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检测棘球蚴病患者血清内循环抗原的免疫层析试条的制备和评价

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中国人兽共患病学报 2024年第2期40卷 166-170页

作者：张璟王颖高春花危芙蓉贾孝凯石锋中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心) 国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织热带病合作中心国家级热带病国际联合研究中心上海200025

目的以棘球蚴囊液纯化抗原特异性单克隆抗体为基础建立一种快速、简便诊断棘球蚴病的胶体金免疫层析试条方法,并对其进行评价。方法纯化棘球蚴囊液抗原,并以此免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,对所制备的单克隆抗体确定其... 详细信息

目的以棘球蚴囊液纯化抗原特异性单克隆抗体为基础建立一种快速、简便诊断棘球蚴病的胶体金免疫层析试条方法,并对其进行评价。方法纯化棘球蚴囊液抗原,并以此免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,对所制备的单克隆抗体确定其亚类和效价。筛选基于棘球蚴囊液纯化抗原制备的单克隆抗体对,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记筛选到的单克隆抗体,并将其吸附于交联垫;将另一筛选到的单克隆抗体划线包被于同一硝酸纤维素膜适当位置,制成免疫层析试条。用该试条检测手术确诊的细粒棘球蚴病(87例)、多房棘球蚴病(40例)、囊尾蚴病(25例)、日本血吸虫病(10例)、弓形虫病(5例)、并殖吸虫病(5例)、华支睾吸虫病(5例)患者血清,以及60例健康者血清,以评价其检测的敏感性和特异性。结果以棘球蚴囊液纯化抗原为免疫源制备单克隆抗体,共筛选了11株能高效分泌效价在1∶25600~1∶102400特异抗体的细胞株,抗体亚类为IgG_(1)或IgG_(2)a。筛选到的单克隆抗体F 3B 6作为标记抗体,单克隆抗体C 4H 6作为包被抗体制成免疫层析试条,用该试条检测127份棘球蚴病患者血清的敏感性为88.12%(112/127),其中试条检测囊型包虫病患者血清的敏感性为88.51%(77/87),检测泡型包虫病患者血清的敏感性为87.50%(35/40),试条法检测两型包虫病患者血清敏感性之间差异无统计学意义(χ^(2)=0.03,P=0.86)。与25份囊尾蚴病患者血清、10份日本血吸虫病患者血清、5份弓形虫病患者血清、5份并殖吸虫病患者血清和5份华支睾吸虫病患者血清均无交叉反应,60份健康者血清也均为阴性,总特异性为100.00%。结论成功制备了棘球蚴囊液纯化抗原的单克隆抗体,以此单抗为基础研制出的快速诊断棘球蚴病胶体金免疫层析试条敏感性、特异性均较高。

关键词：棘球蚴病单克隆抗体循环抗原免疫层析试条检测评价

利什曼原虫K26基因的克隆、表达及用于我国内脏利什曼病特异性抗体检测的效果评价

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中国人兽共患病学报 2024年第8期40卷 763-767页

作者：丁丹王颖高春花莫筱瑾石锋张璟贾孝凯危芙蓉上海市浦东新区疾病预防控制中心上海200136 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心) 国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织热带病合作中心国家级热带病国际联合研究中心上海200025

目的克隆并表达分离于我国3种类型的利什曼原虫K26基因,并用其检测我国内脏利什曼病特异性抗体,同时进行效果评价。方法分别将我国新疆喀什(KS-6株)、四川九寨沟县(SC6株)和新疆伽师县(JIASHI-1株)K26基因进行全基因合成并加入Bam H I与... 详细信息

