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兔眼组织的二维凝胶电泳分析

眼科新进展 2004年第5期24卷 337-340页

作者：马璇刘炜彭蔚张艳莉黎明涛吴开力中山大学中山眼科中心广东广州510060 中山大学中山医学院蛋白质组实验室广州510080

目的　应用二维凝胶电泳对不同兔眼组织的蛋白进行初步分析 ,探索开展眼蛋白质组学的方法。方法　分离正常兔眼的不同组织 ,经样本初处理后 ,进行二维凝胶电泳和凝胶银染色 ,然后分析电泳图谱 ,比较各组织蛋白的分离效果。结果　成功建... 详细信息

目的　应用二维凝胶电泳对不同兔眼组织的蛋白进行初步分析 ,探索开展眼蛋白质组学的方法。方法　分离正常兔眼的不同组织 ,经样本初处理后 ,进行二维凝胶电泳和凝胶银染色 ,然后分析电泳图谱 ,比较各组织蛋白的分离效果。结果　成功建立对各眼组织进行样本处理、二维凝胶电泳的基本方法和条件。得到兔结膜、角膜内皮、虹膜、晶状体前囊膜、视网膜的二维凝胶电泳图谱 ,各组织蛋白在小胶上均能显示 4 0 0个以上的斑点。晶状体中央和周边上皮细胞的凝胶图谱呈现出数十个斑点的差异。结论　二维凝胶电泳是分析眼部组织蛋白质的一种好方法 ,不同眼部组织的蛋白在组成、含量、分布等方面的差异可通过二维凝胶电泳图谱清晰显示出来。

关键词：二维凝胶电泳兔眼组织

Nestin和GFAP在缺氧大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达及高氧治疗的作用

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中国病理生理杂志 2009年第6期25卷 1214-1216,1243页

作者：薛黎萍丁鹏吴开力江春光胡竹林张书林林荣安云南省第二人民医院眼科云南昆明650031 中山大学中山眼科中心广东广州510060 昆明医学院第一附属医院神经外科云南昆明650021 新加坡国立大学解剖学系新加坡117597

目的:探讨巢蛋白(nestin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在缺氧大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达情况及高氧治疗对其表达的影响。方法:制作大鼠缺氧模型及缺氧后高氧治疗模型,行眼球矢状位切片及视网膜铺片,行GS/nestin、GS/GFAP、GFAP/nesti... 详细信息

目的:探讨巢蛋白(nestin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在缺氧大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达情况及高氧治疗对其表达的影响。方法:制作大鼠缺氧模型及缺氧后高氧治疗模型,行眼球矢状位切片及视网膜铺片,行GS/nestin、GS/GFAP、GFAP/nestin免疫荧光双标染色。结果:正常大鼠视网膜中几乎看不到nestin阳性染色,GFAP阳性染色仅位于星形胶质细胞上。缺氧后,在Müller细胞和星形胶质细胞上出现了nestin的表达,GFAP的表达没有明显变化。高氧治疗后,nestin在Müller细胞上的表达明显减弱,但在星形胶质细胞上仍有较强的表达。GFAP仍然只在星形胶质细胞上表达。结论:Müller细胞和星形胶质细胞针对缺氧损伤和高氧处理发生不同的细胞骨架蛋白重塑,这与它们和视网膜神经节细胞以及视网膜血管在解剖和功能关系上的差异有关。

关键词：巢蛋白缺氧高压氧 Müller细胞星形细胞

不同极性石斛生物碱的提取分离及对人晶状体上皮细胞增殖的影响

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广州中医药大学学报 2010年第4期27卷 362-366,437页

作者：魏小勇马伟凤方花吴开力王松高欣欣广州中医药大学广东广州510006 中山大学眼科中心广东广州510060

【目的】观察不同极性石斛生物碱对人晶状体上皮细胞(HLEC)的保护作用。【方法】石斛粉末经乙醇提取、降膜浓缩、酸化、盐析、萃取后,水洗、回收提取分离不同极性生物碱。HLEC用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液培养,石斛生物碱的保... 详细信息

