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抗人羧酸酯酶-Ⅱ多克隆抗体的制备、鉴定及应用

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第2期25卷 158-160,163页

作者：吴春铃包红霞唐晓波朱大岭哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地药物与内源性物质代谢省高校重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的:构建人羧酸酯酶-Ⅱ(hCE-Ⅱ)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,制备多克隆抗体(pAb),并对其特性进行初步鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-GST)和pET-32a-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-His)。在... 详细信息

目的:构建人羧酸酯酶-Ⅱ(hCE-Ⅱ)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,制备多克隆抗体(pAb),并对其特性进行初步鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-GST)和pET-32a-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-His)。在宿主菌BL21内进行诱导表达,hCE-Ⅱ-GST融合蛋白作为免疫原免疫大耳白兔,用辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,并用间接ELISA、West-ernblot及免疫组化检测抗体的灵敏度和特异性。结果:成功制备了抗hCE-Ⅱ的多克隆抗体。Westernblot鉴定表明该抗体可特异性识别重组蛋白以及天然的人肝微粒体蛋白。免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性结合肝包浆中的hCE-Ⅱ蛋白,而不与血管平滑肌细胞结合。结论:制备的pAb有较高的效价和较好的特异性,为肝癌诊断试剂盒的研究奠定了实验基础。

关键词： hCE-Ⅱ 原核表达融合蛋白多克隆抗体

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兔抗人羧酸酯酶1多克隆抗体的制备与鉴定

细胞与分子免疫学杂志 2009年第6期25卷 516-518页

作者：朱晓美李淑珍吴春铃包红霞朱大岭唐晓波哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学药学院生物医药工程重点实验室省部共建国家重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的:制备兔抗人羧酸酯酶1(CES1)多克隆抗体(pAb),并对抗体进行特性鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CES1(即CES1-GST)和pET-32a-CES1(即CES1-His)。CES1-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb,辛酸-硫酸铵... 详细信息

目的:制备兔抗人羧酸酯酶1(CES1)多克隆抗体(pAb),并对抗体进行特性鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CES1(即CES1-GST)和pET-32a-CES1(即CES1-His)。CES1-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb,辛酸-硫酸铵法纯化抗体,采用Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性。结果:CES1-GST和CES1-His融合蛋白均在大肠杆菌中以包涵体形式大量表达。兔抗人CES1pAb效价为1∶64000。Western blot鉴定表明,该抗体可识别重组人CES1蛋白,也可特异地识别人肝微粒体中的CES1亚基。免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性识别正常肝组织中的CES1蛋白。结论:成功地制备了兔抗人CES1pAb,该抗体可应用于ELISA、Western blot、免疫组化等实验,为进一步研究CES1的功能提供了特异性检测工具。

关键词： CES1 重组蛋白多克隆抗体

在大鼠中15-LO/15-HETE参与缺氧对K_V1.5表达的抑制作用

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中国药理学通报 2009年第3期25卷 326-331页

作者：褚晓杰张家宁郭蕾吴春铃张爽唐晓波朱大岭哈尔滨医科大学药学院黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验培育基地黑龙江哈尔滨150086

目的采用分子生物学技术从组织和细胞水平上观察阻断15-LO/15-HETE后,缺氧对KV1.5表达的影响。方法通过酶法分离、培养Wistar大鼠肺动脉血管平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)和大鼠肺动脉,应用Western blot和RT... 详细信息

目的采用分子生物学技术从组织和细胞水平上观察阻断15-LO/15-HETE后,缺氧对KV1.5表达的影响。方法通过酶法分离、培养Wistar大鼠肺动脉血管平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)和大鼠肺动脉,应用Western blot和RT-PCR方法分别从蛋白质水平和mRNA水平上观察在15-LO阻断剂CDC和NDGA作用下,缺氧对KV1.5表达的影响。结果从组织和细胞水平上,用CDC和NDGA阻断15-LO即阻断了内源性15-HETE的产生,KV1.5的表达量在蛋白质水平和mRNA水平与未阻断组比较都增加。在阻断了内源性15-HETE的产生以后,加入外源性15-HETE,KV1.5的表达量减低。说明不仅内源性15-HETE参与诱导缺氧对KV1.5表达的影响,外源性15-HETE也同样能影响缺氧条件下KV1.5的表达量。但在阻断了内源性15-HETE的产生以后,加入外源性15-HETE,KV1.5的表达量减低。说明不仅内源性15-HETE参与诱导缺氧对KV1.5表达的影响,外源性15-HETE也同样能影响缺氧条件下KV1.5的表达量。结论上述结果表明,从大鼠肺动脉组织和细胞水平上,内源性15-HETE介导了缺氧对KV1.5表达的抑制作用。

关键词： 15-HETE 缺氧肺动脉平滑肌细胞肺动脉

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鼠抗人CD20单克隆抗体的制备与鉴定

细胞与分子免疫学杂志 2009年第5期25卷 454-456页

作者：包红霞吴春铃李淑珍唐晓波褚晓杰王爽张家宁朱大岭哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室哈尔滨医科大学黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学药物与内源性物质代谢省高校重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定。方法:以人单核细胞cD-NA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CD20(即CD20-GST)和pET-32a-CD20(即CD20-His)。以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠... 详细信息

