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郑州地区RhD变异型献血者分子生物学分析

中国输血杂志 2024年第8期37卷 866-871页

作者：杨贺才曾群娟马晓莉吕永磊耿明璐王丽萍河南省红十字血液中心河南郑州450000 达州市中心医院

目的研究郑州地区RhD变异型献血者血清学特征及基因突变机制。方法选择2023年1月—2023年12月送至本实验室的1619名RhD阴性献血者为研究对象,应用试管法和微柱凝胶间接抗球蛋白试验方法进行RhD阴性确认试验及RhCE表型检测。采用RHD基因... 详细信息

目的研究郑州地区RhD变异型献血者血清学特征及基因突变机制。方法选择2023年1月—2023年12月送至本实验室的1619名RhD阴性献血者为研究对象,应用试管法和微柱凝胶间接抗球蛋白试验方法进行RhD阴性确认试验及RhCE表型检测。采用RHD基因扩增和Sanger测序检测RhD变异型标本基因型。结果RhD阴性确认试验共检出RhD变异型69例,比例为4.26%(69/1619)。RhCE表型分别为ccEe、Ccee、CcEe、CCee。包含17种基因型,15种D变异型表型。RHD^(*)weak partial 15等位基因最多(33例),频率为47.83%(33/69),主要表型为ccEe;其次是RHD^(*)DVI.3等位基因20例,频率为28.99%(20/69),主要表型为Ccee。RHD^(*)weak partial 15/RHD^(*)01EL.01杂合子3例,频率为4.35%(3/69),皆为CcEe表型。其他罕见基因型共13例,频率为18.84%(13/69)。抗筛阳性3例,比例为4.35%(3/69)。女性献血者2名,皆有孕产史,经抗体鉴定为抗-D;男性献血者1名,为抗-M。结论郑州地区RhD变异型献血者中RHD^(*)weak partial 15基因型最常见,其次为RHD^(*)DVI.3基因型。对保障安全供血,指导临床精准输血具有重要作用。

关键词： Rh血型 RhD变异型基因型分子生物学郑州

郑州地区HBsAg-HBV DNA+献血者的乙肝血清学特征分析

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医药论坛杂志 2024年第13期45卷 1409-1413页

作者：王艺芳魏旖辉赵磊陈明军魏跃光吕永磊河南省红十字血液中心郑州450012

目的了解郑州地区HBsAg无反应性HBV DNA反应性(HBsAg-HBV DNA+)献血者乙肝血清学标志物特征。方法2017年9月—2019年12月本研究采用2个不同厂家ELISA检测试剂同时进行HBsAg、抗-HCV和抗-HIV1/2(ELISA双反应性的标本除外)ELISA检测后的... 详细信息

目的了解郑州地区HBsAg无反应性HBV DNA反应性(HBsAg-HBV DNA+)献血者乙肝血清学标志物特征。方法2017年9月—2019年12月本研究采用2个不同厂家ELISA检测试剂同时进行HBsAg、抗-HCV和抗-HIV1/2(ELISA双反应性的标本除外)ELISA检测后的血液标本,进行核酸检测(nucleic acid testing,NAT),并收集HBsAg-HBV DNA+标本采用化学发光法检测进行乙肝血清学补充试验。结果经ELISA检测后有562666例进行了核酸检测,其中351例为HBV DNA反应性,经核酸检测后HBV残余风险降低至6.24/万。351例HBsAg-HBV DNA+标本经化学发光法检测发现,其中5例标本为HBsAg阳性;346例标本为HBsAg-HBV DNA+,其中有30例(8.67%)可能为“窗口期”感染,316例(91.33%)可能为“隐匿性”HBV感染(occult hepatitis B virus infection,OBI);乙肝血清学模式以单独HBcAb阳性(33.33%),HBsAb、HBcAb共阳性(20.51%)及HBeAb、HBcAb共阳性(17.09%)三种模式为主;60.40%HBsAb定量值100 IU/L。HBsAb阳性组的HBV DNA复检反应性率37.41%明显低于HBsAb阴性组59.43%(χ^(2)=16.292,P26岁年龄段HBcAb阳性人群、HBsAb阴性人群都可能存在较高的输血传播HBV的风险。核酸检测的应用能有效降低经输血传播HBV的残余风险,提高血液的安全性。

关键词：核酸检测窗口期隐匿性HBV感染血液安全

抗-M致胎儿新生儿溶血病实验室检测及预防策略分析

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中国输血杂志 2024年第6期37卷 648-653页

作者：杨贺才马晓莉吕永磊田冬冬曾群娟耿明璐曹轶王丽萍河南省红十字血液中心河南郑州450000 郑州大学附属儿童医院达州市中心医院

目的分析血清学检测结果在抗-M致胎儿新生儿溶血病(HDFN)诊断和治疗中的应用,探讨HDFN预防策略。方法对2017年1月—2023年12月本实验室确诊的12例抗-M引起的HDFN血清学检测结果进行回顾性分析,包括母亲和患儿的血型鉴定,血清总胆红素、... 详细信息

