理论基础。方法根据hBMSC定向血管内皮诱导分化培养方法培养细胞,应... 详细信息

目的探讨人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cell,hBMSC)定向内皮分化前后miRNA的表达差异分析,为进一步研究其调控hBMSC内皮分化的分子机制奠定理论基础。方法根据hBMSC定向血管内皮诱导分化培养方法培养细胞,应用电子显微镜观察细胞分化前后形态的变化,应用细胞免疫荧光法检测内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的蛋白质表达情况,应用高通量测序分析检测细胞分化前后miRNA表达谱的改变,应用qRT-PCR验证两组中表达差异明显的miRNA分子。结果与未分化组hBMSC比较,分化后的细胞形态发生类内皮细胞样改变;eNOS蛋白的表达明显增加;分化后hBMSC共筛选41个差异性表达的miRNA,其中表达上调的有27个,表达下调的有14个;分化组细胞miR-31-5p上调近21倍,miR-200a-3p下调近15倍。结论hBMSC定向内皮分化前后miRNA表达发生差异性改变,其改变可能影响干细胞的分化程度,可为进一步研究干细胞在血管内皮功能异常所致的血管性疾病异常机制提供研究方向和理论支持。

关键词：人骨髓间充质干细胞内皮分化 miRNA eNOS

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路的miR-24调控ox-LDL诱导的HUVECs自噬机制研究

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右江医学 2024年第9期52卷 775-783页

作者：杨鹏杨增艳翟阳周炜潜罗雪兰欧和生广西国际壮医医院科技部广西南宁530201

目的探讨miR-24对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导下的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬的影响及其相关机制,为进一步阐明miR-24在动脉粥样硬化(AS)中的作用提供理论依据。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-24的表达;应用蛋白免疫印... 详细信息

目的探讨miR-24对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导下的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬的影响及其相关机制,为进一步阐明miR-24在动脉粥样硬化(AS)中的作用提供理论依据。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-24的表达;应用蛋白免疫印迹法(western blot)和qRT-PCR法检测Beclin-1、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、p-mTOR、p-PI3K、p-Akt的蛋白和mRNA表达水平;应用透射电子显微镜技术检测细胞的自噬小体生成情况;应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、细胞划痕法、Caspase-3比色法和Hoechst 33258染色法分别检测细胞活性、迁移和凋亡情况。结果应用ox-LDL诱导HUVECs后,发现HUVECs中miR-24的表达显著降低(P潜在治疗新靶点。

关键词：氧化低密度脂蛋白人脐静脉内皮细胞 PI3K/Akt/mTOR信号通路 miR-24 自噬凋亡

内含子源性27nt-microRNA对大鼠血管平滑肌细胞表型转换的影响及其机制研究

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中国现代医学杂志 2024年第14期34卷 36-45页

作者：周炜潜罗雪兰王光耀黄凤欧和生广西中医药大学附属国际壮医医院壮瑶医药研究实验室广西南宁530201 广西中医药大学附属国际壮医医院心血管内科广西南宁530201

目的探讨内含子源性27nt-miRNA(27nt-miR)对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转换的影响及其分子机制。方法用27nt-miR表达慢病毒转染培养的VSMCs,观察其对PDGF-BB诱导的VSMCs表型转换的影响;将细胞... 详细信息