目的克隆并表达分离于我国3种类型的利什曼原虫K26基因,并用其检测我国内脏利什曼病特异性抗体,同时进行效果评价。方法分别将我国新疆喀什(KS-6株)、四川九寨沟县(SC6株)和新疆伽师县(JIASHI-1株)K26基因进行全基因合成并加入Bam H I与Xho I酶切位点,分别将K26基因连接至双酶切的pET32a表达载体,转入大肠埃希菌(***)BL21(DE3)中经1 mmol/L的异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用组氨酸标签亲和纯化柱(Ni-NTA树脂)纯化重组蛋白。用制备的3种抗原分别作为包被抗原,以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测病原学确诊的内脏利什曼病患者及其它寄生虫病患者和健康者的血清中和抗体,以评价其检测的敏感性和特异性。用美国InBios公司rK39试条进行平行检测,比较3种抗原检测的敏感性。结果成功构建利什曼原虫pET32a-K26重组质粒,并在原核细胞中成功表达。以KS-6株、SC6株、JIASHI-1株利什曼原虫重组K26蛋白为包被抗原的ELISA法和rK39试条法检测黑热病患者血清的敏感性分别为90.00%(99/110)、92.73%(102/110)、90.91%(100/110)和93.64%(103/110),共检测45份其他寄生虫病患者(包括日本血吸虫病、疟疾、细粒棘球蚴病、华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病和弓形虫病)的血清均无交叉反应,健康者血清(40份)也无假阳性反应,特异性均为100.00%。KS-6株、SC6株和JIASHI-1株利什曼原虫重组K26蛋白ELISA法和rK39试条法的阳性检出率差异无统计学意义(χ^(2)_(KS)-6=0.97,P=0.33;χ^(2)_(SC6)=0.07,P=0.79;χ^(2)_(JIASHI)-1=0.57,P=0.45)。3种K26抗原的阳性检出率差异无统计学意义(χ^(2)=0.53,P=0.97)。结论重组K26抗原在内脏利什曼病诊断上具有潜在的应用价值。

关键词：内脏利什曼病 rK26 基因克隆表达酶联免疫吸附试验 rK39 评价

分子生物学技术在检测与量化软体动物体内蠕虫感染中的应用

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海洋科学 2009年第10期33卷 127-132页

作者：危芙蓉吕山张仪中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

寄生虫病目前仍是威胁人类健康的重要传染殶,在全球疾病负担中占据不可忽视的地位,尤其在农村和经济落后地区.

关键词：动物体内分子生物学技术蠕虫感染检测寄生虫病控制应用量化世界卫生组织

基于利什曼原虫K26重组抗原检测黑热病特异抗体的免疫层析试条方法的建立与效果评价

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中国人兽共患病学报 2023年第10期39卷 981-985页

作者：石锋丁丹高春花张璟贾孝凯王颖危芙蓉中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心) 国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织热带病合作中心国家级热带病国际联合研究中心上海200025 上海市浦东新区疾病预防控制中心上海200136

目的建立基于利什曼原虫K26重组抗原(Recombinant K26,rK26)检测内脏利什曼病特异抗体的胶体金免疫层析试条方法,并评价效果。方法用胶体金标记链球菌G蛋白(Streptococcal Protein G,SPG),并将其吸附于交联释放垫上;将利什曼原虫K26重... 详细信息

目的建立基于利什曼原虫K26重组抗原(Recombinant K26,rK26)检测内脏利什曼病特异抗体的胶体金免疫层析试条方法,并评价效果。方法用胶体金标记链球菌G蛋白(Streptococcal Protein G,SPG),并将其吸附于交联释放垫上;将利什曼原虫K26重组抗原作为包被抗原包被于硝酸纤维素膜适当位置,制成检测特异抗体的免疫层析试条。用该试条检测病原学确诊的内脏利什曼病、其它寄生虫病以及健康者血清,以评价其检测的敏感性和特异性。同时用rK39(Recombinant K39,rK39)试条进行平行检测。结果rK26试条法和rK39试条法检测内脏利什曼病患者血清的敏感性分别为91.82%(101/110)和93.64%(103/110);与10份疟疾患者血清、10份日本血吸虫病患者血清、10份细粒棘球蚴病患者血清、5份弓形虫病患者血清、5份并殖吸虫病患者血清和5份华支睾吸虫病患者血清均无交叉反应,40份健康者血清也均为阴性,rK26试条法和rK39试条法的总特异性均为100.00%。rK26试条法和rK39试条法阳性检出率之间的差异无统计学意义(χ^(2)=0.25,P=0.62),2种试条法检测黑热病患者血清的结果一致性较好(κ=0.73)。结论建立的基于利什曼原虫K26重组抗原检测内脏利什曼病的胶体金免疫层析试条敏感性、特异性均较高。

