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国内外青稞材料白粉病田间抗性鉴定

西藏农业科技 2023年第3期45卷 8-12页

作者：旺姆杨春葆原红军西藏自治区农牧科学院农业研究所/省部共建青稞和牦牛种质资源与遗传改良国家重点实验室西藏拉萨850002

本研究对国内外2 006份青稞种质材料进行了田间白粉病抗性鉴定,为青稞优异种质创制、抗病育种提供参考亲本。在田间诱导青稞发病,通过“0~9级法”对各青稞材料进行白粉病抗性等级评价;每一列供试材料间隔0.50 m作为诱发行,诱发行每隔0.5... 详细信息

本研究对国内外2 006份青稞种质材料进行了田间白粉病抗性鉴定,为青稞优异种质创制、抗病育种提供参考亲本。在田间诱导青稞发病,通过“0~9级法”对各青稞材料进行白粉病抗性等级评价;每一列供试材料间隔0.50 m作为诱发行,诱发行每隔0.50 m播种20粒“藏青13号”作为诱发材料。本研究对各青稞材料白粉病抗性进行了分类分析,抗性等级分为免疫(IM)、高抗(HR)、中抗(MR)、中感(MS)、高感(HS)和极感(VHS)6种,2 006份材料各抗病等级比例分别为25.47%,3.59%,6.28%,22.38%,41.77%和0.50%。本研究对大量青稞材料进行田间白粉病抗性鉴定,为深入研究青稞白粉病抗病机理和相关基因分子标记开发提供材料和数据支持。

关键词：青稞白粉病抗性鉴定西藏

正常和低氧环境下转染beclin-1对乳腺癌细胞BT-549的抑制作用

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正常和低氧环境下转染beclin-1对乳腺癌细胞BT-549的抑制作用

作者：原红军南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景和目的：乳腺癌已成为近年来发病率最高的女性肿瘤之一,其中三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)约占15%。TNBC指的是ER、PR与HER-2均为阴性的乳腺癌,其特点是预后差,早期和术后转移率高,针对ER、PR的内分泌治疗... 详细信息