目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定。方法:以人单核细胞cD-NA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CD20(即CD20-GST)和pET-32a-CD20(即CD20-His)。以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠制备(mAb),用间接ELISA法测定抗体的效价,Western blot、免疫荧光鉴定其特异性及免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。结果:CD20-GST和CD20-His蛋白在大肠杆菌中可高效表达,经纯化后可获得高纯度的CD20蛋白,经细胞融合得到1株稳定分泌CD20抗体的杂交瘤细胞株,Western blot和免疫组化显示抗CD20mAb与CD20蛋白具有良好的反应性。结论:成功制备高纯度CD20蛋白并以此为抗原制备了1株能够稳定分泌抗人CD20的鼠mAb的杂交瘤细胞株BD11F4,为进一步研究CD20对非霍奇金淋巴瘤的诊断治疗提供基础。

关键词： CD20 原核表达融合蛋白抗体制备

高浓度的staurosporine aglycone激活大鼠肺动脉平滑肌细胞中的ERK1／2

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中国药理学通报 2009年第1期25卷 34-38页

作者：张家宁褚晓杰吕昌莲吴春铃包红霞唐晓波朱大岭哈尔滨医科大学药学院黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验培育基地黑龙江哈尔滨150086

目的有报道表明staurosporine作为一种蛋白激酶C（PKC）的抑制剂，可以在多种细胞系内调节细胞外信号调节激酶（ERK1／2）的活性，但是它的衍生物staurosporineagly—COfle（SA）是否具有相同的作用还不清楚，本次实验旨在阐明其对ERK1... 详细信息

目的有报道表明staurosporine作为一种蛋白激酶C（PKC）的抑制剂，可以在多种细胞系内调节细胞外信号调节激酶（ERK1／2）的活性，但是它的衍生物staurosporineagly—COfle（SA）是否具有相同的作用还不清楚，本次实验旨在阐明其对ERK1／2活性的调节作用。方法培养至4～8代的大鼠肺动脉平滑肌细胞，经过SA处理后提取细胞蛋白，应用Westernblot方法检测磷酸化ERK1／2的含量，观察不同浓度和时间点的SA对ERK1／2活性的影响。结果在纳摩尔浓度水平的SA可以降低大鼠肺动脉平滑肌细胞中ERK1／2的磷酸化水平，但是30μmol·L-1的SA可以激活ERK1／2，这种激活作用可以被丝裂素活化蛋白激酶的激酶（MEK）的抑制剂PD98059或蛋白激酶A（PKA）的激活剂异丙肾上腺素（isoproteren01）所抑制。结论sA对肺动脉平滑肌细胞中的ERK1／2活性有双向调节作用，这种作用是通过PKC和（或）PKA通路产生的。

关键词： Staurosporine aglycone(SA) 细胞外信号调节激酶蛋白激酶C 蛋白激酶A

面向应急监测通信网时空覆盖优化的递阶遗传算法

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地球信息科学学报 2024年第8期26卷 1880-1892页

作者：胡文焯吴春武汉市自然资源保护利用中心武汉430014

大规模突发环境事故往往会损害受灾地区光缆、基站等网络基础设施,亟需借助现有通讯设备搭建临时的自组织通信网络以传输污染物浓度等应急监测数据,使应急指挥中心及时判别污染态势并制定相应挽救策略。因此地空通信网覆盖部署成为断网... 详细信息

大规模突发环境事故往往会损害受灾地区光缆、基站等网络基础设施,亟需借助现有通讯设备搭建临时的自组织通信网络以传输污染物浓度等应急监测数据,使应急指挥中心及时判别污染态势并制定相应挽救策略。因此地空通信网覆盖部署成为断网场景下应急监测任务顺利实施的关键。本文采用空间分析方法驱动应急通信车至最佳位置,基于此设计具有时空递阶染色体矩阵、适应度综合评价模型、协同进化机制的混合递阶遗传算法,智能化部署通信节点以组建时空覆盖的地空通信网,实现监测数据自主传输。算法综合考虑应急监测人员分布、气候条件、通信资源工作状况及通信性能等因素,若偶发通信资源新增或失效、通信需求调整等变动,支持适应性更新现场通信节点时空位置和通信链路。以新疆一处尾矿库为实验样区进行验证分析,基于三维地球平台可视化地空通信网部署方案并评估算法适应度收敛能力、动态场景应变性和实地实施效力。本算例适应度经260次迭代后约提升30%,相较于随机搜索等其他5种算法展现出更优越的收敛速度和提升幅度,通信节点在续航时间内保障了不同场景监测任务点的全面覆盖和均衡分配,满足实地应急监测响应需求,证明了算法可靠性、可行性。

关键词：应急通信车通信无人机通信时空覆盖通信链路应急监测递阶遗传算法粒子群算法

基于鲁棒观测器的深度强化学习垂直起降运载器姿态稳定研究

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系统工程与电子技术 2024年第3期46卷 1038-1047页