目的分析血清学检测结果在抗-M致胎儿新生儿溶血病(HDFN)诊断和治疗中的应用,探讨HDFN预防策略。方法对2017年1月—2023年12月本实验室确诊的12例抗-M引起的HDFN血清学检测结果进行回顾性分析,包括母亲和患儿的血型鉴定,血清总胆红素、血红蛋白、抗体效价检测,新生儿溶血3项实验。收集患儿和母亲的临床资料,包括妊娠史、输血史、产前抗体检测、宫内输血史、分娩孕周,并随访患儿预后。结果12例抗-M引起的HDFN中,患儿母亲均为RhD+NN表型,患儿均为RhD+MN表型,母子MN血型均不相容。在ABO血型系统中,母子ABO血型不相容占41.7%(5/12)。患儿母亲皆无输血史,在4℃检测效价中位数32,37℃效价中位数4。3例患儿母亲有多次宫内输血史,发生率为25%(3/12)。1例为首胎妊娠异常,占比8.3%(1/12),7例为异常妊娠流产,不良孕产史发生率58.3%(7/12)。6例患儿母亲早产,占比50%(6/12)。3例患儿母亲定期产检,并鉴定抗体特异性,占比25%(3/12)。12例患儿游离抗体在4℃检测效价中位数6,37℃效价中位数2。2例患儿抗-M在37℃检测无反应,阴性率16.7%(2/12)。患儿直抗阳性率8.3%(1/12),放散阳性率16.7%(2/12)。血红蛋白最低值中位数75 g/L,12例患儿均接受了输血治疗。总胆红素峰值中位数157.5μmol/L,均未达到换血阈值。患儿迟发性贫血率16.7%(2/12),患儿出生后死亡率8.3%(1/12),11例患儿预后无生长和神经发育迟缓情况。结论抗-M能引起严重的HDFN,也可发生于第1胎,抗体效价强度与疾病的严重程度不相关,容易引起迟发性贫血,应根据抗-M血清学特征和临床症状定期监测,及时干预治疗。

关键词：抗-M 胎儿新生儿溶血病(HDFN) 预防策略

西藏高寒植物长鞭红景天（Rhodiola fastigiata）AFLP标记的遗传多样性研究

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西藏高寒植物长鞭红景天（Rhodiola fastigiata）AFLP标记的遗传...

作者：吕永磊西藏大学

学位级别：硕士

长鞭红景天( Rhodiola fastigiata),是一种珍稀的中药材,属于被子植物门(Angiospermae)景天科(Crassulaceae)红景天属(Rhodiola L.)多年生草本,药用有效成份红景天苷和苷元酪醇。因长鞭红景天(Rhodiola fastigiata)生长与分布环境的差异... 详细信息

