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UePep1对菰黑粉菌致病力的调控作用

农业生物技术学报 2024年第7期32卷 1614-1625页

作者：黄琳钰汤近天夏文强崔海峰叶子弘张雅芬中国计量大学生命科学学院/浙江省生物计量与检验检疫技术重点实验室

菰黑粉菌(Ustilago esculenta)专性侵染菰(Zizania latifolia)后可诱导形成膨大肉质茎—茭白，且菰黑粉菌的致病力与茭白的表型、产量等密切相关。穿透过程必需蛋白1 (protein essential during penetration 1, Pep1)作为真菌效应因子... 详细信息

菰黑粉菌(Ustilago esculenta)专性侵染菰(Zizania latifolia)后可诱导形成膨大肉质茎—茭白，且菰黑粉菌的致病力与茭白的表型、产量等密切相关。穿透过程必需蛋白1 (protein essential during penetration 1, Pep1)作为真菌效应因子，在黑粉菌属(Ustilago)真菌的致病力调控上起着重要作用。本研究先通过BLASTP定位及基因克隆分析，获得了菰黑粉菌中Pep1的同源蛋白编码基因UePep1 (GenBank No. OR088111)，其开放阅读框为528 bp，编码175个氨基酸，无内含子序列。进一步通过PEG介导的原生质体转化方法构建UePep1的敲除突变体，进行体外生长及侵染试验，发现该基因的缺失不影响菰黑粉菌单倍体形态与生长速率，也不影响体外菌丝形成与丝状生长能力，但显著减缓了菰黑粉菌入侵菌丝的增殖，无法诱导寄主形成膨大肉质茎。进一步将UePep1回补至玉米瘤黑粉菌(Ustilago maydis)SG200ΔPep1菌株中，部分恢复了SG200ΔPep1菌株的侵染力，表明UePep1是玉米瘤黑粉菌Pep1的功能性互补蛋白。上述研究明确了UePep1在菰黑粉菌致病力调控中的作用，同时进一步证实了该效应因子在黑粉菌属真菌中功能的保守性，为研究菰黑粉菌与菰互作机制进而解析膨大肉质茎形成机理提供借鉴和理论支持。

关键词：菰黑粉菌穿透过程必需蛋白1(Pep1) 菰致病性

不同茭白品种中菰黑粉菌的鉴定及ISSR多态性分析

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菌物学报 2017年第9期36卷 1210-1221页

作者：康璐瑶崔海峰张雅芬张子杰俞晓平叶子弘中国计量大学生命科学学院浙江省生物计量与检验检疫技术重点实验室浙江杭州310018

菰黑粉菌是茭白的内生真菌,对茭白孕茭具有重要作用。本文分离获得了13个不同茭白品种和孕茭表型的菰黑粉菌菌株(M‐T型和T型),ITS序列鉴定分析发现:13个菌株都属于菰黑粉菌,它们的ITS序列仅在ITS1序列区间存在3个碱基位点的变异;基于I... 详细信息

菰黑粉菌是茭白的内生真菌,对茭白孕茭具有重要作用。本文分离获得了13个不同茭白品种和孕茭表型的菰黑粉菌菌株(M‐T型和T型),ITS序列鉴定分析发现:13个菌株都属于菰黑粉菌,它们的ITS序列仅在ITS1序列区间存在3个碱基位点的变异;基于ISSR技术比较分析了菰黑粉菌菌株间的遗传多态性,聚类分析表明,菰黑粉菌菌株的遗传多态性与茭白栽培特点及孕茭表型密切相关,本研究有助于茭白种质资源的鉴定及保护,并为茭白田间栽培管理提供了技术支持和理论依据。