关键词：内脏利什曼病 rK26 rK39 免疫层析试条

3种市售杀虫气雾剂产品对臭虫及黑毛皮蠹杀灭效果探讨

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中国媒介生物学及控制杂志 2022年第2期33卷 207-210页

作者：贾孝凯王颖高春花周丹丹危芙蓉中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心)新技术室国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织热带病合作中心国家级热带病国际联合研究中心上海200025

目的研究3种市售杀虫气雾剂对温带臭虫及黑毛皮蠹的杀灭效果,了解2种卫生害虫对不同成分杀虫气雾剂的敏感性。方法根据国标GB/T 13917.2-2009,用圆筒法测定杀虫气雾剂对温带臭虫和黑毛皮蠹的20 min击倒率,并观察48和72 h死亡率。采用χ^... 详细信息

目的研究3种市售杀虫气雾剂对温带臭虫及黑毛皮蠹的杀灭效果,了解2种卫生害虫对不同成分杀虫气雾剂的敏感性。方法根据国标GB/T 13917.2-2009,用圆筒法测定杀虫气雾剂对温带臭虫和黑毛皮蠹的20 min击倒率,并观察48和72 h死亡率。采用χ^(2)检验分析不同组别间20 min击倒率和死亡率的差异。结果对黑毛皮蠹的杀灭实验中,3种市售杀虫气雾剂对黑毛皮蠹的20 min击倒率、48和72 h死亡率均为100%;在杀灭实验中,1、2和3号气雾剂对温带臭虫的20 min击倒率分别为100%、98.33%和90.00%,但3种杀虫气雾剂对温带臭虫48和72 h死亡率均为100%。不同组别间20 min击倒率差异无统计学意义(χ^(2)=3.000,P>0.05)。结论根据国标GB/T 13917.2-2009的方法测试的3种市售杀虫气雾剂对温带臭虫及黑毛皮蠹的杀灭效果,能够达到较高的击倒率和杀灭率。

关键词：杀虫气雾剂卫生害虫温带臭虫黑毛皮蠹杀灭效果

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鄂产黄药子对小鼠免疫功能影响的实验研究

中国药学杂志 2009年第17期44卷 1309-1311页

作者：张海谋袁金玉危芙蓉刘莉芳湖北大学生命科学学院武汉430062

目的研究鄂产黄药子对小鼠免疫功能的影响。方法将昆明小鼠随机分为高、中、低3个剂量组,用鄂产黄药子水煎剂进行等容量灌胃,总剂量分别为1000,490和240g·kg-1。另设对照组灌服同体积的生理盐水。连续灌服15d后,用乳酸脱氢酶释放法、... 详细信息

目的研究鄂产黄药子对小鼠免疫功能的影响。方法将昆明小鼠随机分为高、中、低3个剂量组,用鄂产黄药子水煎剂进行等容量灌胃,总剂量分别为1000,490和240g·kg-1。另设对照组灌服同体积的生理盐水。连续灌服15d后,用乳酸脱氢酶释放法、碳粒廓清实验进行非特异性免疫检测;用定量溶血分光光度法进行体液免疫检测;用α-醋酸萘酯酶染色法、四甲基偶氮唑蓝法进行细胞免疫检测。结果与对照组相比较,高剂量组能明显降低小鼠巨噬细胞的吞噬作用,而中剂量组能增强小鼠自然杀伤细胞的活性、抗体形成细胞数量、血T淋巴细胞酯酶染色率、T淋巴细胞增殖能力。结论总体上,高剂量鄂产黄药子具有免疫抑制的功能,中剂量具有免疫增强的功能。

