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作者：吴明健中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,发病率一直呈上升趋势,早期诊断对肝癌的防治是十分重要的。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3基因(GPC3)是新近发现的具有肝癌组织特异性的高表达基因,其在正常肝组织及... 详细信息

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,发病率一直呈上升趋势,早期诊断对肝癌的防治是十分重要的。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3基因(GPC3)是新近发现的具有肝癌组织特异性的高表达基因,其在正常肝组织及良性肝脏病变中不表达,而在肝癌中高表达,可能是一种潜在的敏感性好、特异性高的新型肝细胞癌的标志物。GPC3的生物学功能还不是很清楚,需要进行深入研究。肝癌细胞具有容易侵犯血管的特性,极易造成癌细胞的血行播散,这可能是导致肝癌切除术后及肝移植术后肿瘤复发、转移率高、预后较差的重要原因,因此对肝癌病人外周血进行循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell, CTC)检测,对于判断肝癌的病理分期、治疗效果及预后都具有重要的意义。本研究制备了针对GPC3的单抗和多抗,为建立灵敏的肝细胞癌早期诊断方法及深入研究GPC3的生物学功能提供了技术手段;建立了肝癌CTC检测方法并评价了CTC检测在肝癌病人临床诊断中的应用价值。 1.抗-GPC3抗体的制备及鉴定 ①.抗-GPC3多抗的制备及鉴定:本研究采用基因工程技术重组表达GPC3-N端蛋白。从人肝癌细胞株HepG2中提取总RNA,反转录合成cDNA后用RT-PCR扩增出GPC3-N端基因;利用基因重组技术,将这部分GPC3-N端基因片段(编码32-249aa )亚克隆至pQE30原核表达载体,表达并纯化GPC3-N末端蛋白;用纯化的蛋白GPC3-N免疫大耳白兔制备针对GPC3的特异性抗体。ELISA检测结果显示,用重组蛋白GPC3-N免疫大耳白兔制备的兔源多克隆抗体效价高,其滴度达到1:20万以上;采用硫酸铵沉淀法纯化了兔多抗血清,用Western blot及细胞免疫荧光技术对纯化后的兔多抗进行免疫学鉴定。实验结果表明,制备的多克隆抗体是针对GPC3-N重组蛋白的高效价抗体。应用生物分析软件预测分析GPC3蛋白优势抗原表位,根据分析结果合成2个多肽(LW1和LW2),免疫大耳白兔制备相应的多克隆抗体。ELISA检测显示,LW1制备的兔源多克隆抗体有较高效价,其滴度可达到1:20万以上;采用硫酸铵沉淀法纯化兔多抗血清,用细胞免疫荧光技术对纯化后的兔多抗进行免疫学鉴定,结果显示LW1多克隆抗体能特异识别GPC3蛋白。 ②.抗- GPC3单克隆抗体的制备与鉴定:以合成的LW1及LW2多肽免疫BALB/c小鼠,第三次加强免疫后,检测小鼠血清抗体效价,抗体滴度达到1:20万以上。选择效价最高的免疫小鼠进行细胞融合制备单克隆抗体。经筛选和鉴定,成功获得了10株高效价单抗细胞株。用Western blot法,以纯化的单克隆抗体为一抗,检测肝癌细胞系HepG2、Huh7、人正常肝细胞L02中GPC3-N的表达,对抗体的特异性进行鉴定。结果显示LW1抗单克隆抗体能特异识别我们制备的重组蛋白GPC3-N和肝癌细胞上表达的GPC3蛋白。采用细胞免疫荧光技术检测肝癌细胞系HepG2,宫颈癌细胞细胞系Hela和正常肝细胞系L02中GPC3的表达情况,结果显示GPC3蛋白定位于癌细胞胞膜及胞浆,只在肝癌细胞系里有特异表达,在人正常细胞及宫颈癌细胞中不表达。将制备的抗-GPC3单抗应用于肝癌患者循环肿瘤细胞的检测中,结果显示抗-GPC3单抗能特异识别肝癌病人外周循环血液中的肝癌细胞。实验结果表明,本研究获得的抗-GPC3单抗具有良好的特异性,为深入研究GPC3蛋白的生物学功能及其在诊断中的应用奠定了基础。 2.肝癌病人外周血循环肿瘤细胞检测方法研究外周血循环肿瘤细胞(CTC)指自发或因诊疗操作从原发肿瘤脱落下来从而进入外周血循环的肿瘤细胞。CTC检测在肿瘤的分期、转移、复发的早期预测等方面具有重要的意义。本研究采用免疫磁珠分离技术,去除肝癌患者外周血中的绝大多数白细胞,从而将血中剩余的稀有细胞包括肿瘤细胞进行富集,再利用免疫荧光技术对肿瘤细胞进行鉴别诊断。通过肝癌细胞回收实验验证了CTC富集方法的有效性。实验结果显示,对血液标本中不同个数的肝癌细胞的回收率达到99%。说明该富集方法能有效的去除血液中的白细胞,准确而稳定的回收血液标本中的肝癌细胞。采用该技术方法对53例原发肝癌患者外周血液标本进行CTC检测。实验结果表明,30例早期肝癌病人外周血液样本中的CTC的检出率为26.7%;在17例中晚期肝癌未化疗患者血液中CTC的检出率为94.12%;在中晚期肝癌化疗后患者中,CTC的检出率为16.67%。由此可知,在中晚期肝癌未化疗患者中CTC检测的检出率最高。在8例早期肝癌患者肝移植手术前采血样本CTC检测为阳性,可能提示这8例患者术后复发的几率增大。在6例中晚期肝癌病人化疗后采集的血液样本中,只有1例CTC检测阳性,且很低CTC数目为1,其它5例CTC为

