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利用生物发光分析技术快速检测微生物的方法学研究

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发光学报 1999年第1期20卷 77-80页

作者：舒柏华赵志耀徐顺清周宜开同济医科大学环境医学研究所

阻碍三磷酸腺苷（ＡＴＰ）－虫萤光素酶发光体系用于微生物快速检测的主要因素之一，在于使用了不适当的非微生物ＡＴＰ清除方法和微生物ＡＴＰ提取方法．文章对非微生物ＡＴＰ的清除和微生物ＡＴＰ提取方法进行了实验研究．选择Ｔｒｉ... 详细信息

阻碍三磷酸腺苷（ＡＴＰ）－虫萤光素酶发光体系用于微生物快速检测的主要因素之一，在于使用了不适当的非微生物ＡＴＰ清除方法和微生物ＡＴＰ提取方法．文章对非微生物ＡＴＰ的清除和微生物ＡＴＰ提取方法进行了实验研究．选择ＴｒｉｔｏｎＸ－１００作为非微生物ＡＴＰ淬取剂．Ａｐｙｒａｓｅ作为非微生物ＡＴＰ清除剂．三氯醋酸作为微生物ＡＴＰ的淬取剂．观察了淬取剂及清除剂浓度对淬取效果及ＡＴＰ分析的影响．最佳工作浓度分别为：ＴｒｉｔｏｎＸ－１０００．１５％、ａｐｙｒａｓｅ０．１％、三氯醋酸１．５％．对超声、加热超声、加热、三氯醋酸、氯仿淬取微生物ＡＴＰ的方法作了对比研究，认为三氯醋酸方法更简便。

关键词：微生物三磷酸腺苷 ATP 生物发光分析快速检测

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二噁英的毒性与生物学检测研究进展

环境与职业医学 2004年第5期21卷 417-421页

作者：刘燕群周宜开吕斌郝巧玲任恕华中科技大学同济医学院环境医学研究所武汉430030

本文通过对二噁英毒性、致毒机制分析。

关键词：毒性生物检测二噁英毒性致毒机制

新型液相色谱-串联质谱法快速测定水产品中孔雀石绿及其隐色代谢物残留

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华中科技大学学报（医学版） 2006年第5期35卷 665-668页

作者：王鹏朱宽正梅素容林雁飞罗静周宜开华中科技大学同济医学院公共卫生学院环境医学研究所教育部环境与健康重点实验室武汉430030 湖北出入境检验检疫局武汉430022

目的采用液相色谱-串联质谱（LCMS／MS）建立水产品中孔雀石绿及其隐色代谢物残留的检测方法。方法均质后的水产品样品，用乙腈和乙酸铵缓冲液提取，合并提取液，用二氯甲烷反提取，经中性氧化铝柱和丙磺酸（PRS）柱固相萃取净化，没有... 详细信息

目的采用液相色谱-串联质谱（LCMS／MS）建立水产品中孔雀石绿及其隐色代谢物残留的检测方法。方法均质后的水产品样品，用乙腈和乙酸铵缓冲液提取，合并提取液，用二氯甲烷反提取，经中性氧化铝柱和丙磺酸（PRS）柱固相萃取净化，没有使用氧化铅柱在线氧化，色谱分离后直接进入串联质谱检测器。采用电喷雾（ESI）正离子扫描模式，多反应监控（MRM）方式检测，外标法定量。结果孔雀石绿和隐色孔雀石绿的检出限为0．5ng／g，线性方程的相关系数r〉0．99，在添加浓度0．5～2．0ng／g范围内，孔雀石绿回收率为78．4％～92．1％。隐色孔雀石绿回收率为82．4％～98．1％，相对标准偏差（RSD）均小于5．7％。结论此方法高效快速，结果准确，重现性好，适合于对水产品中孔雀石绿和隐色孔雀石绿的残留检测。

关键词：液相色谱-串联质谱孔雀石绿隐色代谢物水产品

下流式固定床反应器中反硝化细菌类群及其脱氮效率分析

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卫生研究 2007年第1期36卷 23-25页

作者：黄正陈晓春刘红艳张伟蔚钟秀华周宜开华中科技大学同济医学院环境医学研究所教育部环境与健康重点实验室武汉430030

目的研究下流式固定床反应器的脱氮效果及反硝化细菌群落结构。方法采用多孔陶粒作反硝化细菌固定化载体,研究下流式固定床生物反应器的适宜脱氮条件;扫描电子显微镜观察反硝化菌群的固定化形态并通过16SrDNA测序分析其组成。结果反应... 详细信息

