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MST1在结直肠癌SW480细胞增殖与凋亡中的作用

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MST1在结直肠癌SW480细胞增殖与凋亡中的作用

作者：卢洪飞南昌大学

学位级别：硕士

哺乳动物不育系20样激酶1/2(MST1/2)是果蝇hippo基因在哺乳类动物中的同源基因MST1/2编码的蛋白,也是哺乳动物中Hippo信号通路的核心组分,具有调节器官大小、影响细胞增殖、凋亡及抑制肿瘤生长等功能。本实验从分子、细胞及动物水平上探... 详细信息

哺乳动物不育系20样激酶1/2(MST1/2)是果蝇hippo基因在哺乳类动物中的同源基因MST1/2编码的蛋白,也是哺乳动物中Hippo信号通路的核心组分,具有调节器官大小、影响细胞增殖、凋亡及抑制肿瘤生长等功能。本实验从分子、细胞及动物水平上探讨MST1在结直肠癌中的作用及分子机制,旨在为结直肠癌的治疗提供新的潜在靶点。方法:1、质粒的双酶切鉴定、纯化及扩增感受态细胞扩增及AgeI和EcoRI双酶切鉴定质粒p-EGFP-MST1和p-EGFP-N1。鉴定后进行大量扩增、纯化及浓度的测定。2、不同浓度、时间5-FU对SW480细胞增殖及MST1、Phospho-YAP1(Ser127)、PUMA等蛋白的影响不同浓度梯度、时间的5-FU处理SW480细胞,MTS比色法检测细胞增殖抑制率,Western blot检测不同浓度5-FU对MST1、YAP、Phospho-YAP1(Ser127)、p73、p53、PUMA和caspase-3蛋白表达的影响。3、MST1对SW480细胞作用的体外实验研究Western blot和RT-qPCR检测3个siRNA干扰片段对SW480细胞MST1的沉默效率,筛选沉默效率高的片段。体外DNA转染试剂转染siRNA或p-EGFP-MST1至细胞或与5-FU共同处理SW480细胞,MTS比色法、流式细胞术及Hoechst 33342染色法检测高表达和沉默MST1对细胞增殖与凋亡的影响;RT-qPCR检测MST1、yap、p73、p53、caspase3、CTGF和AREG的m RNA的转录水平,Western blot方法检测MST1、YAP、Phospho-YAP1(Ser127)、p73、p53、PUMA和caspase-3蛋白表达情况,初步探讨MST1在体外对SW480增殖及凋亡影响的分子机制及MST1表达与5-FU促进细胞凋亡的关系。4、MST1高表达对人结直肠癌SW480细胞鼠移植瘤生长的影响构建SW480细胞的人结直肠癌裸鼠移植瘤模型,MST1进行基因治疗或联合5-FU共同治疗,观察移植瘤的生长情况,免疫组化分析移植瘤中MST1、Phospho-YAP1(Ser127)、及PUMA蛋白的表达,初步研究MST1抑制肿瘤生长的分子机制。结果:1、体外5-fu处理sw480细胞,随药物浓度和处理时间升高细胞生长抑制率明显升高,随5-fu作用浓度升高,mst1表达升高,yap磷酸化形成phospho-yap1(ser127)的水平升高,促凋亡相关蛋白p73、p53、puma及caspase3表达量显著升高。2、mst1高表达明显抑制sw480细胞生长,促进凋亡。体外介导p-egfp-mst1质粒转染sw480细胞,细胞生长抑制率及细胞凋亡率明显升高;与5-fu联合处理时,对细胞生长抑制率及凋亡率的升高更明显。3、mst1高表达促进p73、p53、puma、caspase-3蛋白表达及yap磷酸化水平。mst1升高,yap磷酸化成phospho-yap1(ser127)的水平升高及促凋亡相关p73、p53、puma、caspase3蛋白量及各相应mrna水平显著上升。4、mst1高表达下调ctgf、aregmrna的水平。体外介导p-egfp-mst1质粒转染sw480细胞后,yap表达水平下调,ctgf和aregmrna水平显著下调,5-fu联合处理能够促进mst1功能。5、mst1沉默促进sw480细胞的增殖,抑制sw480细胞凋亡。转染mst1-sirna3片段后sw480细胞生长抑制率及细胞凋亡率明显降低。6、沉默mst1下调p73、p53、puma和caspase-3mrna的水平及上调yap、ctgf、aregmrna的水平。沉默mst1使yap磷酸化形成phospho-yap1(ser127)的水平下降,促凋亡相关p73、p53、puma、caspase-3蛋白表达量及mrna水平显著下降,但yap的蛋白及mrna水平升高且ctgf和aregmrna水平上升明显。7、裸鼠移植瘤模型结果显示,应用mst1、5-fu及5-fu联合mst13个组在治疗27天后的平均瘤块体积和重量均显著低于control或阴性对照组,并且5-fu联合mst1治疗组的抑瘤效果更明显,并伴随着mst1、phospho-yap1(ser127)、puma蛋白的移植瘤组织阳性率的升高。结论:1、mst1高表达可抑制结直肠癌sw480细胞增殖,促进凋亡,且生长抑制率随着作用时间延长而加强;mst1与5-fu联合使用,对细胞增殖抑制及促凋亡效果更好;2、mst1高表达能够促进sw480细胞中yap1(ser127)蛋白的磷酸化及升高p73、p53、puma、caspase3蛋白表达量,降低了细胞中ctgf、areg

