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绵羊AMH基因的克隆、序列分析与原核表达

江苏农业学报 2013年第6期29卷 1386-1392页

作者：蒋香菊吴阳升林嘉鹏汪立芹张利古丽米热.阿不都热依木杨楠刘莉黄俊成石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 农业部草食家禽遗传育种与繁殖重点实验室新疆乌鲁木齐830000 新疆农业大学新疆乌鲁木齐830000

旨在克隆绵羊抗苗勒管激素基因(oAMH)的全长编码区序列,并对其序列进行分析。以绵羊的卵泡颗粒细胞全RNA逆转录得到的cDNA为模板,参照牛的AMH cDNA序列设计兼并引物,对oAMH基因的全长编码区进行T载体克隆并测序,并对其进行生物信息学分... 详细信息

旨在克隆绵羊抗苗勒管激素基因(oAMH)的全长编码区序列,并对其序列进行分析。以绵羊的卵泡颗粒细胞全RNA逆转录得到的cDNA为模板,参照牛的AMH cDNA序列设计兼并引物,对oAMH基因的全长编码区进行T载体克隆并测序,并对其进行生物信息学分析。根据预测的编码区氨基末端260氨基酸对应的序列设计表达引物,构建原核表达载体pET15b-oamh260,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。序列分析结果表明,获得的绵羊AMH基因序列全长1 797 bp(GenBank登录号:KC986978),完整开放阅读框为1 728 bp,共编码575个氨基酸,氨基末端24个氨基酸为信号肽序列,羧基末端区域TGFβ家族保守区,全序列与牛AMH的同源性为95.80%。SDS-PAGE结果显示,IPTG诱导表达的融合蛋白大小为30 000,与预期蛋白质大小一致。Western blot检测结果显示,该蛋白质为His融合蛋白。以上结果表明该试验成功克隆了绵羊AMH基因的完整编码区序列,构建了原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

关键词：绵羊 AMH基因序列分析原核表达

德灵Viva-E2000和雅培ARCHITECT-i1000SR测定他克莫司血药浓度结果的对比研究

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北方药学 2014年第7期11卷 8-9页

作者：陈渤松阿不都克依木.扎依提古丽米热.阿不都热依木新疆医科大学第一附属医院乌鲁木齐830054

目的:通过对德灵Viva-E2000临床化学分析仪和雅培ARCHITECT-i1000SR分析仪进行方法比对,探讨不同仪器间他克莫司血药浓度检测结果是否具有可比性。方法:采集40例肾移植或骨髓移植并接受他克莫司治疗的患者新鲜全血样本,分别用德灵Viva-E... 详细信息

目的:通过对德灵Viva-E2000临床化学分析仪和雅培ARCHITECT-i1000SR分析仪进行方法比对,探讨不同仪器间他克莫司血药浓度检测结果是否具有可比性。方法:采集40例肾移植或骨髓移植并接受他克莫司治疗的患者新鲜全血样本,分别用德灵Viva-E2000临床化学分析仪和雅培ARCHITECT-i1000SR分析仪测定他克莫司血药浓度,对两种仪器的测定结果进行统计学分析。结果:两种仪器测定全血他克莫司浓度结果 r=0.9858,具有显著性差异(P<0.05),雅培ARCHITECT-i1000SR测定结果偏低。结论:雅培ARCHITECT-i1000SR作为新的全血他克莫司浓度监测设备,测定结果比德灵Viva-E2000要显著降低,但监测数据更为准确,需要向医师和患者说明。

关键词：德灵Viva—E2000雅培ARCHITECT—i1000SR他克莫司血药浓度

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他克莫司全血样品保存时间和温度考察

中国药师 2012年第1期15卷 132-133页

作者：阿不都克依木·扎依提陈渤松古丽米热·阿不都热依木新疆医科大学第一附属医院药学部乌鲁木齐830054

目的:考察他克莫司全血样品的保存温度和保存时间,为外地患者通过运输样品方便监测他克莫司浓度提供依据。方法:取测定他克莫司血浓度的全血样品10份,测定他克莫司浓度后将样品立即分成2份,一份置于(25±3)℃室温保存,另一份置于4℃冰... 详细信息