关键词：磷脂酞肌醇蛋白聚糖-3 肝癌循环肿瘤细胞表达诊断

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生物遗态多孔炭制备及其孔表面功能化修饰

生物遗态多孔炭制备及其孔表面功能化修饰

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作者：吴明健湖南大学

学位级别：硕士

木材从微观到宏观尺度都表现出结构和性能的各向异性。它具有复杂的层级结构,其连通的细胞孔洞,使得木材在低密度的同时具有较高的强度、好的韧性、弹性以及抵抗破坏的能力。以木材作为模板或者基体,通过一定的制备手段将其转化成具有... 详细信息

木材从微观到宏观尺度都表现出结构和性能的各向异性。它具有复杂的层级结构,其连通的细胞孔洞,使得木材在低密度的同时具有较高的强度、好的韧性、弹性以及抵抗破坏的能力。以木材作为模板或者基体,通过一定的制备手段将其转化成具有宏观有序多孔的结构或功能材料,已成为新型生物遗态材料研究的热点。本文以木材为研究对象,通过惰性气氛下可控炭化得到保留其生物遗态的多孔炭材料,并对这种多孔炭表面进行了功能化修饰。较系统地研究了三种典型木材(松木,椴木,白杨木)和楠竹的显微形貌以及不同温度炭化下孔隙率和密度的变化规律。用FTIR、Raman、XPS、XRD等手段重点研究了松木的炭化过程,用TG-DTG考察了其在空气中的抗氧化性能。结果表明:不同种类木材具有不同的孔径形状和尺寸分布,随着炭化温度的升高,多孔炭的密度降低,气孔率升高。松木在惰性气氛下炭化,在不同炭化温度阶段具有不同的表面态。松木在空气中的氧化起始于约400oC,到528oC时氧化速率最大,588oC时氧化基本结束,氧化过程表现出“自加速”的特性。采用有机前驱体浸渍-裂解技术(PIP),将聚碳硅烷(PCS)在多孔炭孔内沉积裂解,通过控制PCS的浓度和PIP循环次数,制备出孔径可控的SiC/多孔炭复合材料。PCS通过PIP之后在多孔炭表面形成无定形的SiC层;SiC与多孔炭界面呈梯度变化,结合良好。随着PIP次数的增加,多孔炭孔洞逐渐被SiC填充,复合材料的比表面呈指数下降,其力学性能先升高而后降低。在PIP循环5次时,径向抗压强度达到最大,为56.7MPa,循环6次时,轴向抗压强度达到最大,为17.0MPa。SiC组分的加入使得材料的起始氧化温度提高了约150oC。用水热溶剂法在多孔炭的孔表面进行了ZnO修饰的探索性工作。研究了不同反应时间,溶液浓度和不同表面处理方式对ZnO成核生长及其形貌的影响。结果表明:溶液中水热生长4-32h可得到形貌规整的微米纤锌矿晶体,反应时间对晶体尺寸影响不大。溶液浓度是影响多孔炭表面ZnO晶体形貌的关键因素。对多孔炭表面喷金处理后的金颗粒不能诱导ZnO的外延生长,而正硅酸乙酯(TEOS)薄膜的存在改善了多孔炭与水热反应溶液浸润性,从而提高表面ZnO成核生长的能力。在裸露的多孔炭表面可以“种植”ZnO晶体,通过种植晶种的方法可以进而生长出具有放射状的ZnO晶须丛,为多孔炭表面的功能化修饰提供了可行的技术方案。