关键词：茭白菰黑粉菌内转录间隔区序列简单重复序列间扩增分析

《生物统计学》课程“全程评价、综合评定”考试模式的建立

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高教论坛 2011年第1期 30-31,34页

作者：叶子弘崔海峰陈春中国计量学院生命科学学院浙江杭州310018

根据《生物统计学》的课程特点,树立以"能力测试"为中心的考试观念,改革考核方式,关注平时成绩,重视实际操作能力,"全程评价、综合评定"的考试模式。

关键词：考试模式能力全程综合

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菰黑粉菌UePkaC基因的克隆及功能研究

农业生物技术学报 2020年第8期28卷 1477-1489页

作者：王培又张雅芬葛倩雯夏文强崔海峰俞晓平叶子弘中国计量大学生命科学学院/浙江省生物计量与检验检疫技术重点实验室

菰黑粉菌(Ustilago esculenta)是一种二态性真菌,具有侵染菰(Zizania latifolia)植株的能力,并可使植株茎部膨大形成茭白。二型态转换对菰黑粉菌的侵染能力及致病性至关重要。促丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, M... 详细信息

菰黑粉菌(Ustilago esculenta)是一种二态性真菌,具有侵染菰(Zizania latifolia)植株的能力,并可使植株茎部膨大形成茭白。二型态转换对菰黑粉菌的侵染能力及致病性至关重要。促丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号级联途径和环化腺苷酸介导的蛋白激酶A (cyclic adenosine monophosphate-protein kinase A, cAMP-PKA)信号转导途径是真菌二型态转换的核心。本研究发现,外源添加cAMP后单倍体出现多位点芽殖现象,且融合菌丝生长受到影响。进一步克隆得到了编码菰黑粉菌PKA催化亚基的基因UePkaC (PkaC like protein in Ustilago esculenta)基因(GenBank ***870334.1)。序列分析结果显示,该基因全长1 346 bp,有1个内含子,两个外显子构成大小为1 233 bp的开放阅读框,编码410个氨基酸。该氨基酸序列与其他物种中PKA催化亚基的氨基酸序列同源,如大麦坚黑粉菌(U. hordei)、玉米瘤黑粉菌(U. maydis)。表达模式分析发现:UePkaC在菌丝融合生长过程中上调表达;对UePkaC缺失突变体表型分析发现其变长且无融合生长能力和致病性。进一步研究发现,UePkaC突变后无法形成接合管,且信息素合成基因表达受到显著抑制,表明UePkaC基因通过调控a基因的表达从而影响接合管的形成与细胞融合。以上结果表明,UePkaC基因在菰黑粉菌单倍体生长及二型态转换中起着关键作用。该研究为探讨菰黑粉菌的致病机理提供了基础资料。

关键词：菰黑粉菌 UePkaC 融合 a基因 cAMP-PKA信号通路

ISO 9001框架下的实践教学质量控制和管理体系探讨

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教育教学论坛 2013年第38期 148-149页

作者：叶子弘崔海峰付贤树俞晓平中国计量学院生物计量及检验检疫技术重点实验室浙江杭州310018

本文在总结高校实践教学中存在的主要问题及实践教学质量控制和评价的研究现状的基础上,提出在ISO9001标准框架下进行研究实践教学质量控制和管理体系研究。本文论述了国内外高等教学质量管理和研究中引进ISO9000系列标准的情况,从实践... 详细信息

本文在总结高校实践教学中存在的主要问题及实践教学质量控制和评价的研究现状的基础上,提出在ISO9001标准框架下进行研究实践教学质量控制和管理体系研究。本文论述了国内外高等教学质量管理和研究中引进ISO9000系列标准的情况,从实践教学"产品"特性、质量评价标准分析入手,通过质量控制和管理体系的要素设计、方法研究和体系架构等方面探讨了如何构建ISO9001框架下的实践教学质量控制和管理体系。