【目的】观察不同极性石斛生物碱对人晶状体上皮细胞(HLEC)的保护作用。【方法】石斛粉末经乙醇提取、降膜浓缩、酸化、盐析、萃取后,水洗、回收提取分离不同极性生物碱。HLEC用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液培养,石斛生物碱的保护作用实验分为10组:正常对照组,模型组,水溶性生物碱、脂溶性生物碱、低极性生物碱、弱极性生物碱高、低剂量组,剂量均分别为25.0、12.5μg/L;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同极性生物碱对HLEC增殖的影响。【结果】通过单因素实验,获得了影响不同极性石斛生物碱提取率的关键因素,均为体积分数80%乙醇提取3次,提取3 h时提取率最高;模型组HLEC增殖被H2O2明显抑制,低剂量脂溶性生物碱组细胞抑制率显著降低,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.05)。【结论】较低剂量的脂溶性生物碱能更好地抑制H2O2对晶状体上皮细胞的氧化损伤。

关键词：石斛/分离与提纯石斛/药理学晶状体上皮细胞/病理学细胞培养

P450 2D6基因多态性与噻吗心安作用个体差异的相关性研究

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P450 2D6基因多态性与噻吗心安作用个体差异的相关性研究

华南地区某眼科医院的感染性角膜炎病原菌谱特征

中华医学会第十二届全国眼科学术大会

作者：杨扬帆余敏斌吴开力黄圣松中山大学中山眼科中心

目的：探讨原发性开角型青光眼(POAG)一线治疗药物噻吗心安(Timolol)的主要代谢酶 P450 2D6基因(CYP2D6) 单核苷酸多态性(SNP)与 Timolol 治疗个体差异的相关性, 寻找影响 Timolol降眼压效果和严重药物不良反应的代谢酶

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中华眼视光学与视觉科学杂志 2019年第2期21卷 92-96页

作者：段芳廖靖愉唐水敏林丽萍刘秀平吴开力中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室广州510060

目的:探讨华南地区某眼科医院感染性角膜炎的病原菌谱及其特点。方法:回顾性系列病例研究。选择2013年7月1日至2017年12月31日在中山大学中山眼科中心进行角膜取材和微生物检测的角膜感染患者3914例。表面麻醉后刮取病灶边缘的病灶组织... 详细信息

目的:探讨华南地区某眼科医院感染性角膜炎的病原菌谱及其特点。方法:回顾性系列病例研究。选择2013年7月1日至2017年12月31日在中山大学中山眼科中心进行角膜取材和微生物检测的角膜感染患者3914例。表面麻醉后刮取病灶边缘的病灶组织,进行细菌、真菌培养及鉴定。培养结果阳性的细菌采用生化比色或质谱进行种属鉴定;真菌依据形态学进行种属鉴定。各季节菌谱阳性率差异比较采用卡方检验。结果:感染性角膜炎患者中,男2468例(63.1%),女1446例(36.9%),年龄(49.5±16.8)岁。病原菌培养阳性的患者共1673例(42.7%),其中单纯细菌749例(44.8%),单纯真菌849例(50.7%),混合感染75例(4.5%)。最常见的细菌是葡萄球菌属(20.1%),其次是假单胞菌属(7.5%);最常见的真菌是镰刀菌属(25.5%),其次是曲霉菌属(10.3%)。细菌的阳性率在5-8月明显高于1-2月和9-12月(P<0.05),真菌的阳性率在5-6月明显低于1-2月和9-12月(P<0.05)。结论:在华南地区一所三甲眼科医院的感染性角膜炎中,真菌感染略高于细菌感染,且细菌和真菌感染存在季节性差异。

关键词：感染性角膜炎细菌真菌季节

石斛提取的丁香酸对氧化条件下人类晶状体上皮细胞增殖的影响

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环球中医药 2010年第3期3卷 187-189,197页

