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柴胡皂甙d对人肝癌细胞BECN1表达及自噬功能的影响

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西安交通大学学报（医学版） 2017年第1期38卷 127-130,150页

作者：肖祎任牡丹卢桂芳赵艳张丹刘亚萍卢新兰和水祥西安交通大学第一附属医院超声科陕西西安710061 西安交通大学第一附属医院消化内科陕西西安710061

目的观察柴胡皂甙d(SSd)对肝癌细胞SMMC-7721生长增殖及自噬作用的影响,初步探讨其可能的机制。方法肝癌SMMC-7721细胞株经不同终浓度SSd(5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、和17.5mg/L)作用24、48、72h,MTT法检测细胞增殖,筛选最适作用浓度... 详细信息

目的观察柴胡皂甙d(SSd)对肝癌细胞SMMC-7721生长增殖及自噬作用的影响,初步探讨其可能的机制。方法肝癌SMMC-7721细胞株经不同终浓度SSd(5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、和17.5mg/L)作用24、48、72h,MTT法检测细胞增殖,筛选最适作用浓度及时间,RT-PCR测定自噬基因BECN1 mRNA表达水平,Western blot检测BECN1蛋白表达水平。结果 SMMC-7721细胞增殖的抑制率随着SSd浓度的增大而增大,浓度达12.5mg/L时,抑制率最高(60%);SSd作用后BECN1在基因和蛋白水平的相对表达量比对照组明显升高(P<0.05),3-甲基腺嘌呤(3-MA)可降低BECN1基因和蛋白的表达,并可降低SSd作用后的BECN1的表达。结论 SSd对肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用呈现浓度和时间的依赖性,基本符合药物剂量-效应关系。SSd可能通过上调自噬基因BECN1的表达诱导自噬性死亡的发生,从而达到抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用。

关键词：柴胡皂甙d 原发性肝癌自噬 BECN1

肿瘤源性外泌体miR-106a调控间皮细胞Smad7表达影响胃癌腹膜转移

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西安交通大学学报（医学版） 2020年第3期41卷 340-346页

作者：朱萌张宁卢新兰和水祥马经伟宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院病理科宁夏银川750004 西安交通大学第一附属医院消化内科陕西西安710061 宁夏医科大学总医院肿瘤外科宁夏银川750004

目的探讨肿瘤源性外泌体(exosome)对间皮细胞Smad7表达的影响以及外泌体miR-106a调控胃癌腹膜转移的可能机制。方法收集人低分化胃癌细胞系AGS来源的外泌体,与人腹膜间皮细胞HMrSV5共培养,CCK8检测HMrSV5细胞增殖,流式细胞术检测HMrSV5... 详细信息

目的探讨肿瘤源性外泌体(exosome)对间皮细胞Smad7表达的影响以及外泌体miR-106a调控胃癌腹膜转移的可能机制。方法收集人低分化胃癌细胞系AGS来源的外泌体,与人腹膜间皮细胞HMrSV5共培养,CCK8检测HMrSV5细胞增殖,流式细胞术检测HMrSV5细胞凋亡,Real-time PCR检测HMrSV5细胞Smad7表达;收集inhibitor-106a处理后的外泌体作用于HMrSV5细胞,CCK8实验观察HMrSV5细胞增殖能力的改变,Real-time PCR检测HMrSV5细胞Smad7的表达改变;在组织标本(人胃癌配对样本和裸鼠移植瘤模型)中分别采用Real-time PCR和免疫组织化学法验证miR-106a与Smad7的负相关关系。结果外泌体抑制HMrSV5细胞增殖,促进其凋亡,并下调细胞内Smad7表达;当给予inhibitor-106a后,外泌体miR-106a表达降低,外泌体原先抑制HMrSV5细胞增殖的作用得到部分恢复(P<0.05),同时伴随Smad7表达的上调(P<0.001);检测人胃癌和癌旁配对样本发现,miR-106a在胃癌中的表达量为3.05±2.04,Smad7的表达量为0.65±0.81。检测裸鼠移植瘤模型发现,Smad7阳性表达见于antagomiR-106a处理后的组织中。结论低分化胃癌细胞来源外泌体通过转运miR-106a影响腹膜间皮细胞的增殖和凋亡平衡,并可能进一步通过与细胞内Smad7的靶向调控关系影响胃癌腹膜转移。

关键词：胃癌腹膜转移外泌体微小RNA Smad同源物7

盐酸青藤碱诱导人肝癌细胞凋亡及其对IL-1β,TNF及C/EBPβ水平的影响

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西安交通大学学报（医学版） 2017年第2期38卷 290-294页

作者：曹瑞琪卢新兰任牡丹张俊卢桂芳张丹赵艳闫红林和水祥西安医学院第一附属医院消化内科陕西西安710077 西安交通大学第一附属医院消化内科陕西西安710061

目的观察盐酸青藤碱对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响,及其IL-1β、TNF-α及C/EBPβ水平的变化,探讨防治肝癌作用的可能机制。方法体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,经不同浓度盐酸青藤碱作用后,采用MTT法检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI双... 详细信息