关键词： ISO9001 实践教学质量评价管理体系

UeRbf1调控菰黑粉菌丝状生长和致病力的作用研究

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植物病理学报 2022年第2期52卷 165-178页

作者：胡映莉卞加慧郭月美彭辉汤近天夏文强叶子弘张雅芬中国计量大学生命科学学院/浙江省生物计量与检验检疫技术重点实验室杭州310018

基于菰黑粉菌的全基因组序列,克隆得到了UeRbf1(GenBank登录号:MW375682),该基因的开放阅读框为1 281 bp,无内含子,编码426个氨基酸,经预测具有3个C_(2)H_(2)锌指结构域,提示其具有转录调控功能。进一步在菰黑粉菌中敲除UeRbf1后进行体... 详细信息

基于菰黑粉菌的全基因组序列,克隆得到了UeRbf1(GenBank登录号:MW375682),该基因的开放阅读框为1 281 bp,无内含子,编码426个氨基酸,经预测具有3个C_(2)H_(2)锌指结构域,提示其具有转录调控功能。进一步在菰黑粉菌中敲除UeRbf1后进行体外生长及侵染试验,发现:在体外培养时,UeRbf1的缺失没有改变菌株的生长速率及单倍体形态,也未改变两个性亲和UeRbf1缺失突变体的融合及菌丝形成能力,但是融合菌丝的丝状生长能力显著减弱,而且在侵染时UeRbf1缺失突变体丧失了菌丝形成及丝状生长能力,人工接种野茭后也无法使其茎部膨大。以上结果表明,UeRbf1是调控菰黑粉菌丝状生长和侵染能力的一个重要因子。另外,UeRbf1缺失突变后,在体外融合及侵染时相关丝状生长和致病力的调控因子Biz1、Clp1、Hdp1和UeKpp6呈下调表达,其中Biz1的下调表达最为显著,在突变体中几乎不表达,说明UeRbf1对菰黑粉菌丝状生长和致病力的影响,可能是通过调控Biz1来实现的。

关键词：菰黑粉菌 UeRbf1 丝状生长致病力

Uegpa3基因在菰黑粉菌二型态转换中的作用

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农业生物技术学报 2020年第5期28卷 892-902页

作者：于金梦张雅芬葛倩雯胡映莉高丽丹夏文强叶子弘中国计量大学生命科学学院/浙江省生物计量与检验检疫技术重点实验室

菰黑粉菌(Ustilago esculenta)可以侵染菰(Zizania latifolia)茎基部,形成可食用的肉质茎—茭白。研究发现,菰黑粉菌是一种二态性真菌,存在酵母型和菌丝型的转换。当信息素基因mfa (mating factor)基因编码的脂肽类信息素与信息素受体(p... 详细信息

菰黑粉菌(Ustilago esculenta)可以侵染菰(Zizania latifolia)茎基部,形成可食用的肉质茎—茭白。研究发现,菰黑粉菌是一种二态性真菌,存在酵母型和菌丝型的转换。当信息素基因mfa (mating factor)基因编码的脂肽类信息素与信息素受体(pheromone receptor, pra)基因编码的信息素受体相互识别后,会激活环化腺苷酸介导的蛋白激酶A (cyclic adenosine monophosphate-protein kinase A, cAMP-PKA)信号转导途径和促丝裂原活化蛋白激酶级联信号(mitogen-activated protein kinase, MAPK)途径,使两个酵母型的性亲和单倍体菌株融合形成菌丝从而产生致病性。本研究基于菰黑粉菌全基因组分析,克隆得到菰黑粉菌中编码G蛋白α亚基的基因(Ustilago esculenta guanine uncleotide-binding protein subunit alpha-3,Uegpa3)(GenBank No. ALS87611.1),该基因的cDNA全长1 065 bp,无内含子,编码354个氨基酸,具有典型的Gα结构域。表达模式分析发现:Uegpa3在接合管形成时期表达上调。通过聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)介导的原生质体转化方法将Uegpa3缺失突变后发现:Uegpa3缺失菌株无法融合形成菌丝。进一步研究发现Uegpa3突变后无法形成接合管,且信息素合成基因表达受到显著抑制。以上结果表明:菰黑粉菌中的Uegpa3可能通过影响信息素信号的传递,继而影响菰黑粉菌接合管的形成,从而影响菰黑粉菌二型态转换。本研究初步探究了菰黑粉菌中编码G蛋白α亚基的基因Uegpa3在二型态转换中的作用,为菰黑粉菌与茭白互作机制的研究提供了基础材料。