研究背景和目的：乳腺癌已成为近年来发病率最高的女性肿瘤之一,其中三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)约占15%。TNBC指的是ER、PR与HER-2均为阴性的乳腺癌,其特点是预后差,早期和术后转移率高,针对ER、PR的内分泌治疗和针对HER2的Trastuzumab分子靶向治疗等均不适用于TNBC患者,目前治疗方式多为手术并辅以化疗和放疗。因此新的治疗方式对于TNBC患者显得尤为重要。自噬(autophagy)是近年来肿瘤治疗研究的新靶点,在肿瘤的发生和发展过程中起着不可忽略的作用。所谓自噬是细胞存活、分化、发展和形成稳态所必须的一种溶酶体降解现象,该现象被认为是细胞应对多种致病因素的一种适应方式,包括三个主要阶段,分别是自噬启动阶段、自噬体的形成和延伸阶段,以及自噬溶酶体的降解阶段。当细胞出现能量供应不足,或存在物理、化学和生物刺激(如缺氧、药物作用),或细胞内出现衰老细胞器时,细胞可通过溶酶体系统降解自身大分子和细胞器,其降解产物重新参与细胞的能量代谢,这自我消化过程不仅为应激环境下的细胞提供基本的能量保证,还可促使细胞清除自身已损坏的细胞器和入侵的微生物,从而有利于细胞的进一步生长,然而达到一定程度的自噬则会引发细胞的死亡(又称为自噬性死亡-Ⅱ型程序性死亡)。自噬引起的细胞死亡与凋亡是两种独立的生理过程,但也有证据表明二者存在共同同路。Beclin1是由Liang等1998年在致死性sinbis病毒性脑膜炎大鼠中发现的60KD的蛋白质,可与bcl-2基因产物相互作用,抑制Isinbis病毒的复制。研究显示,在多种肿瘤中都出现Beclin-1蛋白表达的下降,与Beclin1诱导自噬息息相关。Beclin1,尤其是定位于内质网的Beclin-1,是诱导自噬的重要因子,其机制主要是与Ⅲ型P13K形成复合物参与募集细胞浆中含FYVE或PX基序的蛋白质,用于自噬体膜的形成,并引导其自噬蛋白定位于自噬体膜。当细胞出现自噬后,如果过多的细胞器或者蛋白质进入自噬小泡而被降解,细胞的功能就会严重受损,出现不可逆的改变,从而导致细胞死亡。细胞过度表达Beclin1可以诱导细胞自噬,而在营养缺乏、缺氧、药物作用等应激条件下更易出现自噬性死亡。在治疗肿瘤的化疗药物中,他莫昔芬、神经酰氨通过上调Beclin1并抑制AKT促进自噬的发生。通过下调Beclin1的表达,则能够显著降低自噬反应,使肿瘤细胞免于死亡,促进肿瘤的发生、发展,例如Beclin-1等位基因敲除的小鼠发生自发性恶性变(包括乳腺癌、肺癌、肝癌等)的概率增加。这些结果提示Beclin-1介导的自噬性死亡可能与肿瘤细胞生长抑制有关。Beclin1调控细胞自噬的同时还影响细胞凋亡：当细胞处于正常状态时,Beclin1可与凋亡调控蛋白Bcl-2家族的抗凋亡蛋白Bcl-2/Bcl-x1相结合,促进细胞凋亡,而当细胞处于应激环境时,Beclin1与Class Ⅲ PI3激酶结合,形成Beclin1/Class Ⅲ PI3K复合物,再诱导饥饿环境下的细胞自噬,同时还能释放和激活促凋亡蛋白Bax和Bak,从而诱导细胞发生凋亡。Futreal PA等发现,乳腺癌中17q21上等位缺失达到50%,包括三阴性乳腺癌细胞BT-549。本实验旨在研究自噬基因beclin-1对三阴性乳腺癌细胞BT-549生长的抑制作用,为今后以自噬基因为靶点的乳腺癌基因治疗提供科学依据。方法：本实验以人三阴性乳腺癌细胞BT-549用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液在37℃、5%CO2培养箱连续贴壁培养,隔天换液,倒置显微镜下观察细胞形态及生长情况,取生长状况良好的对数期生长细胞用于实验。将pDsRed-C1和pDS-RED-C1-Beclin1质粒转化大肠杆菌感受态DH5α细胞,所提质粒经测序证实携带Beclin1基因后,进一步扩增用于实验。利用脂质体将真核载体pDS-RED-C1-beclin-1转染进入BT-549细胞,实验共分三组：实验组(转染pDS-RED-C1-Beclin1)、空白组及阴性对照组(转染pDS-RED-C1),并且分别在正常和低氧环境下进行实验,分组后主要检测指标为两类：(1)转染效果(以beclin-1基因mRNA及蛋白表达水平作为标准);(2)转染效用(以细胞增值率、细胞自噬率、凋亡率及细胞迁移能力为标准)。用RT-PCR检测转染后beclin-1mRNA表达,western blot检测转染后蛋白表达;在正常及低氧环境下分别培养后用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测细胞增殖率：通过转染后24、48、72h的OD值来计算,48h和72h增值率计算分别为(OD48-OD24)/OD24和(OD72-OD24)

关键词： beclin-1 基因三阴性乳腺癌自噬

硬粒小麦—节节麦合成小麦的低分子量谷蛋白基因的克隆与序列分析

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硬粒小麦—节节麦合成小麦的低分子量谷蛋白基因的克隆与序列分析

作者：原红军四川农业大学

学位级别：硕士

小麦低分子量谷蛋白亚基（LMW-GS）的类型和数量对小麦面粉的加工品质有重要的影响。已从普通小麦、硬粒小麦、栽培一粒小麦,野生一粒小麦和节节麦等物种中分离的LMW-GS基因序列揭示了其编码区长度在1000 bp左右,不含内含子,在N、C端核... 详细信息

