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人心肌肌钙蛋白I(cTnI)基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化

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中国新药杂志 2004年第6期13卷 515-517页

作者：劳兴珍吴国球沈子龙中国药科大学生物技术中心南京210009 东南大学附属中大医院检验科南京210009

目的:研究人cTnI基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化。方法:以pCOMb3-cTnI为模板,用PCR方法得到了编码该蛋白的基因,进一步将该基因克隆到中间载体pUCm-T,再酶切得到cTnI基因插入到pKL载体中,构建成表达质粒pKL-cTnI。在BL21细胞中经IPT... 详细信息

目的:研究人cTnI基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化。方法:以pCOMb3-cTnI为模板,用PCR方法得到了编码该蛋白的基因,进一步将该基因克隆到中间载体pUCm-T,再酶切得到cTnI基因插入到pKL载体中,构建成表达质粒pKL-cTnI。在BL21细胞中经IPTG诱导表达,利用载体携带6×His纯化标签,以HisTrap Kit纯化重组蛋白,并进行免疫活性测定。结果:融合蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并用HisTrap Kit成功纯化目的蛋白。ELISA分析证实该重组蛋白具有与天然心肌肌钙蛋白相似的免疫活性。结论:本研究为建立急性心肌梗死早期诊断试剂奠定了基础。

关键词：人心肌肌钙蛋白Ⅰ 原核表达融合蛋白亲和层析急性心肌梗死

p[5HRE]AFPp-p53/PEI-Fe_3O_4磁性纳米颗粒联合磁流体热疗对肝癌细胞的抑制作用

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中国肿瘤生物治疗杂志 2016年第1期23卷 44-51页

作者：赵成桂袁晨燕吴国球东南大学附属中大医院检验中心江苏南京210009

目的:建立p[5HRE]AFPp-p53/PEI-Fe_3O_4磁性纳米颗粒靶向基因治疗和磁流体热疗系统用于肝癌的联合治疗,以提高治疗的安全性和有效性。方法:亚克隆基因重组法构建靶向肝癌的治疗基因p[5HRE]AFPp-p53,并用限制性内切酶凝胶电泳法检测重组... 详细信息

目的:建立p[5HRE]AFPp-p53/PEI-Fe_3O_4磁性纳米颗粒靶向基因治疗和磁流体热疗系统用于肝癌的联合治疗,以提高治疗的安全性和有效性。方法:亚克隆基因重组法构建靶向肝癌的治疗基因p[5HRE]AFPp-p53,并用限制性内切酶凝胶电泳法检测重组质粒是否构建成功;用共沉淀法制备磁性纳米颗粒PEI-Fe_3O_4,利用透射电镜、粒径仪、傅里叶转换红外光谱仪等对PEI-Fe_3O_4进行表征检测。MTT法检测PEI-Fe_3O_4转染p[HRE]AFPp-p53至不同细胞系后的细胞增殖及磁流体热疗和基因治疗联合作用对肝癌细胞Hep G2的增值抑制作用。结果:成功制备载有靶向治疗基因的p[5HRE]AFPp-p53/PEI-Fe_3O_4磁性纳米颗粒,由其介导的基因治疗组与阴性及纳米颗粒对照组相比,明显抑制肝癌Hep G2(AFP阳性)细胞[(0.592±0.041)vs(1.052±0.031)、(1.012±0.021),P0.05)。基因治疗和磁流体热疗联合组与单独使用热疗组及基因治疗组相比显著增加Hep G2细胞的增殖抑制率(76.11%vs 35.22%、42.92%,均P<0.01)。结论:p[5HRE]AFPp-p53/PEI-Fe_3O_4磁性纳米颗粒对肝癌细胞具有特异性杀伤作用,并且能与磁流体热疗产生协同效应,是一种选择性高、治疗效果好的肿瘤治疗方法。

关键词：肝癌 HepG2细胞 SMMC7721细胞靶向基因治疗磁性纳米颗粒磁流体热疗联合治疗

癌胚抗原、糖类抗原CA19-9在肠癌中应用价值探讨

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南京医科大学学报（自然科学版） 2005年第7期25卷 508-509页