关键词：菰黑粉菌二型态转换 Uegpa3 接合管信息素

菰ZlWRKY72转录因子克隆及其在茎部膨大发育中的表达分析

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农业生物技术学报 2018年第6期26卷 920-930页

作者：周美琪李帅叶子弘张雅芬俞晓平赵金兰崔海峰中国计量大学生命科学学院/浙江省生物计量与检验检疫技术重点实验室

菰黑粉菌(Ustilago esculenta)侵染菰(Zizania latifolia)植株后能够诱导其茎部发生形态转变,但其肉质茎膨大发育的调节机制尚不清楚。本研究克隆获得菰WRKY转录因子72(WRKY transcription factor 72,ZlWRKY72)(Gen Bank登录号:MG365889)的全长序列,其基因序列全长为2 831 bp,含有1个内含子。c DNA全长为1 085 bp,ORF编码框为738 bp,编码245个氨基酸,具有1个典型WRKYGQK结构域和1个***2锌指结构,进化树分析结果表明,ZlWRKY72与粳稻(Oryza sativa ***)OsWRKY72同源性最高。通过qRT-PCR技术检测ZlWRKY72基因在其茎部膨大发育中的表达,表明ZlWRKY72在菰植株组织生长旺盛的部位表达量较高,分蘖期叶片表达量显著高于茎部(P<0.05),但孕茭起始后茎部表达量显著高于叶片(P<0.05)。茎部ZlWRKY72表达变化与菰黑粉菌菌丝侵染增殖相关,孕茭起始后正常茭白茎部表达量高于灰茭(P<0.05),并在随后的膨大发育过程中表达量逐渐降低,差异显著(P<0.05)。雄茭茎部表达量高于正常茭白,茭白茎部菰黑粉菌菌丝大量侵染增殖后ZlWRKY72表达下调。本研究初步阐明了ZlWRKY72在菰肉质茎膨大发育中的表达响应,探讨了其在菰黑粉菌侵染诱导的茎部膨大发育中的调节作用,为菰孕茭膨大发育机制研究提供了理论依据。

关键词：菰菰WRKY转录因子72(ZlWRKY72) 茎部发育菰黑粉菌表达模式

肿瘤细胞外泌体的生物学功能及其检测方法研究进展

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计量学报 2023年第6期44卷 992-999页

作者：宋雨蒙翟睿雷喜梅楚占营朱曼曼樊小雪叶子弘戴新华方向中国计量大学生命科学学院浙江省生物计量及检验检疫技术重点实验室浙江杭州310018 中国计量科学研究院前沿计量科学中心国家市场监管质谱技术创新中心北京100029

外泌体是一类细胞分泌的微小囊泡,其中包含蛋白质、脂质和核酸等重要的生物活性物质。外泌体作为细胞间通讯的重要载体,直接参与机体内肿瘤的发生、发展进程,通过影响肿瘤微环境,进而介导肿瘤细胞的生长和迁移。由于外泌体具有特殊的生... 详细信息

外泌体是一类细胞分泌的微小囊泡,其中包含蛋白质、脂质和核酸等重要的生物活性物质。外泌体作为细胞间通讯的重要载体,直接参与机体内肿瘤的发生、发展进程,通过影响肿瘤微环境,进而介导肿瘤细胞的生长和迁移。由于外泌体具有特殊的生理功能,近年来,将其作为重大疾病治疗载体和生物标志物的研究日益增加,针对外泌体的检测方法也得到不断发展。对肿瘤细胞外泌体的生物学功能和检测的近期相关研究进行系统综述,并对检测方法的发展趋势加以展望。

关键词：计量学外泌体肿瘤生物学功能检测方法

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