关键词：结直肠癌 MST1 5-FU 磷酸化YAP1 细胞凋亡裸鼠移植瘤

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剖析露天采场周边民房的爆破地震效应

大科技 2012年第11期 319-320页

作者：卢洪飞广西华润红水河水泥有限公司

随着我国经济水平的不断发展和进步，各行各业得到了迅猛的发展势头，尤其是建筑行业发展势头迅猛，伴随着这种发展现状，现代化的建筑工程越来越多，在建筑工程施工过程中，要运用到许许多多的施工技术，而爆破技术就是其中之一，如今... 详细信息

随着我国经济水平的不断发展和进步，各行各业得到了迅猛的发展势头，尤其是建筑行业发展势头迅猛，伴随着这种发展现状，现代化的建筑工程越来越多，在建筑工程施工过程中，要运用到许许多多的施工技术，而爆破技术就是其中之一，如今我国的爆破技术得到了不断的完善和进步，应用也越来越广泛，在露天采场上就能运用到，其在应用广泛的同时也有一些特殊效应，如爆破地震效应。本文笔者立足于爆破地震效应，就露天采场周边民房的爆破地震效应作一个剖析。

关键词：露天采场周边民房爆破地震效应

YAP抑制剂对慢性粒细胞白血病K562细胞增殖、凋亡的影响

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中国老年学杂志 2021年第1期41卷 144-147页

作者：卢洪飞张敏鸿杨建琼罗耀玲赣南医学院第一附属医院检验科江西赣州341000 赣南医学院第一附属医院临床医学研究中心江西赣州341000

目的研究YAP抑制剂维替泊芬对慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞增殖凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法计算YAP抑制剂维替泊芬对K562细胞增殖的影响;采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测维替泊芬作用后细胞凋亡变化;Western印迹... 详细信息

目的研究YAP抑制剂维替泊芬对慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞增殖凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法计算YAP抑制剂维替泊芬对K562细胞增殖的影响;采用AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测维替泊芬作用后细胞凋亡变化;Western印迹检测维替泊芬作用后K562细胞Bax、Bcl-2基因的蛋白表达变化。结果维替泊芬作用K562细胞后,细胞增殖受到抑制,且呈剂量和时间依赖性,24 h半数抑制浓度(IC50)为11.80μmol/L;维替泊芬作用K562细胞后,细胞凋亡率随药物浓度增加而增加,4、8、16μmol/L细胞凋亡率分别为(8.86±0.99)%、(16.54±0.45)%、(27.08±4.41)%,与对照组(3.49±0.61)%相比,8、16μmol/L差异有统计学意义(P<0.05);Western印迹检测维替泊芬作用K562细胞后,细胞凋亡相关基因Bax表达上调,Bcl-2表达下调。结论YAP抑制剂维替泊芬通过抑制Hippo信号通路活性,抑制CML细胞K562细胞增殖,促进凋亡,因此,靶向Hippo信号通路有望为CML治疗提供新思路。

关键词： Hippo信号通路慢性粒细胞白血病维替泊芬

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喀腊塑克水利枢纽RCC坝层间结合质量控制

水利水电施工 2008年第S2期 68-69页

作者：廖建南时洋卢洪飞中国水利水电第十六工程局有限公司

RCC层间结合是RCC质量的重要指标,对坝体防渗和抗剪起着至关重要的作用。本工程所在区域气候特点为冬季严寒、夏季高温、大风、干燥,昼夜温差大,空气湿度不到20%,不适合干硬性RCC的施工环境条件。因大风天气频繁,仓面RCC表面易失水泛白... 详细信息

RCC层间结合是RCC质量的重要指标,对坝体防渗和抗剪起着至关重要的作用。本工程所在区域气候特点为冬季严寒、夏季高温、大风、干燥,昼夜温差大,空气湿度不到20%,不适合干硬性RCC的施工环境条件。因大风天气频繁,仓面RCC表面易失水泛白,使骨料包裹的胶凝材料散失其胶结作用,影响RCC的层间结合质量。如何采取有效措施来提高RCC层间结合质量,是本工程在施工过程中必须研究解决的重要课题。本文主要针对严寒地区恶劣环境条件下如何提高RCC的层间结合质量进行探讨。