作者：魏小勇马伟凤方花吴开力高欣欣广州中医药大学基础医学院 510006 广州中医药大学护理学院中山大学眼科中心

目的探讨石斛提取的单体丁香酸对氧化条件下人类晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)的形态及生长的影响。方法取对数生长期的HLEC,分为正常对照组(HLEC+DMEM)、阳性对照组(正常对照组+500μmol/L H2O2)、丁香酸高剂量组(... 详细信息

目的探讨石斛提取的单体丁香酸对氧化条件下人类晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)的形态及生长的影响。方法取对数生长期的HLEC,分为正常对照组(HLEC+DMEM)、阳性对照组(正常对照组+500μmol/L H2O2)、丁香酸高剂量组(阳性对照组+0.4 g/L丁香酸)、丁香酸中剂量组(阳性对照组+0.2 g/L丁香酸)、丁香酸低剂量组(阳性对照组+0.1 g/L丁香酸),在倒置显微镜下观察HLEC的形态变化,MMT法检测丁香酸对HLEC增值的影响。结果在H2O2的培养条件下,HLEC的死亡率增加,生长受到抑制,而用丁香酸干预的条件下的HLEC则保持了上皮形态,死亡率降低。阳性对照组HLEC的增殖被H2O2抑制,抑制率为52.99%,与其他各组比较差异有显著性,P<0.05;中剂量的丁香酸存活率达到79.97%,与高、低剂量的丁香酸比较差异有显著性,P<0.05。结论丁香酸对氧化损伤的HLEC具有一定的保护作用。

关键词：石斛丁香酸人类晶状体上皮细胞

胶质纤维酸性蛋白在青光眼大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达

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国际眼科杂志 2008年第4期8卷 721-725页

作者：薛黎萍丁鹏吴开力江春光胡竹林肖丽波刘海孙鹏胡世兴中山大学中山眼科中心国家重点实验室中国广东省广州市510060 云南省第二人民医院(昆明医学院第四附属医院)眼科中国云南省昆明市650021 昆明医学院第一附属医院眼科中国云南省昆明市650032

目的:探讨胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在青光眼大鼠视网膜Müler细胞上的诱导表达情况及可能的意义。方法:采用烧灼涡静脉的方法制作大鼠青光眼模型,分别于术后2h;1,3d;1,2,3wk取材,制作视网膜矢状位冰冻切片和视网膜铺片,进行GS/GFAP免疫... 详细信息

目的:探讨胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在青光眼大鼠视网膜Müler细胞上的诱导表达情况及可能的意义。方法:采用烧灼涡静脉的方法制作大鼠青光眼模型,分别于术后2h;1,3d;1,2,3wk取材,制作视网膜矢状位冰冻切片和视网膜铺片,进行GS/GFAP免疫荧光双标。提取视网膜总蛋白行GFAP免疫印迹半定量分析。结果:视网膜矢状位切片可见,正常大鼠视网膜中,GFAP阳性染色只出现在神经节细胞层的星形胶质细胞上,而Müller细胞不表达GFAP。制作青光眼模型术后2h,Müller细胞上出现GFAP阳性染色,术后1,3d,GFAP的表达显著增加,到术后1wk,GFAP在Müller细胞上的表达量达到高峰,一直持续到术后3wk,免疫印迹半定量分析与以上结果吻合。术后1wk视网膜铺片中清晰可见Müller细胞足板出现GFAP的诱导表达。结论:高眼压时GFAP在Müller细胞上的诱导表达尤其在足板处的强烈表达是Müller细胞对眼压升高产生的一种反应,GFAP可能是一种潜在的有用的生物标记物。

关键词：青光眼 Müller细胞 GFAP

Nestin在视神经横断大鼠视网膜Müller细胞上的诱导表达

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国际眼科杂志 2009年第3期9卷 433-436页

作者：薛黎萍丁鹏吴开力江春光胡竹林肖丽波刘海 Eng-Ang Ling 云南省第二人民医院眼科中国云南省昆明市650031 中山大学中山眼科中心国家重点实验室中国广东省广州市510060 昆明医学院第一附属医院神经外科中国云南省昆明市650021 新加坡国立大学解剖学系 117597