目的研究下流式固定床反应器的脱氮效果及反硝化细菌群落结构。方法采用多孔陶粒作反硝化细菌固定化载体,研究下流式固定床生物反应器的适宜脱氮条件;扫描电子显微镜观察反硝化菌群的固定化形态并通过16SrDNA测序分析其组成。结果反应最适条件为T=35℃、pH8.0,合成废水处理10hNO3--N去除99%,其中前4h为91%,呈零级反应动力学过程。反硝化细菌主要为杆菌,16SrDNA同源性分析表明反硝化细菌有恶臭假单胞菌、硝基还原假单胞菌、嗜麦芽假单胞菌、睾丸酮丛毛单胞菌、苍白杆菌属等。结论下流式固定床生物反应器的脱氮效果良好,反硝化菌群丰富。

关键词：下流式固定床反应器反硝化细菌脱氮效率分析

^(32)P-后标记法检测DNA加合物进展

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中国公共卫生 2000年第11期16卷 1045-1047页

作者：姚群峰徐顺清周宜开同济医科大学环境医学研究所武汉430030

DNA加合物是化学毒物经生物转化后的亲电活性产物与DNA分子形成的共价结合物，是一种分子水平暴露标志物。DNA加合物在分子流行病学、分子毒理学及环境科学的研究中具有十分重要的意义，主要表现在以下几个方面：(1)通过对致癌物-DNA加... 详细信息

DNA加合物是化学毒物经生物转化后的亲电活性产物与DNA分子形成的共价结合物，是一种分子水平暴露标志物。DNA加合物在分子流行病学、分子毒理学及环境科学的研究中具有十分重要的意义，主要表现在以下几个方面：(1)通过对致癌物-DNA加合物的生物监测，可以更为确切的评估人类接触环境中化学毒物的剂量。DNA加合物提供的是个体“内接触”量或“有效接触”量，而且DNA加合物的形成与暴露量及暴露时间之间有明显的剂量－反应关系和时间－反应关系。(2)形成DNA加合物导致DNA分子的损伤，这种DNA损伤一旦不能被修复或被错误修复，就可能导致基因突变，进而导致肿瘤的发生。(3)检测DNA加合物能够提供化学毒物的代谢活化信息，研究DNA受损机理及个体对DNA损伤的修复能力。目前DNA加合物的检测方法除了各种色谱法外主要有：免疫法、荧光法和32p-后标记法等，其中32P-后标记法由于具有极高的灵敏度(1个加合物/108-10正常核酸)，从而成为近年测定DNA加合物的最主要方法之一，本文对32P-后标记法近年来的发展变化，存在的问题及发展方向作一简要综述。

关键词： DNA加合物 ^32P-后标记法检测毒物监测

核苷酸切除修复基因XPD反义RNA表达载体的构建及功能研究

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华中科技大学学报（医学版） 2003年第3期32卷 242-245页

作者：蒋易周李承吴晓明周宜开雷于生任恕华中科技大学同济医学院公共卫生学院环境医学研究所武汉430030

目的　构建核苷酸切除修复基因XPD反义RNA表达载体 ,初步探讨其对肺癌细胞DNA损伤修复能力及药物敏感性的影响。方法　通过RT PCR技术获取XPDcDNA (2～ 6 6 7bp)片段并反向插入真核 7表达载体反义载体pcDNA3 1,采用脂质体法将构建的载... 详细信息

目的　构建核苷酸切除修复基因XPD反义RNA表达载体 ,初步探讨其对肺癌细胞DNA损伤修复能力及药物敏感性的影响。方法　通过RT PCR技术获取XPDcDNA (2～ 6 6 7bp)片段并反向插入真核 7表达载体反义载体pcDNA3 1,采用脂质体法将构建的载体质粒转染肺癌细胞株A5 4 9,经G4 18筛选 ,采用抗肿瘤药物阿霉素、顺铂对细胞进行染毒干预 ,干预结果采用SCGE和MTT综合判定。结果　转染细胞XPDmRNA表达受到抑制。单细胞凝胶电泳显示转染细胞DNA损伤修复能力降低。MTT法显示转染细胞药物敏感性增高。结论　XPD反义RNA能降低肺癌细胞DNA损伤修复能力。

