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菰黑粉菌MAPKK同源基因UeMkk1的全长克隆及表达

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农业生物技术学报 2016年第3期24卷 406-415页

作者：胡鹏张雅芬崔海峰应荣刘俊平叶子弘中国计量学院生命科学学院/浙江省生物计量及检验检疫技术重点实验室

菰黑粉菌(Ustilago esculenta)是菰(Zizania latifolia)植株体内的内生真菌,其二型态转换与茭白孕茭密切相关,而丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)途径在真菌二型态转换中具有重要调控作用。本研究利用酵母型... 详细信息

菰黑粉菌(Ustilago esculenta)是菰(Zizania latifolia)植株体内的内生真菌,其二型态转换与茭白孕茭密切相关,而丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)途径在真菌二型态转换中具有重要调控作用。本研究利用酵母型及菌丝型菰黑粉菌的差异蛋白表达及转录组分析数据,克隆了菰黑粉菌中一个丝裂原活化蛋白激酶激酶(mitogen activated protein kinase kinase,MAPKK)基因Ue Mkk1(Gen Bank登录号:KR870332)。该基因c DNA序列全长2 204 bp,开放阅读框2 043 bp。与模式菌酵母的MAPK途径蛋白进行聚类分析表明,Ue Mkk1属于MAPKK蛋白,NCBI中Blast比对结果及进一步的系统发育分析表明,Ue Mkk1与黑粉菌属真菌的Mkk1同源性较高,其中与大麦坚黑穗病菌(Ustilago hordei)的MKK1一致性达到84%,其丝/苏氨酸双特异性蛋白激酶催化结构域在不同真菌中高度保守。同时,本研究通过大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达系统成功表达并从蛋白裂解上清液中纯化得到了纯度较高的Ue Mkk1蛋白。另外,对不同碳源诱导后菰黑粉菌的生长特征观察及Ue Mkk1的表达分析表明,蔗糖能诱导菰黑粉菌菌丝的形成及生长,Ue Mkk1的表达量在菌丝生长后期下调表达;PDA、葡萄糖及麦芽糖培养基中菰黑粉菌保持酵母型生长,Ue Mkk1呈周期性上调表达。以上研究工作为进一步开展Ue Mkk1基因的功能研究,阐明其在菰黑粉菌二型态转换及茭白孕茭中的作用提供了基础材料。

关键词：菰黑粉菌 Ue Mkk1 丝裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK) 细胞壁完整性

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生物计量专业生物统计学教学改革的思考

高教论坛 2011年第2期 80-82页

作者：陈春叶子弘叶素丹中国计量学院浙江经贸职业技术学院浙江杭州310028

具有统计学思维与掌握统计方法的生物计量人才队伍是保证我国生物计量行业健康快速发展在关键。本文通过多年教学实践,从《生物统计学》教学内容的强化更新、教学方法的继承革新、教学模式的集成创新等方面探讨生物计量专业的生物统计... 详细信息

具有统计学思维与掌握统计方法的生物计量人才队伍是保证我国生物计量行业健康快速发展在关键。本文通过多年教学实践,从《生物统计学》教学内容的强化更新、教学方法的继承革新、教学模式的集成创新等方面探讨生物计量专业的生物统计学课程的教学改革,提出了几点自己的思考。

关键词：生物统计学教学改革生物计量专业

论高校生物学专业“3+1”教学模式的探索与实践

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科技创新导报 2008年第20期5卷 194-194,196页

作者：管峰叶子弘张明洲俞晓平中国计量学院生命科学学院浙江杭州310018

本文分析了中国计量学院生命科学学院构建并实施以"3+1"为核心的教学模式,同时推行"小研究生培养制"、组建兴趣小组以及与校外生产和科研实践基地结合的综合培养方式,这是对生物类专业学生的综合实践能力与个性化创新培养模式一个有益... 详细信息

本文分析了中国计量学院生命科学学院构建并实施以"3+1"为核心的教学模式,同时推行"小研究生培养制"、组建兴趣小组以及与校外生产和科研实践基地结合的综合培养方式,这是对生物类专业学生的综合实践能力与个性化创新培养模式一个有益的探索,在不断完善这一教学模式的同时也为高校生物类人才培养提供了一种参考。

关键词：生物类专业 “3+1”教学模式复合型人才创新人才

水稻淀粉分支酶基因(RBE4)作为转基因水稻基体标准物质的内标准基因的研究

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农业生物技术学报 2012年第11期20卷 1234-1243页

作者：余笑波崔海峰俞晓平隋志伟李亮王晶叶子弘中国计量学院中国计量科学研究院

内标准基因(endogenous reference gene)是指具有物种专一性、不显示等位基因变化、拷贝数恒定的保守DNA序列,对基因定量分析时具有重要意义。本研究选取了5个水稻内标准基因:根部表达的水稻基因(rice root-specific,GOS9)、磷脂酶D基因... 详细信息