关键词：生物遗态多孔炭功能化修饰炭化 PIP 水热法

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电动汽车充放电预约的隐私保护研究

电动汽车充放电预约的隐私保护研究

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作者：吴明健华北电力大学(北京)

学位级别：硕士

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不同方法治疗肝郁脾虚型帕金森病失眠的临床疗效观察

不同方法治疗肝郁脾虚型帕金森病失眠的临床疗效观察

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作者：吴明健安徽中医药大学

学位级别：硕士

研究目的:通过针刺、中药和西药三种方法治疗肝郁脾虚型帕金森病失眠,观察其临床疗效、安全性,以期为临床工作提供不同的治疗方案和理论依据。研究方法:收集2018年12月019年11月就诊于安徽省针灸医院脑病一科门诊及病房符合纳入标准的... 详细信息

研究目的:通过针刺、中药和西药三种方法治疗肝郁脾虚型帕金森病失眠,观察其临床疗效、安全性,以期为临床工作提供不同的治疗方案和理论依据。研究方法:收集2018年12月019年11月就诊于安徽省针灸医院脑病一科门诊及病房符合纳入标准的肝郁脾虚型帕金森病失眠的患者共60例。随机分为针刺组、中药组、西药组三组,每组各20例。在西医常规的抗帕金森病治疗基础上,针刺组予针刺治疗(取穴:百会、神庭、大椎、阳陵泉双、合谷双、太冲双、三阴交双);中药组予导师自拟方口服治疗(组方:远志10g、菖蒲10g、郁金10g、玫瑰花10g、柴胡10g、地龙10g、白术10g、茯苓10g、葛根10g、白芍20g、炙甘草3g);西药组予艾司唑仑片睡前口服。分别于治疗前和治疗4周后,通过PSQI、PDSS、中医证候积分表等进行指标评定,比较三组治疗前后,以及治疗后各组之间的评分和数据变化,评价临床疗效。研究结果:(1)三组患者治疗前H-Y分级、年龄、性别、病程等基本情况差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。(2)三组患者治疗前PSQI评分、PDSS评分以及中医证候积分各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)三组患者治疗后PSQI评分、PDSS评分以及中医证候积分较治疗前比较,有显著性差异(P<0.01)。(4)三组患者治疗后针刺组与西药组PSQI、PDSS评分及中医证候积分比较,差异有统计学意义(P<0.05);西药组与中药组PSQI、PDSS评分及中医证候积分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)治疗后总有效率比较,针刺组为60%,中药组为95%,西药组为70%。其中针刺组与西药组比较,差异有统计学意义(P<0.05);西药组与中药组比较,差异有统计学意义(P<0.05);针刺组与中药组比较,有显著性差异(P<0.01)。结论:(1)针刺、中药以及西药治疗均能降低肝郁脾虚型帕金森病失眠患者PSQI睡眠质量评分、PDSS评分以及中医证候积分,即三种临床治疗方法均能有效改善肝郁脾虚型PD患者失眠症状;(2)本次针对肝郁脾虚型帕金森病失眠的三种治疗方法中,经研究结果表明中药治疗效果最佳,其次为西药治疗,最后为针刺治疗。