作者：董桂冠吴国球翟卫中东南大学附属中大医院临床检验中心江苏南京210009

目的:探讨癌胚抗原(CEA)、糖类抗原CA19鄄9在肠癌中应用价值。方法:化学发光技术对65例肠癌患者进行术前、术后跟踪检测。结果:CEA、CA19鄄9能反映病情的发展、手术的效果。结论:CEA、CA19鄄9与病情发展密切相关,可作肠癌手术随诊指标。

关键词：肠癌癌胚抗原(CEA) 糖类抗原CA19—9

十二肽库中与结缔组织生长因子特异结合噬菌体的筛选

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中国药科大学学报 2007年第1期38卷 87-91页

作者：吴国球王明虹张臣刘乃丰东南大学附属中大医院临床检验中心南京210009 东南大学临床医学院心血管研究所南京210009

目的:从随机十二肽库中筛选与结缔组织生长因子(CTGF)特异结合的噬菌体克隆。方法:用基因重组方法制备硫氧化还原蛋白(TrxA)以及硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白;噬菌体肽库经TrxA预吸附后,与TrxA-CTGF结合,逐步增... 详细信息

目的:从随机十二肽库中筛选与结缔组织生长因子(CTGF)特异结合的噬菌体克隆。方法:用基因重组方法制备硫氧化还原蛋白(TrxA)以及硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白;噬菌体肽库经TrxA预吸附后,与TrxA-CTGF结合,逐步增加选择压力,经过4轮亲和筛选后随机挑取10个克隆,提取单链DNA后测序;用直接和间接ELISA方法检测噬菌体阳性克隆与CTGF结合的特异性。结果:10个克隆中8个DNA序列完全一致(810A),另有2个有不同序列(810B,810C);3个阳性克隆用直接和间接ELISA试验证实能与CTGF发生特异性结合,与TrxA及阴性对照比较差异显著(P<0.05)。结论:成功获得与CTGF特异结合的噬菌体克隆,为CTGF小分子抑制剂的研究打下基础。

关键词：结缔组织生长因子噬菌体展示生物淘选抑制剂

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维生素D3结合蛋白对人单核细胞的激活作用

上海免疫学杂志 2000年第1期20卷 52-53页

作者：吴国球高茂馗何岳文南京铁道医学院附属医院检验科南京210009

本文通过溶血磷脂处理外周血淋巴细胞 (粘附细胞和非粘附细胞 )后加入维生素D3结合蛋白DBP ,37℃、 5 %CO2 孵育 3h ,其上清液超氧阴离子产物浓度明显增高 (P 0 5 )。提示溶血磷脂激活巨噬细胞 ,是通过DBP的作用而实现的。单独用溶血... 详细信息

本文通过溶血磷脂处理外周血淋巴细胞 (粘附细胞和非粘附细胞 )后加入维生素D3结合蛋白DBP ,37℃、 5 %CO2 孵育 3h ,其上清液超氧阴离子产物浓度明显增高 (P 0 5 )。提示溶血磷脂激活巨噬细胞 ,是通过DBP的作用而实现的。单独用溶血磷脂不能激活巨噬细胞 ,因此DBP可能是巨噬细胞激活因子前体。

关键词：溶血磷脂维生素D3 结合蛋白巨噬细胞

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阳离子抗菌肽的研究进展

药物生物技术 2014年第1期21卷 67-70页

作者：武朋朋杨欢沈子龙吴国球奚涛中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009 东南大学附属中大医院检验科江苏南京210009

抗菌肽(Antimicrobial peptides)是来自生物体内经诱导产生的一类具有抗菌活性的多肽类物质,大多数为阳离子抗菌肽。与传统的抗生素相比,阳离子抗菌肽具有抗菌谱广、毒副作用较低、热稳定性好、抗菌机理独特等优点。结合当今阳离子抗菌... 详细信息

抗菌肽(Antimicrobial peptides)是来自生物体内经诱导产生的一类具有抗菌活性的多肽类物质,大多数为阳离子抗菌肽。与传统的抗生素相比,阳离子抗菌肽具有抗菌谱广、毒副作用较低、热稳定性好、抗菌机理独特等优点。结合当今阳离子抗菌肽的研究现状及其进展,从理化性质、结构特征、生物活性及其设计合成等方面对阳离子抗菌肽进行了综述。

关键词：阳离子抗菌肽结构特征来源分类生物活性设计合成

促黄体生成素基因免疫对前列腺增生模型鼠生殖内分泌的影响

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中国药科大学学报 2002年第5期33卷 424-427页