目的探讨内含子源性27nt-miRNA(27nt-miR)对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转换的影响及其分子机制。方法用27nt-miR表达慢病毒转染培养的VSMCs,观察其对PDGF-BB诱导的VSMCs表型转换的影响;将细胞分为对照组、PDGF-BB诱导组、27ntmiR组、27nt-miR-sponge组及27nt-miR NC组(27nt-miR NC组)。雷帕霉素(100 nmol/L)与MHY-1485(10μmol/L)作用于27nt-miR组、27nt-miR-sponge组及27nt-miR NC组,以验证27nt-miR是否参与mTOR与p70S6k通路的调控。用生物信息学预测27nt-miR与mTOR的靶向结合位点,用CCK-8法与EdU法分别测定VSMCs活力与增殖情况,划痕试验测定VSMCs迁移能力,实时荧光聚合酶链反应检测α-SMA、SM22α及OPN mRNA表达,Western blotting检测α-SMA、SM22α、OPN、mTOR、p-mTOR、p70S6k与pp70S6k蛋白表达。结果 CCK-8法结果示,PDGF-BB诱导组细胞增殖率较正常值高(P 0.05);27nt-miR组细胞增殖率较27nt-miR NC组低(P 0.05)。PDGFBB诱导组细胞迁移率较对照组高(P 0.05);27nt-miR组细胞迁移率较27nt-miR NC组低(P 0.05)。EdU法结果示,PDGF-BB诱导组细胞增殖率较对照组高(P 0.05);27nt-miR组细胞增殖率较27nt-miR NC组低(P 0.05)。PDGF-BB诱导组α-SMA mRNA相对表达量较对照组低(P 0.05)。27nt-miR NC组与PDGF-BB诱导组α-SMA、SM22α、OPN mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);27nt-miR组α-SMA、SM22α mRNA相对表达量较27nt-miR NC组高(P 0.05),27nt-miR-sponge组OPNm RNA相对表达量较27nt-miRNC组高(P<0.05)。PDGF-BB诱导组α-SMA、SM22α蛋白相对表达量较对照组低(P <0.05);27nt-miR NC组、PDGF-BB诱导组OPN蛋白相对表达量较27nt-miR组高(P <0.05);27nt-miR组α-SMA、SM22α蛋白相对表达量较27nt-miR NC组高(P <0.05),OPN蛋白相对表达量较27nt-miR NC组低(P <0.05);27nt-miR组p70S6k、p-p70S6k与p-mTOR蛋白相对表达量较27nt-miR NC组低(P <0.05);各组经雷帕霉素处理后,27ntmiR-sponge组与27nt-miR NC组各蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P <0.05)。27nt-miR组p70S6k、p-p70S6k、mTOR、p-mTOR蛋白相对表达量较27nt-miR NC组低(P <0.05),27nt-miR-sponge组与27nt-miR NC组p-p70S6k、mTOR、p-mTOR蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P <0.05)。各组经MHY-1485处理后,27nt-miR组p70S6k、p-p70S6k、mTOR、p-mTOR蛋白相对表达量较27ntmiR NC组低(P <0.05);27nt-miR-sponge组与27nt-miR NC组各蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 27nt-miR可能通过靶向m TOR/p70S6k信号通路从而

关键词： 27nt-microRNA 血管平滑肌细胞 mTOR/p70S6k信号通路表型转换

腹泻型肠易激综合征发病机制及中医药治疗的研究进展

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医学综述 2023年第18期29卷 3667-3673页

作者：田维黄适周炜潜方威龙覃秋云周丽洁广西中医药大学附属瑞康医院消化内科南宁530200 广西中医药大学附属国际壮医医院壮瑶医药研究实验室南宁530201

腹泻型肠易激综合征(IBS-D)是一种慢性胃肠道功能紊乱性疾病,也是消化内科门诊量逐年上升的原因。IBS-D的发生发展与遗传、感染、精神、饮食、神经和内分泌等因素密切相关。IBS-D的发病机制复杂,主要涉及炎症、中枢神经系统、消化系统... 详细信息

腹泻型肠易激综合征(IBS-D)是一种慢性胃肠道功能紊乱性疾病,也是消化内科门诊量逐年上升的原因。IBS-D的发生发展与遗传、感染、精神、饮食、神经和内分泌等因素密切相关。IBS-D的发病机制复杂,主要涉及炎症、中枢神经系统、消化系统、免疫系统等。中医药具有多成分、多通路及多靶点的特点,不仅临床疗效好、复发率低,且不良反应少。中医药不仅可以调控肠道菌群,还可以调节微RNA(miRNA),从而治疗IBS-D。未来从miRNA与中医药联合探索IBS-D的发病机制,可为IBS-D的治疗提供新思路。