长鞭红景天( Rhodiola fastigiata),是一种珍稀的中药材,属于被子植物门(Angiospermae)景天科(Crassulaceae)红景天属(Rhodiola L.)多年生草本,药用有效成份红景天苷和苷元酪醇。因长鞭红景天(Rhodiola fastigiata)生长与分布环境的差异,同一居群与不同居群之间在遗传多样性上呈现一定变化,这些变化和差异是长鞭红景天(Rhodiola fastigiata)不同居群对特定生态环境及其变化的长期适应和进化的结果。本文以西藏色季拉山的高寒植物长鞭红景天(Rhodiola fastigiata)为材料,选取分布在海拔4300～4700M范围内的长鞭红景天(Rhodiola fastigiata)的3个居群为研究对象,采用AFLP分子标记技术,对长鞭红景天(Rhodiola fastigiata)3个居群的30个个体进行种内遗传多样性分析,并依据扩增条带所得数据进行聚类分析,同时对这30个个体的遗传指标进行相关分析,为更有效地保护和利用这种珍稀药用植物提供理论依据。主要研究结果如下:1.高质量基因组DNA抽提方法的改进:通过改良的CTAB法,成功抽提红景天属植物的基因组DNA,经琼脂糖凝胶电泳检测,所提DNA电泳后呈整齐清晰的一条带,点样孔附近无滞留物质,且没有降解拖尾现象,另经紫外分光光度计检测,OD260/OD280值均在1.8左右。另本研究中建立的提取高质量基因组DNA方法已成功地应用于其他高寒植物(大花黄牡丹、垫状雪灵芝等)。2.引物对获取及多态性带:以形态学差异较大的2份红景天属植物(Rhodiola fastigiata,Rhodiola yunnanensis)为试验材料,从64对引物中,筛选出4对多态性较高的AFLP引物组合(E-ACA:M-CAC;E-ACA:M-CAT;E-ACA:M-CAG;E-ACT:M-CTA;)。这4对引物对西藏色季拉山的高寒植物长鞭红景天的30份供试样品进行了AFLP分析,扩增得到510条清晰的谱带,其中多态带345条。3.简易银染方法的建立:a固定液(100ml乙醇+5～10ml冰醋酸+900ml去离子水)(12分钟);b银染液(1.5～2ml甲醛+1.5～2g硝酸银+1000ml去离子水)(10～14分钟);c1000ml去离子水水洗15秒;d显影液(2～3ml甲醛+15～25gNaOH+1000ml去离子水)(直到出现清晰条带);e用上述1液体固定2～3分钟;f用1000ml去离子水洗脱2～3分钟后,室温下放置胶板。***分析体系的建立:基因组DNA模板300ng,20ul酶切与连接体系,酶切与连接一步完成(37℃,5h;8℃,4h;4℃,过夜);25ul的预扩增体系,酶切与连接处理后的模板DNA 2ul,Taq酶0.5ul,Pre-ampmix 1ul,10 PCR buffer 2.5ul,灭菌双蒸水18.5ul;25ul选择性扩增体系,预扩增稀释样品2ul,10 PCR buffer 2.5ul,dNTPs 0.5ul,EcoRⅠ引物2ul,MseⅠ引物2ul,Taq酶0.5ul,灭菌双蒸水17.5ul;5.遗传多样性分析指标:在物种水平上,具有高的遗传多样性。物种水平多态百分率(PPL)为96.61%,Shannon s信息指数I=0.4893,Nei基因多样性指数H=0.3329;居群水平上,平均多态性百分率(PPL)为64.97%,Nei基因多样性指数H=0.2404,有效等位基因数Ne=1.4252,Shannon s信息指数I=0.3545;高寒植物长鞭红景天居群间的遗传分化Gst为0.2779,说明27.79%的遗传变异存在于居群之间,而71.21%的遗传变异存在于居群内,长鞭红景天的居群间的基因流Nm为1.2995。6.试验结果表明,AFLP分子标记技术可以用于高寒植物长鞭红景天(Rhodiola fastigiata)遗传多样性的研究。

关键词：长鞭红景天遗传多样性 AFLP分析聚类分析 CTAB法银染

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附子多糖的含量测定

药物分析杂志 2011年第5期31卷 835-838页

作者：吕永磊王丹李向日李飞北京中医药大学中药学院北京100102

目的:建立附子多糖含量测定方法。方法:以生附子精制多糖测得附子多糖对葡萄糖的换算因子,以苯酚-硫酸分光光度法测定生附子多糖的含量。结果:供试液在6 h内显色稳定,重现性好,平均回收率为101.0%,RSD=4.3%(n=6)。生附子多糖含量为18.56... 详细信息

目的:建立附子多糖含量测定方法。方法:以生附子精制多糖测得附子多糖对葡萄糖的换算因子,以苯酚-硫酸分光光度法测定生附子多糖的含量。结果:供试液在6 h内显色稳定,重现性好,平均回收率为101.0%,RSD=4.3%(n=6)。生附子多糖含量为18.56%,RSD=2.4%(n=3)。结论:该方法简便、快速,测定结果更客观、准确。

关键词：附子多糖含量测定精制

西藏地区典型泥炭地土壤理化性质及其碳、氮、磷化学计量学特征

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湿地科学 2017年第4期15卷 526-531页

作者：吕永磊梁文业张仲胜西藏自治区林业调查规划研究院西藏拉萨850000 中国科学院湿地生态与环境重点实验室中国科学院东北地理与农业生态研究所吉林长春130102

以西藏地区10个典型泥炭地作为研究区,于2015年7月23~29日,采集土壤样品,测定其土壤理化性质,结合20世纪地矿部开展的泥炭资源调查报告关于西藏地区的调查结果,分析土壤碳、氮、磷的化学计量学特征。研究结果表明,西藏地区大多数泥炭地... 详细信息

以西藏地区10个典型泥炭地作为研究区,于2015年7月23~29日,采集土壤样品,测定其土壤理化性质,结合20世纪地矿部开展的泥炭资源调查报告关于西藏地区的调查结果,分析土壤碳、氮、磷的化学计量学特征。研究结果表明,西藏地区大多数泥炭地的造碳植物为小薹草(Carex parva)、具芒薹草(Carex aristulifera)和华扁穗草(Blysmus sinocompressus),泥炭地主要发育在湖盆、河漫滩、河道和扇缘洼地等。泥炭地土壤的平均灰分、有机质含量、腐殖酸含量、全氮含量、全磷含量和全钾含量分别为39.06%、58.99%、33.63%、1.55%、0.17%和0.81%。泥炭地土壤的平均碳氮比、碳磷比和氮磷比分别为36.2、363.0和9.7。相关分析结果表明,土壤中碳、氮、磷含量两两之间不相关,说明该地区泥炭地土壤中不存在稳定的C︰N︰P比例;年平均气温和年降水量与西藏泥炭地土壤中有机碳含量、全磷含量、碳氮比、碳磷比和氮磷比都不相关。