内标准基因(endogenous reference gene)是指具有物种专一性、不显示等位基因变化、拷贝数恒定的保守DNA序列,对基因定量分析时具有重要意义。本研究选取了5个水稻内标准基因:根部表达的水稻基因(rice root-specific,GOS9)、磷脂酶D基因(phospholipase D,PLD)、蔗糖磷酸合成酶基因(sucrose phosphate synthase,SPS)、水稻淀粉分支酶基因(rice starch branching enzyme,RBE4)、泛素蛋白基因(ubiquitin5,UBQ5)和2个外源基因:苏云金芽孢杆菌Cry1Ab杀虫晶体蛋白基因Cry1Ab和cry1Ab/cry1Ac融合杀虫晶体蛋白基因(Cry1Ac/Cry1Ab),分别以转基因水稻(Oryza sativa L.)克螟稻2号和TT51-1为模板,比较各自的外源基因(Cry1Ab=KMD2和Cry1Ac/Cry1Ab=TT51-1)与5个内源基因的PCR产物量,筛选出和外源基因PCR产物量最接近的内标准基因为RBE4。在此基础上,数字PCR不依赖于已知浓度的标准曲线来定值,可以避免标准样品的标准曲线和样品目的基因的扩增曲线在扩增效率上的不一致等因素所带来的误差,定值结果更加准确、可靠,采用数字PCR分析外源基因拷贝数与内标准基因RBE4拷贝数的比值,荧光定量PCR方法分析内标准基因RBE4和外源基因的定量检测稳定性、灵敏度等。结果表明,外源基因拷贝数与内标准基因RBE4拷贝数的比值在转基因水稻克螟稻2号和TT51-1上都较接近于1∶1,分别为115.9%和105.3%。RBE4的荧光定量PCR体系重复性、定量检测稳定性和灵敏度好,符合作为转基因水稻基体标准物质定量分析的内标准基因的要求,RBE4定量体系在TT51-1和克螟稻2号的最小检出限(LOD)分别为5～11copies/μL和3～12copies/μL,最小定量限(LOQ)分别为11～22和12～24copies/μL。RBE4是转基因水稻标准物质研制和产品定量检测的适宜内标准基因。研究结果为转基因作物标准物质研制和定量检测的内标准基因选取提供一定的参考。

关键词：转基因水稻内标准基因定量检测基体标准物质

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改进《基因工程》教学效果的探讨

中国科教创新导刊 2007年第23期 51-51,53页

作者：邹克琴叶子弘李素芳中国计量学院生命科学学院浙江杭州310018

基因工程课程是我院的重要专业必修课程之一,结合国内形式和本人多年从事这门课程的教学情况,在基因工程课程的教学方案,教学方式等方面提出一些教学改进设想,旨在提高基因工程课程的教学质量,培养智能型、创新型的高素质人才。

关键词：教学改革基因工程创新型

重大传染病疫情防控用标准物质体系及生物安全技术规范策略研究

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中国测试 2022年第9期48卷 84-88页

作者：陆琳汪斌龚亮马联弟卢晓华叶子弘中国计量科学研究院北京100029 中国计量大学浙江杭州310018

针对重大传染病疫情防控用标准物质存在的研制供应的系统性体系化布局规划不够、标准物质研制生产产业链条还不畅通、生物安全管理还有待进一步完善等问题,通过系统分析目前标准物质体系规划及生物安全管理情况,低技术水平标准物质重复... 详细信息

针对重大传染病疫情防控用标准物质存在的研制供应的系统性体系化布局规划不够、标准物质研制生产产业链条还不畅通、生物安全管理还有待进一步完善等问题,通过系统分析目前标准物质体系规划及生物安全管理情况,低技术水平标准物质重复研制和供应过剩,高端标准物质供给不足,应尽快研究建立标准物质技术资源信息库,规划传染病疫情防控用应急国家标准物质体系,开展标准物质研制(生产)机构生物安全共性技术研究等,为降低标准物质研制生产的生物安全风险,强化应急状态下标准物质研制供应提供保障。

关键词：计量标准物质生物安全疫情防控

菰黑粉菌UeCS3.1基因的克隆及功能研究

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农业生物技术学报 2019年第8期27卷 1467-1477页

作者：吴敏张雅芬夏文强胡鹏陈玥俞晓平叶子弘中国计量大学生命科学学院浙江省生物计量与检验检疫技术重点实验室

菰黑粉菌(Ustilago esculenta)是一种典型的二态性真菌,与菰(Zizania latifolia)互作诱导其茎部膨大,形成可食用的肉质茎—茭白,成为我国传统的水生蔬菜。几丁质(chitin)是真菌细胞壁的重要组成成分,其合成过程涉及7类几丁质合成酶(chit... 详细信息