小麦低分子量谷蛋白亚基（LMW-GS）的类型和数量对小麦面粉的加工品质有重要的影响。已从普通小麦、硬粒小麦、栽培一粒小麦,野生一粒小麦和节节麦等物种中分离的LMW-GS基因序列揭示了其编码区长度在1000 bp左右,不含内含子,在N、C端核苷酸组成上具有保守性,为通过PCR方法分离单个LMW-GS基因提供了可能。本研究选取一个四川农业大学小麦研究所合成的硬粒小麦-节节麦合成小麦SHW-Z1作为研究材料。本文以根据Glu-D3位点基因编码的低分子量谷蛋白亚基基因序列设计的PCR引物,对来源于SHW-Z1的6个LMW-GS基因进行克隆和测序分析,获得的主要结果如下: 1.以普通小麦Glu-D3位点基因编码的LMW-GS基因序列设计的PCR引物扩增SHW-Z1的总DNA,获得了两条长度分别约950 bp和1010 bp的片断。与预期的LMW-GS基因编码区的长度接近。 2.将这两个片断克隆和测序,共获得了6个不同的亚基序列x-1、x-2、x-3、d-15、d-17和d-21。6个亚基基因序列编码区核苷酸长度分别为897 bp、897 bp、915 bp、1011 bp、1053 bp和960 bp。x-3、d-15与d-17具有单一完整的开放阅读框（ORF）,可分别编码304、336和350个氨基酸残基的成熟蛋白。x-1、x-2与d-21由于在编码区中存在提前终止密码子,为不能编码成熟蛋白质的假基因。 3.序列比较分析显示:这6个序列与小麦族物种的LMW-GS序列有很高的相似性,可以表明其为低分子量谷蛋白亚基序列。x-1、x-2、x-3和d-15可能由Glu-D3基因位点编码,d-15可能由Glu-B3位点基因编码,但d-17所在的基因位点无法确定。 4.x-3、d-15和d-17分别与GenBank中登录的LMW-GS序列DQ457417、AB062852和Y14104有较高的一致性,且序列结果非常相似。推测它们有类似的品质功能。但是,x-3全序列只含有7个半胱氨酸残基,这将对面粉品质产生影响。

关键词：硬粒小麦节节麦合成小麦 LMW-GS 基因克隆序列分析

NaCl胁迫西藏青稞芽期幼苗根系生长特性及其耐盐性分析

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广东农业科学 2021年第2期48卷 26-32页

作者：杨春葆原红军省部共建青稞和牦牛种质资源与遗传改良国家重点实验室/西藏自治区农牧科学院农业研究所拉萨西藏850032

【目的】了解NaCl胁迫对西藏青稞芽期幼苗根系形态的影响以及与耐盐性的关系,筛选出耐盐性青稞品种(系)。【方法】以石英砂为基质,采用0、50、100、150、200、250 mmol/L NaCl溶液处理青稞,以相对活力指数为指标回归分析得到NaCl胁迫半... 详细信息

【目的】了解NaCl胁迫对西藏青稞芽期幼苗根系形态的影响以及与耐盐性的关系,筛选出耐盐性青稞品种(系)。【方法】以石英砂为基质,采用0、50、100、150、200、250 mmol/L NaCl溶液处理青稞,以相对活力指数为指标回归分析得到NaCl胁迫半致死浓度(LC_(50)),以LC_(50)为胁迫浓度处理28份青稞,研究NaCl胁迫对青稞根系形态特性影响,筛选耐盐性青稞品种(系)。【结果】西藏青稞幼苗相对活力指数随NaCl溶液浓度增加呈下降趋势,NaCl胁迫浓度与相对活力指数回归方程为:y=-0.0022x+0.9107;以LC_(50)为浓度胁迫青稞芽期幼苗,发芽率、芽长、最长根长、单株鲜重、单株干重均受到不同程度影响,其中芽长最敏感,单株鲜重最迟钝;相关性分析显示,相对活力指数与相对发芽率显著相关,与最长根长极显著相关,与单株干重极显著正相关;聚类分析结果显示,在欧式距离3处可以将青稞分为4大类,其中A类相对活力指数达到0.71,耐盐性最强。【结论】NaCl胁迫青稞半致死浓度为186.68 mmol/L;发芽率、根长、单株干重可作为青稞耐盐性材料筛选的辅助指标。结合相对活力指数及聚类分析,筛选到3份材料(WDM03018、WDM03722、WDM04526)耐盐性最强。