目的:考察他克莫司全血样品的保存温度和保存时间,为外地患者通过运输样品方便监测他克莫司浓度提供依据。方法:取测定他克莫司血浓度的全血样品10份,测定他克莫司浓度后将样品立即分成2份,一份置于(25±3)℃室温保存,另一份置于4℃冰箱冷藏,分别在3,5,7 d重复测定他克莫司浓度,使用PEMS软件对室温保存和冰箱冷藏3,5,7 d后测得浓度分别对新鲜样品浓度进行配对t检验,计算配对百分比平均值和RSD。结果:P值分别为0.9295,0.7965,0.7336和0.9193,0.9692,0.8670,配对百分比平均值最大为99.85%,最小为95.02%,RSD均0.05)且在免疫分析方法允许范围内(RSD<5%),样品在4～25℃条件下7 d内运输至有条件实验室监测他克莫司浓度,结果基本可靠。

关键词：他克莫司全血样品保存时间保存温度

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羔羊卵巢AMH的免疫组织化学分析

西北农业学报 2014年第7期23卷 19-24页

作者：蒋香菊吴阳升张利古丽米热.阿不都热依木林嘉鹏汪立芹杨楠唐淑红黄俊成石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 农业部草食家畜遗传育种与繁殖重点实验室乌鲁木齐830000 新疆农业大学乌鲁木齐830052

为探讨AMH在羔羊和成年羊卵巢中时间和空间表达变化,揭示卵泡生长发育调控的机制。收集1月龄羔羊和正常成年羊卵巢,采用HE染色观察卵巢的组织学特征,免疫组化法检测绵羊卵巢AMH蛋白表达分布,RT-PCR技术分析卵巢卵丘细胞中AMH基因的表达... 详细信息

为探讨AMH在羔羊和成年羊卵巢中时间和空间表达变化,揭示卵泡生长发育调控的机制。收集1月龄羔羊和正常成年羊卵巢,采用HE染色观察卵巢的组织学特征,免疫组化法检测绵羊卵巢AMH蛋白表达分布,RT-PCR技术分析卵巢卵丘细胞中AMH基因的表达变化。结果显示,卵巢HE染色后,对外源激素处理有反应的卵巢存在大量的大直径卵泡,且无中等卵泡和小卵泡,也没有黄体化和排卵;对外源激素没有反应的卵巢仅存在原始卵泡和少量的初级卵泡,无有腔卵泡。免疫组化结果显示,AMH存在于生长期的腔前卵泡和小的有腔卵泡,以及卵丘细胞,大多原始卵泡无AMH的表达,而在原始卵泡向初级卵泡转变,外层的颗粒细胞由扁平向柱状转变时AMH有表达,颗粒细胞存在表达AMH和不表达AMH 2种类型。RT-PCR结果显示,羔羊卵丘细胞的表达量高于成年羊。AMH可能参与卵泡发育的启动、向促性腺激素依赖期的转变等过程的调控,其功能作用还有待于深入研究。

关键词： AMH 羔羊卵巢颗粒细胞

104例不同民族肾病综合征患者他克莫司血药浓度的影响因素分析

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中国药房 2019年第15期30卷 2110-2114页

作者：朱丽丽王轶睿韩罡陈渤松袁圆陈国儒古丽米热·阿不都热依木赵军新疆医科大学药学院乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院药学部乌鲁木齐830054 乌鲁木齐市米东区人民医院药剂科乌鲁木齐830000

目的:探究不同民族肾病综合征(NS)患者中他克莫司(TAC)血药浓度的影响因素。方法:采用回顾性研究方法,收集2017年12月-2018年11月在新疆医科大学第一附属医院确诊为NS并符合纳入/排除标准的104例患者的临床信息,包括性别、年龄、民族、... 详细信息