目的:探讨中间丝蛋白nestin在视神经横断大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达情况及可能的意义。方法:制作大鼠视神经横断模型,分别于术后1,3,7d取材,制作视网膜矢状位冰冻切片,进行GS/nestin,免疫荧光双标。提取视网膜总RNA行nestin Real-t... 详细信息

目的:探讨中间丝蛋白nestin在视神经横断大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达情况及可能的意义。方法:制作大鼠视神经横断模型,分别于术后1,3,7d取材,制作视网膜矢状位冰冻切片,进行GS/nestin,免疫荧光双标。提取视网膜总RNA行nestin Real-time PCR半定量分析。结果:正常大鼠视网膜中几乎看不到nestin阳性染色。术后1d,在Müller细胞上出现nestin的诱导表达,术后3d,nestin在Müller细胞上的表达进一步增强,术后1wk,nes-tin在Müller细胞上的表达保持在较高水平,Real-time PCR半定量分析与以上结果吻合。结论:视神经横断后nestin在Müller细胞上的诱导表达是Müller细胞对视网膜损伤产生的一种反应,Nestin的表达量在一定时间内与病程进展相一致。Nestin在Müller细胞上的诱导表达尤其在足板处的强烈表达可能对视网膜神经节细胞具有保护作用。

关键词：视神经横断 Müller细胞 nestin

用蛋白质芯片技术筛选视网膜母细胞瘤患者血清中标志蛋白

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眼科学报 2007年第3期23卷 136-142页

作者：杨玉霞肖雪媛吴开力王矩菱周立军杨华胜李永平何大澄张平中山大学中山眼科中心中山大学眼科学国家重点实验室广州510060 北京师范大学生命科学院细胞生物研究所高等学校蛋白质组学研究院北京100875

目的:探讨用表面增强基质辅助激光解析离子化-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)筛选视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma,Rb)血清标志蛋白,为Rb筛查、早期诊断及鉴别诊断寻找新的方法。方法:采用IMAC30和CM102种蛋白芯片对18例Rb患者和17名年龄匹... 详细信息

目的:探讨用表面增强基质辅助激光解析离子化-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)筛选视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma,Rb)血清标志蛋白,为Rb筛查、早期诊断及鉴别诊断寻找新的方法。方法:采用IMAC30和CM102种蛋白芯片对18例Rb患者和17名年龄匹配的正常小儿血清进行了蛋白质谱检测。统计分析采用Ciphergenproteinchip3.0.2软件,2组间蛋白峰强度的比较采用t检验,率的比较采用Fisher精确概率法。结果:IMAC30蛋白芯片结果显示:与正常幼儿相比,视网膜母细胞瘤患者血清中有26个差异表达的蛋白峰,其中高表达有21个,质/荷比(m/z)分别为:7746、7014、11713、3049、7084、7299、5888、2544、12575、5489、9658、9575、9929、10161、8955、1886、10617、6209、2411、7374和6614;低表达有5个,分别为:8382、7923、7972、8590和66576,统计学检验P值均小于0.001。其中以7014m/z峰进行两组统计学分析时,敏感性和特异性分别为94.4%和82.4%。与正常小儿相比,经CM10蛋白芯片分析显示:视网膜母细胞瘤患者血清中有4个差异表达的蛋白峰,其中高表达有3个,分别为:质/荷比(m/z)分别为5888、6097和7798;低表达蛋白峰为8590m/z。统计学检验P值均小于0.01。当选择7798m/z差异峰进行统计学分析时,敏感性和特异性分别是83.3%和70.6%。结论:视网膜母细胞瘤患者血清中存在较多标志蛋白,SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术有望成为Rb筛查、早期诊断及鉴别诊断的新的有效工具。

关键词：视网膜母细胞瘤 SELDI蛋白质芯片技术差异蛋白