关键词：核苷酸切除修复 XPD基因反义核糖核酸药物敏感性

等位基因特异性扩增酶联免疫法检测CYP1A1基因多态性

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临床检验杂志 2001年第3期19卷 133-134页

作者：周新文石云周宜开华中科技大学同济医学院环境医学研究所武汉430030

目的　建立一种高效的基因多态性检测方法。方法　用等位基因特异性扩增 (ASA)和等位基因特异性扩增酶联免疫法(ASA ELISA)对CYP1A1基因m2多态性进行检测。结果　两种方法的检测结果基本一致 ,仅有 1例不相同。ASA ELISA将地高辛标记在... 详细信息

目的　建立一种高效的基因多态性检测方法。方法　用等位基因特异性扩增 (ASA)和等位基因特异性扩增酶联免疫法(ASA ELISA)对CYP1A1基因m2多态性进行检测。结果　两种方法的检测结果基本一致 ,仅有 1例不相同。ASA ELISA将地高辛标记在扩增产物上 ,然后通过酶联免疫法检测扩增产物 ,检测灵敏度与等位基因特异性扩增 (ASA)后琼脂糖凝胶电泳相比高 10 0倍。结论　该方法具有操作简单、快速、灵敏度高等特点 ,可用于大标本量的基因多态性检测。

关键词：基因多态性等位基因特异性扩增酶联免疫法 CYP1A1基因

Detection of DNA Aneuploidy in Exfoliated Airway Epithelia Cells of Sputum Specimens by the Automated Image Cytometry and Its Clinical Value in the Identification of Lung Cancer

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Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2004年第4期24卷 407-410页

作者：杨健周宜开 School of Health Tongji Medical Collage Huazhong University of Science and Technology

To evaluate the value of detecton of DNA aneuploidy in exfoliated airway epithelia cells of sputum specimens by the automated image cytometry for the identification of lung cancer, 100 patients were divided into patient group (50 patients with lung cancer) and control group (30 patients with tuberculosis and 20 healthy people). Sputum was obtained for the quantitative analysis of DNA content of exfoliated airway epithelial cells with the automated image cytometry, together with the examinations of brush cytology and conventional sputum cytology. Our results showed that DNA aneuploidy (DI>2.5 or 5c) was found in 20 out of 50 sputum samples of lung cancer, 1 out of 30 sputum samples from tuberculosis patients, and none of 20 sputum samples from healthy people. The positive rates of conventional sputum cytology and brush cytology were 16 % and 32 %, which was lower than that of DNA aneuploidy detection by the automated image cytometry (P05). Our study showed that automated image cytometry, which uses DNA aneuploidy as a marker for tumor, can detect the malignant cells in sputum samples of lung cancer and it is a sensitive and specific method serving as a complement for the diagnosis of lung cancer.

关键词： automated image cytometry lung cancer DNA aneuploidy sputum

农村文化建设必须紧扣和谐社会的目标要求进行

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世纪行 2009年第3期 15-16页

作者：周宜开全国政协农工党湖北省湖北省政协

当前，推进农村文化建设的各项政策、措施正在贯彻落实。然而，我们也应看到。农村文化建设在相当程度上与构建和谐社会的目标要求相脱节，其对社会主义新农村建设的促进作用远没有体现出来，以至在一些地方出现了影响农村社会和谐、安... 详细信息

当前，推进农村文化建设的各项政策、措施正在贯彻落实。然而，我们也应看到。农村文化建设在相当程度上与构建和谐社会的目标要求相脱节，其对社会主义新农村建设的促进作用远没有体现出来，以至在一些地方出现了影响农村社会和谐、安定的诸多矛盾和问题。主要表现在以下三个方面：一是农村社会风气日下。农民精神涣散．思想空虚，无所寄托，生活方式近乎病态化；二是封建迷信死灰复燃。

关键词：农村文化建设构建和谐社会社会主义新农村建设农村社会和谐社会风气生活方式封建迷信病态化