关键词：肝郁脾虚型帕金森病失眠不同方法临床观察

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基于液相色谱联合离子阱-飞行时间质谱技术的海洛因滥用成瘾大鼠血清代谢组学研究

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分析试验室 2014年第2期33卷 183-186页

作者：吴明健王玫杨瑞琴张大明中国人民公安大学北京100038 北京市公安局法医检验鉴定中心北京100085

建立海洛因成瘾动物模型,研究海洛因成瘾大鼠血清代谢物变化,寻找其潜在的标志物。实验动物设成瘾组和空白对照组,运用液相色谱联合离子阱-飞行时间质谱(LC/MS-IT-TOF)分析方法研究海洛因成瘾对大鼠血清代谢变化的影响。分别采用主成分... 详细信息

建立海洛因成瘾动物模型,研究海洛因成瘾大鼠血清代谢物变化,寻找其潜在的标志物。实验动物设成瘾组和空白对照组,运用液相色谱联合离子阱-飞行时间质谱(LC/MS-IT-TOF)分析方法研究海洛因成瘾对大鼠血清代谢变化的影响。分别采用主成分分析(PCA)、偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)分析成瘾组和正常对照组之间的代谢差异。结果表明成瘾组和对照组大鼠在血清代谢水平上具有明显差异,经统计学分析初步筛选出26个潜在的生物标记物的质荷比。海洛因成瘾代谢组学研究具有一定的可行性,代谢组学在判定海洛因成瘾与否方面具有一定的潜在价值。

关键词：海洛因代谢组学液相色谱联合离子阱-飞行时间质谱

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热处理温度对Ag^+、Zn^(2+)共掺杂TiO_2薄膜微观结构及抗菌性能的影响

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机械工程材料 2011年第10期35卷 36-40页

作者：公伟伟徐松梅吴明健高朋召湖南大学材料科学与工程学院长沙410082 湘潭大学低维材料及其应用技术教育部重点实验室湘潭411105

采用溶胶-凝胶法制备了Ag+、Zn2+共掺杂的TiO2纳米薄膜,研究了温度对Ag-Zn-TiO2体系稳定性的影响;采用XPS、SEM、XRD和抗菌性测试等方法研究了热处理温度对薄膜表面化学组成、微观结构、晶粒尺寸及抗菌性能的影响。结果表明:掺杂薄膜均... 详细信息

采用溶胶-凝胶法制备了Ag+、Zn2+共掺杂的TiO2纳米薄膜,研究了温度对Ag-Zn-TiO2体系稳定性的影响;采用XPS、SEM、XRD和抗菌性测试等方法研究了热处理温度对薄膜表面化学组成、微观结构、晶粒尺寸及抗菌性能的影响。结果表明:掺杂薄膜均匀致密,表面存在的白色点状团簇物为Ag2O,粒径约10nm;而Zn2+取代Ti4+进入TiO2晶格中;掺杂离子能阻抑TiO2晶粒的生长;掺杂薄膜在紫外线照射下抗菌率为100%,无光照时为99.5%,均显著优于未掺杂薄膜的;随热处理温度的升高,薄膜的抗菌活性先增加后降低,最佳热处理温度为500℃。

关键词：共掺杂 TiO2薄膜抗菌性能

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PIP法制备孔径可调的有序多孔C/SiC复合材料

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湖南大学学报（自然科学版） 2010年第10期37卷 63-66页

作者：高朋召李骏驰汪文祥吴明健湖南大学材料科学与工程学院湖南长沙410082

通过对原生态木材进行可控炭化,得到了保留木材生物形态的多孔炭模板(BPC),用有机硅烷前驱体对此模板浸渍进而裂解(PIP),可制备出孔径有序且大小可调的多孔炭/碳化硅复合材料(BPC/SiC).采用XRD,SEM,氮表面吸附等方法研究了复合材料的微... 详细信息

通过对原生态木材进行可控炭化,得到了保留木材生物形态的多孔炭模板(BPC),用有机硅烷前驱体对此模板浸渍进而裂解(PIP),可制备出孔径有序且大小可调的多孔炭/碳化硅复合材料(BPC/SiC).采用XRD,SEM,氮表面吸附等方法研究了复合材料的微观结构、抗氧化和力学性能等.结果表明PIP裂解产物为微晶态SiC,与多孔炭模板内表面结合良好,使炭模板氧化起始温度及峰值温度均提高150℃;控制浸渍剂浓度和浸渍次数,可控制复合材料的孔径尺寸和形状;浸渍-热解5次循环时,复合材料径向抗压强度可达56.7 MPa,6次循环时,轴向抗压强度可达17.0 MPa.