目的:探究不同民族肾病综合征(NS)患者中他克莫司(TAC)血药浓度的影响因素。方法:采用回顾性研究方法,收集2017年12月-2018年11月在新疆医科大学第一附属医院确诊为NS并符合纳入/排除标准的104例患者的临床信息,包括性别、年龄、民族、身高、体质量、实验室相关检测、合并用药及TAC给药剂量等,通过SPSS 22.0软件分析TAC血药浓度的影响因素,以及合用五酯胶囊对TAC稳态血药谷浓度(c^ssmin)和剂量的影响。结果:104例患者,共计394例次TAC血药浓度监测。以TAC标准化血药浓度为终点指标,汉族患者显著低于维吾尔族和哈萨克族患者(P=0.003);合用五酯胶囊患者高于不合用患者(P=0.056);合用钙离子拮抗药患者显著高于不合用患者(P=0.01),合用质子泵抑制剂患者显著低于不合用患者(P=0.01);红细胞比容正常患者显著低于异常患者(P=0.001),尿素氮正常患者显著低于异常患者(P不合用患者(P=0.001),二者TAC的c^ssmin无明显差异(P=0.29)。结论:对于NS患者,在使用TAC时应考虑民族、钙离子拮抗药、质子泵抑制剂、红细胞比容、尿素氮及五酯胶囊对TAC血药浓度的影响。

关键词：肾病综合征他克莫司民族血药浓度影响因素

绵羊基质Gla蛋白基因克隆、表达谱及其在卵巢组织的定位

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江苏农业学报 2024年第7期40卷 1276-1284页

作者：张欣如古丽米热·阿不都热依木陈莹马秀玲林嘉鹏汪立芹黄俊成吴阳升农业农村部草食家畜遗传育种与繁殖重点实验室/新疆动物生物技术重点实验室/新疆畜牧科学院生物技术研究所新疆乌鲁木齐830011 新疆农业大学动物科学学院新疆乌鲁木齐830052

本研究旨在克隆绵羊基质Gla蛋白(MGP)基因的蛋白质编码序列(CDS),制备特异抗体,并检测该基因在绵羊卵巢组织中的表达分布。以卵泡总cDNA为模板,扩增获得绵羊MGP基因CDS区全长序列;合成绵羊MGP蛋白C末端15个氨基酸长度的多肽,免疫小鼠,... 详细信息

本研究旨在克隆绵羊基质Gla蛋白(MGP)基因的蛋白质编码序列(CDS),制备特异抗体,并检测该基因在绵羊卵巢组织中的表达分布。以卵泡总cDNA为模板,扩增获得绵羊MGP基因CDS区全长序列;合成绵羊MGP蛋白C末端15个氨基酸长度的多肽,免疫小鼠,制备抗血清;利用实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫印迹技术分析其在不同组织和不同大小的卵泡中的表达水平;通过免疫组织化学方法分析其在卵巢组织中的表达分布特征。结果表明,成功获得绵羊MGP基因的CDS区全长片段(467 bp),编码103个氨基酸,理论相对分子量为12230.96,等电点为9.27;N末端19个氨基酸序列被预测为信号肽序列,成熟肽有84个氨基酸,为外泌性蛋白质,无胞内区;MGP总蛋白质氨基酸序列与山羊、牛的同源蛋白质相似性分别为100.0%、99.0%,与人、小鼠的相似性均为85.4%。MGP mRNA和蛋白质在绵羊心、肝、脾、肺、肾等组织中的相对表达量较低,在卵巢、输卵管、子宫等生殖系统或组织中的相对表达量较高,在黄体中的相对表达量也较高;MGP在卵巢组织颗粒细胞、卵丘细胞中均有表达,但在闭锁卵泡中不表达。本研究结果可为进一步研究MGP在卵巢组织中的生物学功能提供参考。

关键词：基质Gla蛋白绵羊卵巢颗粒细胞黄体

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新疆中亚沙棘浆果化学成分的分离纯化

新疆医科大学学报 2010年第4期33卷 386-387页

作者：刘园园胡兰付文婷古丽米热.阿不都热依木热娜.卡斯木新疆医科大学药学院天药/生药教研室新疆乌鲁木齐830011

目的研究新疆中亚沙棘浆果的化学成分。方法采用硅胶柱层析、大孔树脂柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析进行分离纯化,通过理化性质和NMR数据鉴定化合物的结构。结果得到7个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇(Ⅰ)、齐墩果酸(Ⅱ)、熊果酸(Ⅲ)... 详细信息