作者：汪兴生沈琪孙迎基廖建民吴国球沈子龙中国药科大学生物技术中心南京210009

目的探讨LH基因免疫对前列腺增生模型鼠生殖内分泌的影响。方法RT-PCR法从雌性大鼠垂体细胞中RNA扩增大鼠的促黄体素基因（LH）cDNA片段约（461bp）并克隆至T载体,获得重组质粒T-LH,限制酶酶切,酶连接,构建PCDNA3.1（-）/HbsAg/LH,经... 详细信息

目的探讨LH基因免疫对前列腺增生模型鼠生殖内分泌的影响。方法RT-PCR法从雌性大鼠垂体细胞中RNA扩增大鼠的促黄体素基因（LH）cDNA片段约（461bp）并克隆至T载体,获得重组质粒T-LH,限制酶酶切,酶连接,构建PCDNA3.1（-）/HbsAg/LH,经脂质体转染纯化的重组质粒至COS细胞中。通过肌肉注射构建的 PCDNA3.1（-）/HbsAg/LH与前列腺增生大鼠,2个月内给药两次。结果体外培养 COS细胞,发现HBsAg与LH连接物表达较好,肌肉注射前列腺增生模型鼠重组质粒后,模型鼠LH与T的含量明显低于对照组。结论PCDNA3.1（-）/HbsAg/LH可参与前列腺增生模型鼠生殖内分泌腺的调节。

关键词：基因免疫生殖内分泌促黄体生成素克隆 COS细胞前列腺增生动物模型 RT-PCR

抗菌肽Thanatin突变体(S-thanatin)对临床耐药革兰阴性菌的体外活性及与7种抗生素的协同作用

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药物生物技术 2009年第2期16卷 158-161页

作者：丁佳萱吴国球赵锐李林鲜沈子龙奚涛中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009 东南大学医学院附属医院江苏南京210009 中国药科大学药学院江苏南京210009

该研究旨在评价抗菌肽S-thanatin对革兰阴性临床耐药菌大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性以及和7种抗生素的协同作用。采用肉汤微量稀释法考察S-thanatin对革兰阴性临床耐药菌抗菌活性以及杀菌作用时间,并用方格滴定法进行协同作... 详细信息

该研究旨在评价抗菌肽S-thanatin对革兰阴性临床耐药菌大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性以及和7种抗生素的协同作用。采用肉汤微量稀释法考察S-thanatin对革兰阴性临床耐药菌抗菌活性以及杀菌作用时间,并用方格滴定法进行协同作用测试。结果所有菌株在S-thanatin浓度为2～16mg/L时都得到抑制,在1h时,绝大部分细菌被杀死。S-thanatin与头孢吡圬联合使用抗肺炎克雷伯菌时有协同作用。研究表明S-thanatin对革兰阴性临床耐药菌有良好的体外抗菌活性,是潜在的抗多药耐药菌药物。

关键词：抗菌肽S-thanatin 协同作用多药耐药活性

肿瘤病人血清N-乙酰氨基半乳糖苷酶检测的意义

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临床检验杂志 1999年第6期17卷 347-348页

作者：张粉梅吴国球高茂馗钱娟英王喜洪南京铁道医学院附院检验科南京210009

参考Ｙａｍａｍｏｔｏ的Ｎ－乙酰－α－Ｄ－氨基半乳糖苷酶（ＮＡＧａｌ）检测方法，检测了肿瘤病人在手术前后血清ＮＡＧａｌ的水平，并与正常人对照。结果发现术前增高，与正常人比较：Ｐ＜０．００５有显著性差异；手术后：... 详细信息

参考Ｙａｍａｍｏｔｏ的Ｎ－乙酰－α－Ｄ－氨基半乳糖苷酶（ＮＡＧａｌ）检测方法，检测了肿瘤病人在手术前后血清ＮＡＧａｌ的水平，并与正常人对照。结果发现术前增高，与正常人比较：Ｐ＜０．００５有显著性差异；手术后：０．０５＜Ｐ＜０．１，酶水平呈下降趋势。而诊断肾小管损伤的Ｎ－乙酰氨基葡萄糖苷酶（ＮＡＧｌｕ）水平无显著差异（Ｐ＞０．５）。因此ＮＡＧａｌ是肿瘤病人放疗、化疗、手术治疗效果以及预后判断的一个指标。

关键词：肿瘤血清诊断 NAGaL