关键词：严寒气候层间结合质量控制措施

Hippo-YAP信号通路在结直肠癌发生发展中的作用

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生命的化学 2014年第4期34卷 506-511页

作者：卢洪飞万福生南昌大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室南昌330006

结直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤,发生发展机制复杂。Hippo-YAP信号通路作为肿瘤抑制的一个重要信号通路,具有调节器官大小和维持细胞增殖与凋亡的动态平衡等功能。研究发现Hippo-YAP信号通路可以通过影响细胞的增殖、凋亡等从而参与... 详细信息

结直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤,发生发展机制复杂。Hippo-YAP信号通路作为肿瘤抑制的一个重要信号通路,具有调节器官大小和维持细胞增殖与凋亡的动态平衡等功能。研究发现Hippo-YAP信号通路可以通过影响细胞的增殖、凋亡等从而参与结直肠癌的发生发展。本文就Hippo-YAP信号通路在结直肠癌中的作用及其机制进行综述。

关键词：结直肠癌 Hippo信号通路 YAP蛋白

临床常见血培养分离的病原菌分布特点及耐药性监测分析

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当代医学 2019年第24期25卷 44-47页

作者：侯良刘华之卢洪飞赣南医学院第一附属医院感染管理科江西赣州341000 赣南医学院第一附属医院检验科江西赣州341000

目的了解和分析本院临床血培养常见病原菌的分布及耐药情况,为临床合理用药提供科学依据。方法收集本院2015年至2017年住院患者血培养阳性的数据,采用WHONET 5.5软件对其进行回顾性统计分析。结果血培养分离的主要病原菌为凝固酶阴性葡... 详细信息

目的了解和分析本院临床血培养常见病原菌的分布及耐药情况,为临床合理用药提供科学依据。方法收集本院2015年至2017年住院患者血培养阳性的数据,采用WHONET 5.5软件对其进行回顾性统计分析。结果血培养分离的主要病原菌为凝固酶阴性葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌和鲍曼不动杆菌;科室分布主要在儿科(新生儿科),其次分别在重症医学科、肾内科、血液内科、呼吸内科;检出的常见的几种革兰氏阴性菌对亚胺培南较为敏感,但耐药率均呈明显的上升趋势,对喹诺酮类和广谱青霉素类药物的耐药率呈逐渐下降趋势,对头孢哌酮/舒巴坦高度敏感;常见的几种革兰氏阳性菌对利奈唑烷和替加环素的耐药率均呈明显的上升趋势;四环素的耐药率逐渐下降,青霉素G的耐药率一直较高。结论应实时监测血培养细菌分布、耐药情况及耐药性变迁,为临床早期、合理选用抗菌药物提供依据。

关键词：血培养病原菌分布耐药性

Sonic Hedgehog信号通路对小鼠血管瘤内皮细胞增殖的影响

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中国临床新医学 2021年第5期14卷 464-468页

作者：张敏鸿曾勇卢洪飞赣南医学院第一附属医院临床医学研究中心江西341000 赣南医学院第一附属医院小儿外科江西341000 赣南医学院第一附属医院检验科江西341000

目的探讨Sonic Hedgehog信号通路对小鼠血管瘤内皮细胞(EOMA细胞)增殖的影响。方法常规培养EOMA细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测Sonic Hedgehog信号通路抑制剂GANT61对EOMA细胞增殖的影响。采用EdU染色流式细胞术检测GANT61及Sonic Hedg... 详细信息

目的探讨Sonic Hedgehog信号通路对小鼠血管瘤内皮细胞(EOMA细胞)增殖的影响。方法常规培养EOMA细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测Sonic Hedgehog信号通路抑制剂GANT61对EOMA细胞增殖的影响。采用EdU染色流式细胞术检测GANT61及Sonic Hedgehog信号通路激动剂SAG对EOMA细胞增殖的影响。采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测GANT61及SAG对EOMA细胞增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)基因mRNA表达的影响。结果GANT61作用EOMA细胞后,细胞增殖受到抑制,且呈剂量及时间依赖性,24 h半数抑制浓度(IC50)为79.42μmol/L。EdU染色流式细胞术检测结果显示,GANT61干预可抑制EOMA细胞增殖,而SAG干预可促进EOMA细胞增殖。RT-qPCR检测结果显示,GANT61干预可抑制PCNA及Cyclin D1 mRNA表达,而SAG干预可促进PCNA及Cyclin D1 mRNA表达。结论Sonic Hedgehog信号通路可调控EOMA细胞增殖,其可能参与血管瘤的发生发展。