关键词： NaCl溶液青稞根系耐盐性半致死浓度西藏

Beclin1基因增强三阴性乳腺癌细胞BT-549对多柔比星的敏感性

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实用医学杂志 2013年第6期29卷 870-873页

作者：王日玮吴爱国王梦川原红军南方医科大学珠江医院普外科广州市510282

目的:探讨Beclin1基因对三阴性乳腺癌细胞BT-549增殖及多柔比星作用于癌细胞的影响。方法:脂质体法分别将质粒pDsRed-C1、pDsRed-C1-Beclin1转染于人三阴性乳腺癌BT-549细胞株。转染后一组用多柔比星处理,另一组不做处理。MTT法分析Becl... 详细信息

目的:探讨Beclin1基因对三阴性乳腺癌细胞BT-549增殖及多柔比星作用于癌细胞的影响。方法:脂质体法分别将质粒pDsRed-C1、pDsRed-C1-Beclin1转染于人三阴性乳腺癌BT-549细胞株。转染后一组用多柔比星处理,另一组不做处理。MTT法分析Beclin1过表达对BT-549细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:多柔比星处理前后,Beclin1组细胞增殖均慢于阴性对照组和空白组细胞(各P<0.01);细胞凋亡的变化:多柔比星处理前转染pDsRed-C1-Beclin1的BT-549细胞凋亡率为(8.81±1.45)%,高于转染pDsRed-C1细胞组和空白组(P<0.05),多柔比星处理后,Beclin1组细胞的凋亡率为(14.3±1.09)%,亦高于阴性对照组和空白组(P=0.00)。结论:Beclin1基因过表达抑制BT-549细胞的增殖,增强癌细胞对多柔比星的敏感性。

关键词： Beclin1基因 BT-549细胞多柔比星

硬粒小麦-节节麦人工合成种的高分子量谷蛋白亚基组成及表达分析

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西南农业学报 2009年第2期22卷 268-270页

作者：蒋云原红军王益宣朴四川省农业科学院生物技术核技术研究所四川成都610066 西藏自治区农牧科学院西藏拉萨850032 四川农业大学小麦研究所四川都江堰611830

用十二烷基硫酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳方法(SDS-PAGE),分析了4份天然加倍形成的硬粒小麦-节节麦人工合成种的高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)组成。结果表明:4份硬粒小麦-节节麦人工合成双二倍体SHW-Z1,SHW-Z2,SHW-Z3,SHW-Z4的HMW-GS分别为... 详细信息

用十二烷基硫酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳方法(SDS-PAGE),分析了4份天然加倍形成的硬粒小麦-节节麦人工合成种的高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)组成。结果表明:4份硬粒小麦-节节麦人工合成双二倍体SHW-Z1,SHW-Z2,SHW-Z3,SHW-Z4的HMW-GS分别为6+8、5+12;6+8、5+10;6+8、5+12和6+8、5+10。其中,6+8亚基来自硬粒小麦;5+12,5+10亚基分别来自节节麦As60与As65。硬粒小麦和节节麦的HMW-GS呈共显性遗传,在合成六倍体小麦背景中均得到了表达,且没有出现变异。表明可通过节节麦与二粒小麦杂交并天然加倍的途径创造桥梁种质,将节节麦的优质HMW-GS基因引入普通小麦。

关键词： HMW-GS 节节麦合成六倍体小麦品质育种

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西藏青稞种质资源材料白粉病抗性鉴定

大麦与谷类科学 2014年第4期31卷 8-14页

作者：原红军西藏自治区农牧科学院西藏拉萨850002 西藏自治区青稞种质改良和牦牛繁育重点实验室西藏拉萨850002

为了筛选西藏青稞抗白粉病资源,选取具有代表性的330份青稞材料在田间进行白粉病感染调查,结合室内盆栽幼苗接种鉴定。330份青稞材料的鉴定结果表明,田间发病大多是中下部叶片感染,发病材料169份,占供试材料的51.21%;室内幼苗接种发现... 详细信息

