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IL-12锚定修饰exosome的肾癌疫苗的制备及鉴定

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免疫学杂志 2010年第4期26卷 344-348页

作者：张尧吴小侯陈刚罗春丽张家摸重庆医科大学附属第一医院泌尿外科 400016 重庆医科大学检验教研室 400016

目的制备IL-12锚定修饰exosomes(EXOs)的肾癌疫苗及其蛋白组成和功能鉴定。方法将糖基化磷脂酰肌醇(Glycosylphosphatidylinositol,GPI)信号肽序列与白介素12基因融合构建真核双表达质粒pBIG。激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测融合蛋白... 详细信息

目的制备IL-12锚定修饰exosomes(EXOs)的肾癌疫苗及其蛋白组成和功能鉴定。方法将糖基化磷脂酰肌醇(Glycosylphosphatidylinositol,GPI)信号肽序列与白介素12基因融合构建真核双表达质粒pBIG。激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测融合蛋白(CPI-IL-12)在肾癌细胞的表达。用超滤和蔗糖重水密度梯度离心法制备EXOs,透射电镜鉴定其形态,Westernblot鉴定其标志性分子热休克蛋白70(HSP70)和细胞间粘附分子(ICAM-1)及肾癌特异性抗原G250和GPI-IL-12的表达。ELISA测定EXOs负载IL-12的量,IFN-γ释放试验检测IL-12修饰的EXOs(EXO/IL-12)的功能。结果真核双表达质粒pBIG构建成功,酶切鉴定及测序正确。稳定转染后,GPI-IL-12在肾癌细胞膜高表达。分离纯化的EXOs为类圆碟形、双层膜结构,直径30～80 nm,表达HSP70、ICAM-1、G250和GPI-IL-12。ELISA测定10μg/ml的EXOs含约(80±9.6)pg/ml的IL-12,并能显著诱导T淋巴细胞产生IFN-γ。结论pBIG质粒稳定转染肾癌细胞能制备EXO/IL-12疫苗。该疫苗表达GPI-IL-12,负载肾癌特异性抗原G250,能在体外显著诱导T淋巴细胞分泌IFN-γ,可望成为治疗肾癌的新疫苗。

关键词：肾细胞癌 Exosomes 白细胞介素12 肿瘤疫苗

多层螺旋CT与肾上腺静脉取血对原发性醛固酮增多症患者定位诊断价值的比较

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中华泌尿外科杂志 2019年第5期40卷 385-388页

作者：陈宸何云锋张尧吴小侯蒲军重庆医科大学附属第一医院泌尿外科重庆400016

目的比较多层螺旋CT(MSCT)与肾上腺静脉取血(AVS)对原发性醛固酮增多症(PHA)患者的定位诊断价值,探讨MSCT和AVS在PHA定位诊断中的合理应用策略。方法回顾性分析2014年6月至2018年6月收治的78例PHA患者的病例资料,男27例,女51例。年龄(4... 详细信息

目的比较多层螺旋CT(MSCT)与肾上腺静脉取血(AVS)对原发性醛固酮增多症(PHA)患者的定位诊断价值,探讨MSCT和AVS在PHA定位诊断中的合理应用策略。方法回顾性分析2014年6月至2018年6月收治的78例PHA患者的病例资料,男27例,女51例。年龄(47.5±11.2)岁。收缩压(190±24)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),舒张压(111±16)mmHg。高血压病程(6.0±6.0)年。血钾(2.4±0.6)mmol/L;血浆醛固酮浓度(PAC)(415.7±235.4)pg/ml,血浆肾素活性(PRA)(3.2±5.7)ng/(ml·h),血浆醛固酮/肾素活性比值(ARR)409.0±434.9。所有患者均接受MSCT检查和AVS检查,以术后病理结果及临床最终结局为金标准,比较MSCT与AVS对PHA的定位诊断准确率,分析肾上腺病变大小及性质对MSCT定位诊断准确率的影响。结果 AVS对PHA的定位诊断准确率高于MSCT [100.0%(78/78)与71.8%(56/78),P2 cm时,其定位诊断准确率分别为50.0%(4/8),81.0%(17/21),92.9%(26/28),100.0%(9/9),差异有统计学意义(P0.05)。结论 AVS是PHA定位诊断的金标准。当MSCT提示肾上腺未见明显异常、单侧肢体增厚、单侧较小(≤2 cm)肿瘤、双侧肾上腺病变时均应同时行AVS,并将AVS结果作为最终判定优势分泌侧的依据。当MSCT提示肾上腺孤立性较大(>2 cm)肿瘤时,MSCT定位诊断的准确性极高,可不进行AVS。

关键词：原发性醛固酮增多症多层螺旋CT 肾上腺静脉取血定位诊断

KAI1蛋白促进786-O细胞黏附及侵袭作用的研究

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中国现代医学杂志 2014年第26期24卷 22-26页