菰黑粉菌(Ustilago esculenta)是一种典型的二态性真菌,与菰(Zizania latifolia)互作诱导其茎部膨大,形成可食用的肉质茎—茭白,成为我国传统的水生蔬菜。几丁质(chitin)是真菌细胞壁的重要组成成分,其合成过程涉及7类几丁质合成酶(chitin synthase, CS)基因,参与调控真菌的生长发育及致病性。有研究报道,第3类几丁质合成酶对部分丝状真菌的菌丝生长和致病性起着关键作用。本研究基于菰黑粉菌的全基因组序列,克隆得到了菰黑粉菌第3类几丁质合成酶基因(UeCS3.1)(GenBank No. KU302676),该基因序列全长3 054 bp,含有1个内含子。ORF编码框为2 751 bp,编码916个氨基酸。UeCS3.1具有2个催化结构域Chitin-synth-1 (pfam01644)、Chitin-synth-1N (pfam08407)和7个跨膜区,进化树分析表明UeCS3.1与玉米瘤黑粉菌(Ustilago maydis)的Umchs1近源。表达模式分析发现,UeCS3.1在菰黑粉菌芽殖以及菌丝融合生长过程中均上调表达,而且UeCS3.1缺失突变体的菌丝融合生长能力明显减弱。以上结果表明,UeCS3.1基因可能在菌丝融合生长过程中起着关键作用。本研究初步探究了菰黑粉菌第3类几丁质合成酶基因在菌丝融合生长过程中的作用,为菰黑粉菌的致病机理研究提供基础材料。

关键词：菰黑粉菌菰菰黑粉菌第3类几丁质合成酶基因(UeCS3.1) 几丁质合成酶融合

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双季茭白中菰黑粉菌遗传分化研究

植物生理学报 2020年第4期56卷 711-720页

作者：葛鑫涛翁丽青郑春龙夏文强叶子弘杨梦飞张尚法张雅芬中国计量大学浙江省生物计量与检验检疫技术重点实验室杭州310018 余姚市农业科学研究所浙江余姚315400 金华市农业科学研究院浙江金华321017

茭白(Zizania latifolia)是我国第二大水生蔬菜,分为双季茭和单季茭,在其主产区浙江省和江苏省以双季茭为主。茭白按成熟季节分为秋茭和夏茭,秋茭中除了正常茭白外,田间还会产生一种茎部充满大量褐色冬孢子的灰茭,影响茭白的品质和产量... 详细信息

茭白(Zizania latifolia)是我国第二大水生蔬菜,分为双季茭和单季茭,在其主产区浙江省和江苏省以双季茭为主。茭白按成熟季节分为秋茭和夏茭,秋茭中除了正常茭白外,田间还会产生一种茎部充满大量褐色冬孢子的灰茭,影响茭白的品质和产量。已有研究表明,菰黑粉菌(Ustilago esculenta)是引起寄主茎部膨大形成可食用茭白的主要因素。本研究首先通过内转录间隔区序列(ITS)系统发育初步证明灰茭和正常茭中的菰黑粉菌具有较大差异,随后通过7个功能基因片段和ITS联用分析发现个别正常茭(夏茭和秋茭)中的菰黑粉菌也存在一定差异。在此基础上,利用Sc1和Sc48两个单核苷酸多态性(SNP)富集区片段与7个功能基因片段和ITS联合建树。结果表明,不仅正常茭和灰茭中的菰黑粉菌分化明显,而且夏茭和秋茭中的菰黑粉菌也存在遗传分化。以上结果拟为进一步解析夏秋茭的形成和灰茭的分化提供研究思路。

关键词：茭白品种菰黑粉菌系统发育

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加拿大一枝黄花的开花及种子成熟规律研究

杂草科学 2008年第4期26卷 18-21,22页

作者：安欣欣林燕吴丽丽叶子弘中国计量学院生命科学学院浙江杭州310018

通过野外观察,运用挂牌标记、逐日观察、切花比较、种子活力检测等方法,对加拿大一枝黄花自然种群的开花和种子形成规律进行了研究,并比较了切花和自然种群种子的活力水平。结果发现,加拿大一枝黄花具有头状花序组成的圆锥花序,头状花... 详细信息

通过野外观察,运用挂牌标记、逐日观察、切花比较、种子活力检测等方法,对加拿大一枝黄花自然种群的开花和种子形成规律进行了研究,并比较了切花和自然种群种子的活力水平。结果发现,加拿大一枝黄花具有头状花序组成的圆锥花序,头状花序由外围舌状花及中央的管状花构成。种群花期为9月底10月初至11月下旬,历时2个月左右,开花授粉阶段为10月下旬至11月下旬,到12月中旬左右大批种子成熟,各部位种子具有相近的活力。圆锥花序的开花顺序为顶部→中部→下部。主枝和各部位侧枝的圆锥花序开花和种子形成各阶段的持续时间呈现较明显的规律。在开花50%以下时进行切花,其形成的种子活力较小。随着切花时期的提早,种子活力呈现下降趋势。

关键词：加拿大一枝黄花开花种子规律切花活力