关键词：泥炭地土壤 C︰N︰P 西藏

郑州地区无偿献血者MSM人群HIV感染情况分析

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中国输血杂志 2015年第12期28卷 1490-1492页

作者：吕永磊焦修凤河南省红十字血液中心河南郑州450012

目的输血是HIV传播的主要途径之一,了解郑州地区无偿献血人群HIV感染情况,减少HIV检测"窗口期",为有效制定无偿献血招募和阻断HIV的经输血传播提供科学数据。方法 2010-2014年本中心无偿献血者905 984血液标本ELISA检测2遍,2012年5月后E... 详细信息

目的输血是HIV传播的主要途径之一,了解郑州地区无偿献血人群HIV感染情况,减少HIV检测"窗口期",为有效制定无偿献血招募和阻断HIV的经输血传播提供科学数据。方法 2010-2014年本中心无偿献血者905 984血液标本ELISA检测2遍,2012年5月后ELISA无反应性或单侧有反应性标本进行PCR检测,ELISA双阳性标本送本市疾病预防控制中心利用蛋白印迹法进行结果确认,对HIV阳性献血者进行统计分析和流行病学分析。结果 2010-2014年共计确认HIV阳性112例,阳性率为12.36/10万,HIV感染率处于平缓期,MSM途径与其他途径差异显著,且逐年显著升高,并且呈现年轻化、高学历,有在大学生中蔓延的趋势。结论应加强无偿献血及HIV相关知识的宣传教育,加大无偿献血前的健康征询范围,规避具有高危行为者特别是MSM人群为免费体检、化验等目的而献血行为,构建HIV疫情共享网络,通过多种措施来减少病毒检测"窗口期"的发生,确保血液安全,保障受血者健康幸福。

关键词：无偿献血 MSM人群 HIV感染

荧光定量PCR法筛查混合血浆中的HBV及HCV的可行性

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 382-383页

作者：刘玉振邢培清方建华温涛吕永磊河南省红十字血液中心河南郑州450012

输血所致病毒感染一直受到国内外输血界的关注。因病毒感染初期“窗口期”（从病毒感染到血清标志物检出的时间）的存在，采用现开展的ELISA检测可造成不合格血液的漏检。目前使用各种试剂的“窗口期”如下：HIV1/2抗体22d，HCV抗体70 d... 详细信息

输血所致病毒感染一直受到国内外输血界的关注。因病毒感染初期“窗口期”（从病毒感染到血清标志物检出的时间）的存在，采用现开展的ELISA检测可造成不合格血液的漏检。目前使用各种试剂的“窗口期”如下：HIV1/2抗体22d，HCV抗体70 d，HBsAg约56 d，其中HCV抗体的“窗口期”已大于70 d。通过ELISA法对抗-HCV抗体进行筛查，仍有输血后HCV的感染，这是目前多数输血相关传染病多为丙型肝炎的主要原因。

关键词：荧光定量PCR HBV—DNA HCV—RNA

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乌头母根、子根、须根多糖的比较

中国中药杂志 2011年第9期36卷 1154-1157页

作者：吕永磊卜海博杨蕾李向日李飞北京中医药大学中药学院北京100102

目的:研究乌头母根、子根、须根的多糖含量及单糖组成。方法:分别以精制多糖测得多糖对葡萄糖的换算因子,以苯酚-硫酸分光光度法测定乌头母根、子根、须根的多糖含量;以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生高效液相色谱法测定多糖中... 详细信息

目的:研究乌头母根、子根、须根的多糖含量及单糖组成。方法:分别以精制多糖测得多糖对葡萄糖的换算因子,以苯酚-硫酸分光光度法测定乌头母根、子根、须根的多糖含量;以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生高效液相色谱法测定多糖中的单糖组成。结果:乌头母根、子根、须根的多糖含量分别为22.0%,33.5%,6.1%;母根、子根、须根的多糖中主要含有葡萄糖,另外含有少量的半乳糖醛酸、半乳糖、阿拉伯糖,子根中还含有甘露糖,须根中还含有甘露糖、鼠李糖、木糖。结论:多糖含量检测方法简便、快速,测定结果更客观、准确;须根中多糖含量最低,且单糖组成与母根、子根有明显不同。

关键词：乌头精制多糖含量测定单糖组成