作者：鲁伟陈峰付云锐吴小侯游刚谢鑫重庆市南川区人民医院泌尿外科重庆408400 重庆医科大学附属第一医院泌尿外科重庆400011

目的观察KAI1蛋白对肾透明细胞癌786-O细胞黏附及侵袭的影响,初步研究KAI1对786-O细胞黏附、侵袭作用机制。方法逆转录PCR、蛋白免疫印迹、免疫细胞化学鉴定pCMV-KAI1细胞KAI1表达情况;细胞黏附实验及迁移实验检测细胞黏附及迁移能力;... 详细信息

目的观察KAI1蛋白对肾透明细胞癌786-O细胞黏附及侵袭的影响,初步研究KAI1对786-O细胞黏附、侵袭作用机制。方法逆转录PCR、蛋白免疫印迹、免疫细胞化学鉴定pCMV-KAI1细胞KAI1表达情况;细胞黏附实验及迁移实验检测细胞黏附及迁移能力;蛋白免疫印迹检测细胞黏附因子CD44及肿瘤细胞迁移抑制因子MRP-1/CD9的表达。结果与空白对照和阴性对照组相比,pCMV-KAI1细胞中KAI1的mRNA转录水平显著升高(P<0.01);pCMV-KAI1细胞的黏附能力及侵袭能力都显著低于其他两组(P<0.01);免疫细胞化学结果证实KAI1阳性染色细胞数目接近100%,且显著地高于其他两组;蛋白免疫印迹实验结果证实,pCMV-KAI1细胞中CD44的表达显著降低,而MRP-1/CD9的表达显著升高。结论 KAI1通过抑制黏附因子CD44的表达降低了细胞的黏附性,通过促发肿瘤转移抑制因子MRP-1/CD9表达的升高而降低其侵袭性。

关键词： KAI1 786-O细胞黏附侵袭

输尿管镜钬激光碎石术治疗盆腔异位肾合并结石3例

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第三军医大学学报 2011年第18期33卷 1903-1903,1911页

作者：陈刚吴小侯唐伟尹志康何云峰重庆医科大学附属第一医院泌尿外科重庆400016

1临床资料病例1,男性,26岁,因下腹痛半月就诊。入院体检：双肾区无明显叩痛。尿常规：8～12个/HP。B超：左肾区未见确切肾脏图像,盆腔1肿块,考虑异位肾可能。CT：左侧异位肾伴轻度积液,左肾盂结石可能。

关键词：肾结石盆腔异位肾输尿管镜

前列腺癌根治术后病理分期、Gleason评分与术前血清PSA的相关性分析

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第三军医大学学报 2012年第1期34卷 78-80页

作者：吕志勇吴志辉吴小侯重庆医科大学附属第一医院泌尿外科重庆400016 宁夏医科大学附属医院泌尿外科银川750004 香港中文大学附属威尔斯亲王医院泌尿外科香港999077

目的探讨前列腺癌患者根治术后病理分期、Gleason评分与术前血清PSA的相关性。方法收集香港中文大学附属威尔斯亲王医院泌尿外科2008年1月至2010年9月采用4-臂daVinci S-HD机器人外科手术系统施行前列腺根治性切除术的100例前列腺癌患... 详细信息

目的探讨前列腺癌患者根治术后病理分期、Gleason评分与术前血清PSA的相关性。方法收集香港中文大学附属威尔斯亲王医院泌尿外科2008年1月至2010年9月采用4-臂daVinci S-HD机器人外科手术系统施行前列腺根治性切除术的100例前列腺癌患者的临床资料数据,采用Spearman等级相关分析探讨根治术后病理分期、Gleason评分与术前血清PSA的相关性。结果患者PSA值与Gleason评分呈正相关(r=0.382,P0.05)。结论前列腺癌患者术前血清PSA与根治术后Gleason评分有关,与病理分期无明确的相关性。

关键词：前列腺癌前列腺特异性抗原 Gleason评分病理分期

膀胱肿瘤组织中端粒酶催化亚基和c-myc的表达

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中华实验外科杂志 2003年第12期20卷 1073-1074页

作者：邹琳罗春丽吴小侯梁鲁南韩永华重庆医科大学检验系实验诊断教研室 400016 重庆医科大学附属第一医院泌尿外科

目的研究膀胱肿瘤组织中端粒酶催化亚基(hTERT)和c-myc间的表达及关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对27例膀胱肿瘤组织、16例癌旁组织和16例正常膀胱粘膜同时测定hTERT和c-myc表达,分析两指标在3种组织的表达差异和相关... 详细信息

目的研究膀胱肿瘤组织中端粒酶催化亚基(hTERT)和c-myc间的表达及关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对27例膀胱肿瘤组织、16例癌旁组织和16例正常膀胱粘膜同时测定hTERT和c-myc表达,分析两指标在3种组织的表达差异和相关性。结果 TCC组织hTERT和c-myc的表达阳性率分别为100.0％(27/27)和66.7％(18/27);癌旁组织两指标的阳性率均为 37.5％,而正常膀胱粘膜分别为 0和 25.0％;hTERT和c-myc两指标在膀胱肿瘤组织中的阳性表达有相关性(P<0.01)。结论 hTERT较c-myc作为TCC的诊断指标更灵敏和特异;两指标在TCC中的阳性表达具有相关性。