作者：李彦铃罗飞舟葛致磊西北工业大学航天学院陕西西安710072 中国运载火箭技术研究院北京100076

针对考虑弹性振动、模型不确定干扰下的垂直起降运载器姿态稳定问题,将鲁棒观测器和深度强化学习中的近端策略优化算法相结合,研究了一种基于鲁棒观测器的近端策略优化(robust observer-based proximal policy optimization,ROB-PPO)方... 详细信息

针对考虑弹性振动、模型不确定干扰下的垂直起降运载器姿态稳定问题,将鲁棒观测器和深度强化学习中的近端策略优化算法相结合,研究了一种基于鲁棒观测器的近端策略优化(robust observer-based proximal policy optimization,ROB-PPO)方法。该方法设计鲁棒观测器重构受弹性振动干扰的运载器姿态信息,将鲁棒观测器与运载器动力学模型组成环境,将鲁棒观测器得到的重构姿态作为深度强化学习算法的状态,使得深度强化学习智能体与之不断交互,从而训练智能体控制运载器姿态稳定。仿真结果表明,所研究的ROB-PPO算法相较于目前常用的自适应模糊比例-积分-微分(proportional-integral-derivative,PID)算法鲁棒性更强,收敛速度更快。最后,在自主研制的垂直起降运载器上验证了所提出算法有效性。

关键词：垂直起降运载器姿态控制鲁棒观测器深度强化学习

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基于球杆仪的五轴数控机床误差快速检测方法

仪器仪表学报 2024年第1期45卷 138-148页

作者：焦安铃陈光胜上海理工大学机械工程学院上海200093

几何误差是五轴数控机床重要误差源,针对传统测量方法仪器昂贵、测量周期长问题,提出基于球杆仪的五轴数控机床几何误差快速检测方法。对于机床的平动轴误差,利用多体系统理论及齐次坐标变换法,建立平动轴空间误差模型,通过球杆仪在同... 详细信息

几何误差是五轴数控机床重要误差源,针对传统测量方法仪器昂贵、测量周期长问题,提出基于球杆仪的五轴数控机床几何误差快速检测方法。对于机床的平动轴误差,利用多体系统理论及齐次坐标变换法,建立平动轴空间误差模型,通过球杆仪在同一平面不同位置进行两次圆轨迹,辨识出4项平动轴关键线性误差;针对五轴机床的转台和摆动轴,设计基于球杆仪的多条空间测试轨迹,完整求解出旋转轴12项几何误差。实验结果显示,所提方法获得转角定位误差与激光干涉仪法最大误差为0.001 8°,利用检测结果进行机床空间误差补偿,测试轨迹偏差由16μm降至4μm,为补偿前的25%,验证了方法的有效性。提出的五轴机床几何误差检测方法方便、便捷,适用于工业现场。

关键词：五轴数控机床几何误差快速检测球杆仪

典型重工业城市PM_(2.5)化学组成特征及来源解析

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中国环境科学 2024年第6期44卷 2994-3003页

作者：齐超楠齐鹏张艺铃北京工业大学环境与能源工程学院区域大气复合污染防治北京市重点实验室北京100124

通过实时高分辨率在线监测2019年邯郸市城区PM_(2.5)中碳组分和水溶性无机离子的质量浓度,分析研究了2019年全年邯郸市PM_(2.5)组分的变化特征和不同污染情景下PM_(2.5)组分的变化规律,同时采用正定矩阵因子分解模型和后向轨迹模型探究... 详细信息

通过实时高分辨率在线监测2019年邯郸市城区PM_(2.5)中碳组分和水溶性无机离子的质量浓度,分析研究了2019年全年邯郸市PM_(2.5)组分的变化特征和不同污染情景下PM_(2.5)组分的变化规律,同时采用正定矩阵因子分解模型和后向轨迹模型探究了PM_(2.5)及其组分的来源.结果表明:研究期间邯郸市PM_(2.5)中OC和EC的月变化和日变化特征相似.水溶性无机离子的季节变化特征为冬季>秋季>春季>夏季,NO_(3)-、SO_(4)^(2-)和NH_(4)^(+)是PM_(2.5)中主要的水溶性无机离子组分,在四个季节均与PM_(2.5)有较强的相关性.邯郸市PM_(2.5)呈弱碱性,NH4+主要以(NH_(4))_(2)SO_(4)、NH_(4)NO_(3)和NH_(4)Cl的形式存在.OC、EC和二次无机离子在PM_(2.5)污染日和O_(3)污染日有所增加.冬季污染加重时,碳组分和水溶性离子质量浓度随PM_(2.5)的增加而升高,OC和EC占比下降,SO_(4)^(2-)和NO_(3)-占比升高,且SOR和NOR也逐渐增加.PMF分析结果表明二次源,机动车源和燃烧源是邯郸市大气颗粒物污染的主要来源.后向轨迹结果表明邯郸市主要受到河南北部,山东西北部,山西中部和河北南部传输影响.该研究将会为重工业城市大气污染防治提供重要的科学理论依据.

关键词： PM_(2.5) 碳组分水溶性无机离子污染特征来源解析