关键词：黄药子小鼠免疫功能

中国部分地区警犬体表寄生蜱的巴贝虫感染情况调查

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第5期30卷 390-392页

作者：危芙蓉兰勤娴朱丹叶俊华刘琴张仪中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室世界卫生组织疟疾血吸虫病和丝虫病合作中心上海200025 公安部南昌警犬基地南昌330100

于2011年8月采用逆毛式检蜱法采集重庆、福建、广东、海南、广西、河北、河南、湖南、山西、江苏和浙江等11个省(市、区)19处警犬基地警犬体表蜱虫,共计399只。采用巢式PCR和序列测定方法,对蜱体内的巴贝虫感染情况进行初步调查。结果显... 详细信息

于2011年8月采用逆毛式检蜱法采集重庆、福建、广东、海南、广西、河北、河南、湖南、山西、江苏和浙江等11个省(市、区)19处警犬基地警犬体表蜱虫,共计399只。采用巢式PCR和序列测定方法,对蜱体内的巴贝虫感染情况进行初步调查。结果显示,警犬体表寄生蜱体内巴贝虫总阳性率为5.3%(21/399),均为佛氏巴贝虫(Babesia canis vogeli)。其中重庆、广东、广西、海南和浙江等5省(市、区)警犬基地采集的蜱虫,巴贝虫阳性率分别为4/16、3.6%(1/28)、12.5%(11/88)、3.3%(4/121)和1/15。提示中国警犬体表寄生的蜱虫,存在一定比例的佛氏巴贝虫感染阳性率,接触人员有潜在感染的风险,应加强预防和控制。

关键词：蜱巴贝虫犬巢式PCR

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提纯小管福寿螺DNA6种方法的比较研究

中国人兽共患病学报 2009年第12期25卷 1181-1185页

作者：危芙蓉吕山张仪中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

目的以不同方法提纯小管福寿螺DNA,用PCR检测以比较其效果。方法将80只野外采集的小管福寿螺分8组,取出肺囊并剪碎后分别用QIAGEN、天根、OMEGA的基因组DNA抽提试剂盒,及异硫酸氰胍抽提法、树脂抽提法和树脂-二氧化硅抽提法提纯小管福... 详细信息

目的以不同方法提纯小管福寿螺DNA,用PCR检测以比较其效果。方法将80只野外采集的小管福寿螺分8组,取出肺囊并剪碎后分别用QIAGEN、天根、OMEGA的基因组DNA抽提试剂盒,及异硫酸氰胍抽提法、树脂抽提法和树脂-二氧化硅抽提法提纯小管福寿螺基因组DNA,用PCR扩增福寿螺16s rDNA,测定目的条带相对浓度以评价各方法的抽提效果。结果各种方法提纯的基因组DNA均能用PCR扩增方法扩增出目的条带,但目的条带浓度有一定差异。其中,QIAGEN公司和OMEGA公司的抽提试剂盒、树脂抽提法和树脂-二氧化硅抽提法提纯的模板PCR扩增量较高,与其余4种抽提方法比较有统计学意义。试剂盒抽提法的单价成本是手工抽提法的8.4～57.1倍。结论QIAGEN和OMEGA公司的基因组DNA抽提试剂盒的提纯效果好,但成本较高,适用于少量样本的抽提。树脂抽提法和树脂-二氧化硅抽提法从提纯效果、成本等方面评价,较适用于大量样本抽提处理工作。异硫酸氰胍抽提法,抽提快,成本低但所用试剂对身体有毒害,较适用于大量样本或应急样本的处理。

关键词：小管福寿螺肺囊 PCR DNA 提纯效果

分子生物学技术在检测与量化软体动物宿主蠕虫感染中的应用(英文)

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中国血吸虫病防治杂志 2009年第5期21卷 437-442页

作者：危芙蓉(综述) 吕山(审校) 张仪(审校) 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

分子生物学技术是检测与定量分析的一种重要研究手段。本文对常用分子生物学方法的特性、敏感性、特异性、优缺点及其在蠕虫检测中的应用进行了综述。

关键词：蠕虫软体动物分子生物学技术检测