关键词： Sonic Hedgehog信号通路血管瘤 GANT61 SAG 增殖

Mst1对结直肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响

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南昌大学学报（理科版） 2015年第6期39卷 606-612页

作者：刘卓琦卢洪飞杨晓红万慧芳余乐涵许宝华张霞丽万福生南昌大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室江西南昌330006 南昌大学医学实验教学中心江西南昌330006 南昌大学实验动物科学中心江西南昌330006

MST1是死亡受体信号通路Hippo通路的核心成员,其基因表达异常多见于结直肠癌、肝癌、胃癌等肿瘤。为了探讨MST1表达对人结直肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响及其发生机制,采用PolyJet TM介导pEGFP-N1-Mst1及LipofectamineTM2000介导Mst1... 详细信息

MST1是死亡受体信号通路Hippo通路的核心成员,其基因表达异常多见于结直肠癌、肝癌、胃癌等肿瘤。为了探讨MST1表达对人结直肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响及其发生机制,采用PolyJet TM介导pEGFP-N1-Mst1及LipofectamineTM2000介导Mst1特异性-siRNA转染至SW480细胞,分别建立高低表达Mst1的细胞模型。对不同分组的细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的表达进行检测。结果显示,Mst1高表达组细胞增殖抑制、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达显著增高,反之,Mst1低表达组细胞增殖加快,细胞凋亡率及凋亡相关蛋白的表达显著降低。结果提示,Mst1的靶向调控能较好地控制结直肠癌细胞的增殖与凋亡,可作为人结直肠癌防治的新研究靶点。

关键词： Mst1 结直肠癌细胞增殖凋亡基因表达

血培养阳性肉汤直接药敏试验的临床性能评价研究

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中华检验医学杂志 2023年第6期46卷 582-588页

作者：杨硕王启卢洪飞王晓娟张雅薇李曙光孟涵张菲菲王占伟陈宏斌王辉北京大学人民医院检验科北京100044 赣南医学院第一附属医院检验科赣州341001

目的评价血培养阳性肉汤直接药敏试验的临床性能,为优化临床血流感染抗菌药物使用策略提供依据。方法回顾性研究。对北京大学人民医院2017年5月至2021年12月的780份血培养阳性标本,采用血培养阳性肉汤直接纸片扩散法进行直接药敏试验,... 详细信息

目的评价血培养阳性肉汤直接药敏试验的临床性能,为优化临床血流感染抗菌药物使用策略提供依据。方法回顾性研究。对北京大学人民医院2017年5月至2021年12月的780份血培养阳性标本,采用血培养阳性肉汤直接纸片扩散法进行直接药敏试验,结果与实验室常规药敏试验结果对比分析,药敏判断折点参照临床和实验室标准化协会(CLSI)M100 S32文件。结果排除53份2种以上菌株生长后,革兰阴性菌331株(主要为大肠埃希菌139株、肺炎克雷伯菌79株、铜绿假单胞菌35株、鲍曼不动杆菌21株),革兰阳性球菌396株(主要为金黄色葡萄球菌25株、凝固酶阴性葡萄球菌316株、肠球菌属47株)。与实验室常规药敏试验进行比较,全部革兰阴性菌分类一致(CA)率为86.0%(1368/1591)、重大错误(ME)率为8.7%(139/1591)、极重大错误(VME)率为0.5%(8/1591);全部革兰阳性球菌CA%为89.2%(960/1076)、ME%为7.5%(81/1076)、VME%为1.0%(11/1076);大肠埃希菌中亚胺培南的CA%为16/17,美罗培南的CA%为90.1%(109/121),头孢吡肟的CA%为70.8%(85/120);肺炎克雷伯菌中亚胺培南的CA%为10/13,美罗培南的CA%为80.9%(55/68),头孢吡肟的CA%为80.3%(53/66);铜绿假单胞菌中美罗培南的CA%为96.0%(24/25);鲍曼不动杆菌中美罗培南的CA%为16/16;金黄色葡萄球菌中利奈唑胺的CA%为100%(25/25),头孢西丁的CA%为100%(24/24);凝固酶阴性葡萄球菌中利奈唑胺的CA%为98.9%(269/272),头孢西丁的CA%为94.5%(277/293),庆大霉素的CA%为71.6%(194/271);肠球菌属中万古霉素的CA%为91.5%(43/47),氨苄西林的CA%为94.7%(36/38)。结论与常规药敏试验相比,血培养阳性肉汤直接药敏试验在常见革兰阴性菌、革兰阳性球菌中有较高的分类一致率和较低的误差率,能够成为临床血流感染抗菌药物药敏试验的另一种快速的替代方法。

关键词：微生物敏感性试验菌血症纸片扩散法