为了筛选西藏青稞抗白粉病资源,选取具有代表性的330份青稞材料在田间进行白粉病感染调查,结合室内盆栽幼苗接种鉴定。330份青稞材料的鉴定结果表明,田间发病大多是中下部叶片感染,发病材料169份,占供试材料的51.21%;室内幼苗接种发现高抗材料7份,占供试材料的2.12%,抗病材料12份,占供试材料的3.64%,感病和高感品种311份,占供试材料的94.24%。

关键词：西藏青稞白粉病抗性鉴定

硬粒小麦-节节麦人工合成小麦的穗发芽抗性研究

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麦类作物学报 2008年第3期28卷 397-401页

作者：蒋云康厚扬原红军王益周永红四川农业大学小麦研究所四川都江堰611830

为了发掘来自节节麦的抗穗发芽基因资源,利用具有染色体自然加倍特性的硬粒小麦栽培种(Triticum durumL ***,2n=4x=28,AABB)与节节麦(Aegilops tauschiiCosson.,2n=2x=14,DD)杂交,经染色体天然加倍合成了4份新六倍体小麦SHW-Z1、SHW-Z2... 详细信息

为了发掘来自节节麦的抗穗发芽基因资源,利用具有染色体自然加倍特性的硬粒小麦栽培种(Triticum durumL ***,2n=4x=28,AABB)与节节麦(Aegilops tauschiiCosson.,2n=2x=14,DD)杂交,经染色体天然加倍合成了4份新六倍体小麦SHW-Z1、SHW-Z2、SHW-Z3和SHW-Z4(TriticumaestivumL.,2n=6x=42,AABBDD)。通过对这4份材料不同灌浆期的不同发芽处理研究表明,节节麦抗穗发芽特性得到表达,4份材料平均穗发芽率分别仅为1.75%,0.31%,1.09%和0.17%。与穗发芽抗性极强的合成六倍体小麦RSP相比,亲本为节节麦As65的合成小麦SHW-Z2和SHW-Z4具有更强的穗发芽抗性。4份合成六倍体小麦抗穗发芽的因素主要来自穗部与种子的抑制,颖壳内含物的化学抑制作用较弱。

关键词：硬粒小麦节节麦合成六倍体小麦抗穗发芽

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西藏青稞抗旱相关基因表达模式分析研究

现代农业科技 2015年第3期 26-28页

作者：原红军西藏自治区农牧科学院农业研究所西藏拉萨850002 西藏自治区青稞种质改良和牦牛繁育重点实验室

从青稞苗期叶片干旱胁迫诱导基因表达的正向差减文库中筛选出丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因(AAPK)、胁迫诱导蛋白基因(Tsi1)、脱水蛋白基因(Dehydrin)、Δ1-二氢吡咯-5-羧酸合成酶基因(P5Cs)等9个与抗旱相关的基因,采用实时荧光定量PCR对... 详细信息

从青稞苗期叶片干旱胁迫诱导基因表达的正向差减文库中筛选出丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因(AAPK)、胁迫诱导蛋白基因(Tsi1)、脱水蛋白基因(Dehydrin)、Δ1-二氢吡咯-5-羧酸合成酶基因(P5Cs)等9个与抗旱相关的基因,采用实时荧光定量PCR对其表达模式进行分析。结果表明,在渍水条件下,Tsi1、ERA1、Os SKIPa、Nt-SYR1、SHMT和AAPK基因上调表达,而P5Cs、Dehydrin基因下调表达;随着干旱胁迫处理时,Tsi1、ERA1、Os SKIPa和AAPK基因也呈上调表达,干旱复水后8 h时,这些基因表达量均达到最高。Nt-SYR1干旱胁迫后,在土壤绝对含水量达到4.8%明显上调表达,复水后2 h时表达量最高;P5CSs基因,在严重干旱胁迫下呈下调表达,在干旱后复水后表达量逐步上调表达;Dehydrin基因在干旱胁迫处理时上调表达,随着复水时间增加,也呈上调表达;SHMT基因在干旱处理里及复水后均而呈下调表达;SAMDC基因在渍水及正常生长所需的土壤绝对含水量时表达无变化,干旱处理时呈下调表达,但土壤绝对含水量达到4.8%明显上调表达,之后又呈下调表达,整个处理时期表达量较低。

关键词：青稞干旱胁迫基因 Real Time PCR 西藏地区