关键词：膀胱肿瘤肿瘤组织端粒酶催化亚基 c-myc 基因表达癌旁组织

PLCε基因shRNA重组腺病毒表达质粒的构建及鉴定

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中国生物制品学杂志 2013年第1期26卷 51-55页

作者：张彦懿欧俐苹刘琪陶佳吴小侯罗春丽重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院泌尿外科重庆400016

目的构建携带绿色荧光蛋白(GFP)标签的表达PLCε基因shRNA的重组腺病毒质粒Ad-U6-PLCε,为应用基因沉默技术研究膀胱癌的基因治疗奠定基础。方法将干扰质粒pGenesil-PLCε及阴性对照质粒pGenesil-NP的表达启动子U6及shRNA序列克隆至带... 详细信息

目的构建携带绿色荧光蛋白(GFP)标签的表达PLCε基因shRNA的重组腺病毒质粒Ad-U6-PLCε,为应用基因沉默技术研究膀胱癌的基因治疗奠定基础。方法将干扰质粒pGenesil-PLCε及阴性对照质粒pGenesil-NP的表达启动子U6及shRNA序列克隆至带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的穿梭质粒pAdTrack,经酶切及测序鉴定正确后,将重组穿梭质粒经PmeI线性化,转化感受态AdEasier。重组pAdEasy-U6-PLCε质粒经PacI线性化后,转染HEK-293细胞,包装重组腺病毒Ad-U6-PLCε,经大量扩增后测定病毒滴度,RT-PCR及Western blot检测T24细胞内PLCε的表达情况。结果酶切及测序鉴定证实pAdTrack-U6-PLCε及重组pAdEasy-U6-PLCε质粒构建正确,并成功转染至HEK-293细胞,重组腺病毒Ad-U6-PLCε滴度达1.5×1012,经重组腺病毒感染的T24细胞内PLCεmRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论已成功构建针对PLCε基因的shRNA重组腺病毒载体Ad-U6-PLCε,为应用基因沉默技术研究PLCε对膀胱癌发生发展的作用奠定了基础。

关键词： PLCε基因 RNA干扰腺病毒膀胱癌

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TRAIL在器官移植中的研究与应用

重庆医学 2007年第2期36卷 179-181页

作者：李俊吴小侯重庆医科大学附属第一医院泌尿外科 400016

1 TRAIL及其受体1995年Wiley等从人外周血淋巴细胞和人心脏的cDNA文库中利用与TNF同源的表达序列标签（EST）筛选出一段1769bp的序列，因其编码的蛋白可以与受体结合诱导凋亡．所以命名为TNF相关的凋亡诱导配体（TNF related apoptosis ... 详细信息

1 TRAIL及其受体1995年Wiley等从人外周血淋巴细胞和人心脏的cDNA文库中利用与TNF同源的表达序列标签（EST）筛选出一段1769bp的序列，因其编码的蛋白可以与受体结合诱导凋亡．所以命名为TNF相关的凋亡诱导配体（TNF related apoptosis inducing ligand，TRAIL）。1996年Pitti等应用同样的方法从人胎盘组织的cDNA文库中筛选到一个1042bp的序列，因其编码的氨基酸序列，以及功能与Apo-1L有很大的相似性，因此，将其称为Apo-2L。

关键词： TRAIL 器官移植凋亡

凋亡相关基因Survivin在膀胱移行细胞癌组织中表达的研究

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重庆医学 2004年第7期33卷 1018-1019页

作者：易正金吴小侯重庆医科大学附属第一医院泌尿外科 400016

目的　研究凋亡制基因Survivin在膀胱移行细胞癌组织中的表达与肿瘤分级 ,分期和预后的关系。方法　应用免疫组织化学法 ,检测 4 5例膀胱移行细胞癌和 1 0例膀胱黏膜组织中Survivin蛋白表达。结果　 4 5例膀胱移行细胞癌Survivin蛋白阳... 详细信息

目的　研究凋亡制基因Survivin在膀胱移行细胞癌组织中的表达与肿瘤分级 ,分期和预后的关系。方法　应用免疫组织化学法 ,检测 4 5例膀胱移行细胞癌和 1 0例膀胱黏膜组织中Survivin蛋白表达。结果　 4 5例膀胱移行细胞癌Survivin蛋白阳性表达率为 71 .1 % ,而正常膀胱黏膜中Survivin表达均为阴性 ;按病理分级阳性表达率为Ⅰ级 5 2 .6 % ,Ⅱ级 75 % ,Ⅲ级 90 % ,按病理分期为T1 期 5 5 .6 % ,T2 ～T4期 81 .6 % ;获得随访的 1 2例Survivin蛋白阳性表达肿瘤 7例复发 (5 8.3% ) ,表达阴性 1 1例复发 3例 (2 7.3% ) ;Survivin蛋白表达与膀胱癌分级、分期和临床复发有关。结论　Survivin在膀胱移行细胞癌异常表达 ,其异常表达与膀胱移行细胞癌生物学行为有关。

关键词：膀胱肿瘤免疫组织化学 Survivin