目的研究新疆中亚沙棘浆果的化学成分。方法采用硅胶柱层析、大孔树脂柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析进行分离纯化,通过理化性质和NMR数据鉴定化合物的结构。结果得到7个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇(Ⅰ)、齐墩果酸(Ⅱ)、熊果酸(Ⅲ)、胡萝卜苷(Ⅳ)、原儿茶酸(Ⅴ)、奎宁酸(Ⅵ)、芦丁(Ⅶ)。结论其中原儿茶酸、奎宁酸为首次从中亚沙棘中分离得到。

关键词：中亚沙棘化学成分结构鉴定

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新疆中亚沙棘化学成分的分离和纯化

新疆医科大学学报 2009年第5期32卷 570-571,574页

作者：付文婷胡兰古丽米热.阿不都热依木热娜.卡斯木新疆医科大学药学院天药/生药教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学附属中医医院药学部新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院药剂科药研室新疆乌鲁木齐830011

目的:初步研究新疆中亚沙棘果实的化学成分。方法:采用溶剂法进行提取,通过柱层析和重结晶等方法分离化学成分,并结合波谱学方法和化学法鉴定其结构。结果:从中亚沙棘中分离并鉴定5个化合物:β-谷甾醇(Ⅰ)、齐墩果酸(Ⅱ)、胡萝卜苷(Ⅲ)... 详细信息

目的:初步研究新疆中亚沙棘果实的化学成分。方法:采用溶剂法进行提取,通过柱层析和重结晶等方法分离化学成分,并结合波谱学方法和化学法鉴定其结构。结果:从中亚沙棘中分离并鉴定5个化合物:β-谷甾醇(Ⅰ)、齐墩果酸(Ⅱ)、胡萝卜苷(Ⅲ)、柽柳黄素3-O-β-D葡萄糖7-O-α-L鼠李糖苷(Ⅳ)、异鼠李素(Ⅴ)。结论:化合物柽柳黄素3-O-β-D葡萄糖7-O-α-L鼠李糖苷为首次从中亚沙棘中分离得到。

关键词：中亚沙棘化学成分分离纯化

沙棘总黄酮对阿霉素所致大鼠心肌梗塞和脂质过氧化保护作用的研究

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新疆医科大学学报 2010年第4期33卷 383-385页

作者：古丽米热.阿不都热依木依巴代提.托乎提热娜.卡斯木付文婷新疆医科大学第一附属医院药剂科新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学药学院药理教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学天然药物化学/生药教研室新疆乌鲁木齐830011

目的探讨沙棘总黄酮(TFH)对阿霉素(ADR)诱导大鼠心肌损伤的保护作用。方法选用60只SD大鼠,分别为正常对照组,ADR模型组,生脉注射液组和TFH 3个不同给药剂量治疗组。腹腔注射ADR造成心肌损伤模型,观察沙棘总黄酮对心肌组织匀浆超氧化物... 详细信息

目的探讨沙棘总黄酮(TFH)对阿霉素(ADR)诱导大鼠心肌损伤的保护作用。方法选用60只SD大鼠,分别为正常对照组,ADR模型组,生脉注射液组和TFH 3个不同给药剂量治疗组。腹腔注射ADR造成心肌损伤模型,观察沙棘总黄酮对心肌组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平的影响并观察组织病理学改变。结果腹腔注射ADR后可致大鼠心肌明显损害,心肌SOD及GSH-Px活性下降,MDA含量升高,同时出现心肌组织的改变。应用TFH后能增加SOD及GSH-Px活性,降低MDA含量,减轻心肌组织损伤。结论 TFH对ADR所引起的心肌结构损伤和脂质过氧化有一定的保护作用,其机制可能与保护心肌SOD、GSH-Px活性及清除自由基,防止脂质过氧化有关。

关键词：沙棘总黄酮阿霉素丙二醛超氧化物歧化酶谷胱甘肽过氧化酶心肌损伤