关键词：生物模板法孔径可调力学性能

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《彼岸花》:城市的逃离与故乡的寻找

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网络文学评论 2019年第4期 119-125页

作者：吴明健肇庆学院文学院

《彼岸花》是安妮宝贝的第一部长篇小说作品,正因是"首部",则更能看出安妮在表达或建构自己的思想领域的倾向,而"城市"与"故乡"的话题是历年研究安妮小说所缺乏的角度。围绕"城市"和"故乡"的角度,安妮在《彼岸花》中用"容器"这个意向代... 详细信息

《彼岸花》是安妮宝贝的第一部长篇小说作品,正因是"首部",则更能看出安妮在表达或建构自己的思想领域的倾向,而"城市"与"故乡"的话题是历年研究安妮小说所缺乏的角度。围绕"城市"和"故乡"的角度,安妮在《彼岸花》中用"容器"这个意向代指城市,显露出城市的消极之处。进而试图通过追寻故乡的理想地来弥补对城市的失意,并最后告诉读者故乡不能抵达的事实。与此同时,《彼岸花》亦是一部"都市文学"小说,它展露的城市生活对研究人类心灵问题具有重大的意义。

关键词：《彼岸花》城市故乡

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代谢组学及其在法医毒理学中的应用

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中国法医学杂志 2013年第1期28卷 37-40页

作者：吴明健王玫杨瑞琴张大明中国人民公安大学北京100038 北京市公安局法医检验鉴定中心北京100085

代谢组学是上世纪90年代中期发展起来的研究细胞和生物体的所有代谢中间体和终产物的一门新兴学科。其研究对象一般为分子量在1 000Da以下的小分子。代谢组学通过对生物体系中的小分子化合物进行定性定量分析,解析生物体系的代谢途径并... 详细信息

代谢组学是上世纪90年代中期发展起来的研究细胞和生物体的所有代谢中间体和终产物的一门新兴学科。其研究对象一般为分子量在1 000Da以下的小分子。代谢组学通过对生物体系中的小分子化合物进行定性定量分析,解析生物体系的代谢途径并揭示内源性小分子化合物与毒性、疾病、生命活动规律等的相互关系。本文综述代谢组学的概况及其在法医毒理学中的应用现状,为相关研究和应用提供参考。

关键词：法医毒理学代谢组学应用

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代谢组学及其应用的研究进展

代谢组学及其应用的研究进展

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第四届全国“公共安全领域中的化学问题”学术研讨会

作者：吴明健杨瑞琴中国人民公安大学

代谢组学是上世纪90年代中期发展起来的一门新兴学科。代谢组学运用色谱、质谱、核磁共振（NMR）、毛细管电泳（CE）等技术对分子量一般在1000Da以下的小分子化合物进行研究。其通过对生物体系中的小分子化合物进行定性定量分析,来研究... 详细信息

代谢组学是上世纪90年代中期发展起来的一门新兴学科。代谢组学运用色谱、质谱、核磁共振（NMR）、毛细管电泳（CE）等技术对分子量一般在1000Da以下的小分子化合物进行研究。其通过对生物体系中的小分子化合物进行定性定量分析,来研究生物体系的代谢途径并揭示上述内源性小分子化合物与毒性、疾病、生命活动规律等的相互关系。本文对代谢组学的概况做了简要介绍,综述了其在疾病诊断、药物毒物、植物学、环境科学、法医学、中医学、食品安全等领域的应用,并对代谢组学的发展予以展望。

关键词：代谢组学应用

来源： cnki会议评论

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