关键词：腹泻型肠易激综合征发病机制中医药

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涡轮增压柴油机进气流量的计算与仿真

农业工程学报 2013年第3期29卷 62-68页

作者：黄粉莲纪威周炜中国农业大学工学院北京100083 交通运输部公路科学研究院北京100088

在进行增压器与柴油机匹配及柴油机系统动态仿真时,需要准确计算柴油机进气流量。为确定最佳的进气流量计算模型,对进气流量平均值模型进行比较分析,综合考虑增压中冷、废气再循环率、充量系数及工况变化的影响并建立相应的修正模型,利... 详细信息

在进行增压器与柴油机匹配及柴油机系统动态仿真时,需要准确计算柴油机进气流量。为确定最佳的进气流量计算模型,对进气流量平均值模型进行比较分析,综合考虑增压中冷、废气再循环率、充量系数及工况变化的影响并建立相应的修正模型,利用Matlab/Simulink对所有模型进行了仿真验证。仿真和试验结果表明:修正后的进气流量模型计算结果与试验数据相吻合,最优模型的平均相对误差为2.96%,模型设计合理准确。研究结果可为准确计算涡轮增压柴油机进气流量及其模型的选择提供指导和依据。

关键词：柴油机流量测量计算涡轮增压进气流量

基于OPTIMUS的柴油机配气正时及喷油提前角的优化

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农业工程学报 2012年第15期28卷 27-32页

作者：黄粉莲纪威张禄周炜中国农业大学工学院北京100083 交通运输部公路科学研究院北京100088

柴油机的配气正时与喷油提前角对其性能影响很大,最佳的匹配参数能够形成缸内良好的空燃比及较佳的燃烧效率,从而获得较高的动力性及较低的燃油消耗率。为得到不同工况下配气正时与喷油提前角的最佳组合,该文将增压直喷柴油机工作过程的... 详细信息

柴油机的配气正时与喷油提前角对其性能影响很大,最佳的匹配参数能够形成缸内良好的空燃比及较佳的燃烧效率,从而获得较高的动力性及较低的燃油消耗率。为得到不同工况下配气正时与喷油提前角的最佳组合,该文将增压直喷柴油机工作过程的SIMULINK仿真模型导入OPTIMUS多学科优化平台;以进气迟后角和排气提前角以及喷油提前角为优化设计变量,以柴油机的经济性和动力性为设计目标进行优化计算。额定工况下该发动机的优化结果是:进气迟后角为42°CA,排气提前角为60°CA,喷油提前角为16°CA。仿真和试验结果表明:模型设计合理准确,优化后柴油机动力性和经济性均有所改善,该研究可为柴油机的改进和优化提供参考。

关键词：柴油机优化配气正时喷油提前角 OPTIMUS

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弧形管静力学性能参数化计算方法

振动与冲击 2009年第10期28卷 214-216页

作者：周炜何琳顾太平海军工程大学振动与噪声研究所武汉430033

通过弹性薄壳无矩理论建立弧形管平衡方程和物理方程,推导出弧形管轴向变形与轴端受力参数关系式,从而给出了弧形管平衡性和静刚度的参数化计算方法;分析了弧形管平衡性与静刚度的影响因素以及两者之间的联系。结果表明,在几何结构确定... 详细信息

通过弹性薄壳无矩理论建立弧形管平衡方程和物理方程,推导出弧形管轴向变形与轴端受力参数关系式,从而给出了弧形管平衡性和静刚度的参数化计算方法;分析了弧形管平衡性与静刚度的影响因素以及两者之间的联系。结果表明,在几何结构确定的条件下,弧形管平衡性与静刚度取决于弹性模量和厚度的乘积,乘积越大,平衡性越好、静刚度越大,反之,则平衡性越差、静刚度越小。

关键词：弧形管平衡性静刚度隔振