目的观察盐酸青藤碱对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响,及其IL-1β、TNF-α及C/EBPβ水平的变化,探讨防治肝癌作用的可能机制。方法体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,经不同浓度盐酸青藤碱作用后,采用MTT法检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI双标结合流式细胞术检测细胞的凋亡;ELISA法检测培养液中IL-1β、TNF-α的水平;Western blot技术检测盐酸青藤碱作用于人肝癌细胞后C/EBPβ的表达水平。结果盐酸青藤碱对人肝癌细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量、时间依赖性,不同浓度组之间差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度(0、0.5、1和2mmol/L)的盐酸青藤碱处理肝癌细胞48h后,各组中凋亡细胞率分别为(8.31±0.81)%、(12.62±1.13)%;(27.43±0.97)%;(51.74±0.85)%,实验组与对照组之间差异有统计学意义(P<0.05);同时发现,与阴性对照组比较,盐酸青藤碱作用组SMMC-7721细胞上清液中IL-1β,TNF-α水平均明显下降,而C/EBPβ的表达水平显著增加(P<0.05)。结论盐酸青藤碱可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的细胞增殖,促进其凋亡,此作用可能与其抑制转录因子C/EBPβ,炎症因子如TNF-α、IL-1β的表达,进而通过破坏肿瘤微环境作用有关。

关键词：肝细胞肝癌 IL-1β TNF-α C/EBPβ 盐酸青藤碱凋亡

Hsa_circ_0045943靶向miR-106a对胃癌细胞生物学特性的影响

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西安交通大学学报（医学版） 2022年第4期43卷 509-515页

作者：马经伟张宁朱萌卢新兰张志勇任牡丹宁夏医科大学总医院肿瘤外二科宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院病理科宁夏银川750004 宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004 西安交通大学第一附属医院消化内科陕西西安710061

目的探讨hsa_circ_0045943靶向miR-106a对胃癌细胞生物学特性的影响及机制。方法培养人胃癌细胞MKN-45、AGS和胃黏膜上皮细胞GES-1,real-time PCR检测circ_0045943在胃癌细胞中的表达;构建并转染circ_0045943的过表达和沉默腺病毒载体OE... 详细信息

目的探讨hsa_circ_0045943靶向miR-106a对胃癌细胞生物学特性的影响及机制。方法培养人胃癌细胞MKN-45、AGS和胃黏膜上皮细胞GES-1,real-time PCR检测circ_0045943在胃癌细胞中的表达;构建并转染circ_0045943的过表达和沉默腺病毒载体OE-circRNA和sh-circRNA及阴性对照OE-NC和sh-NC,采用CCK-8法检测AGS细胞在circ_0045943过表达和抑制后的增殖能力变化,TUNEL法检测细胞凋亡,transwell法检测细胞迁移和侵袭,划痕法检测细胞迁移。StarBase数据库筛选circ_0045943和miR-106a的结合位点,real-time PCR检测miR-106a表达;给予OE-circRNA和sh-circRNA,检测circ_0045943表达及miR-106a在circ_0045943过表达和抑制后的表达水平变化。结果Real-time PCR结果显示,与GES-1相比,circ_0045943在胃癌细胞MKN-45、AGS中表达均降低(P均<0.001);CCK-8显示,OE-circRNA组AGS细胞吸光度值低于sh-circRNA组(P24 h<0.01,P48 h<0.001,P72 h<0.001);TUNE结果显示,过表达circ_0045943时AGS细胞凋亡数增多,沉默circ_0045943时凋亡数减少;transwell结果显示,OE-circRNA组AGS细胞迁移和侵袭数量均低于sh-circRNA组(P均<0.001);划痕实验结果显示,OE-circRNA组AGS细胞迁移率最低,sh-circRNA组迁移率高(P<0.001)。Starbase数据库检索circ_0045943和miR-106a具有互补结合序列。Real-time PCR结果显示,miR-106a在胃癌细胞中高表达(P<0.001);OE-circRNA和sh-circRNA处理后circ_0045943和miR-106a表达有统计学差异(P均<0.001),伴随circ_0045943表达的升高和下降,miR-106a表达出现相反变化。结论circ_0045943在胃癌细胞中低表达,促进或抑制circ_0045943的表达可能通过靶向miR-106a而调控胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。

关键词：胃肿瘤 hsa_circ_0045943 miR-106a 增殖凋亡迁移侵袭

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柴胡皂甙D诱导肝癌细胞同时发生凋亡及类凋亡性细胞死亡

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西安交通大学学报（医学版） 2020年第6期41卷 966-971页

作者：卢新兰卢朝辉曹琰张旭王新李雅睿郭丹和水祥西安交通大学第一附属医院消化内科陕西西安710061 西安交通大学基础医学院病原生物学与免疫学系陕西西安710061 渭南市第一人民医院消化内科陕西渭南714000

目的探讨柴胡皂甙D(saikosaponin-d,SSD)诱导人肝癌Hep3B细胞死亡的作用及其可能机制。方法将肝癌Hep3B细胞分为空白对照组、DMSO(溶媒)对照组和3个SSD(5、10、15μmol/L)处理组,MTT法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双标记后采用流式... 详细信息

目的探讨柴胡皂甙D(saikosaponin-d,SSD)诱导人肝癌Hep3B细胞死亡的作用及其可能机制。方法将肝癌Hep3B细胞分为空白对照组、DMSO(溶媒)对照组和3个SSD(5、10、15μmol/L)处理组,MTT法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双标记后采用流式细胞仪定量检测死亡细胞的比例;Hoechst 33258染色后在形态学方面检测细胞凋亡;分光光度法检测半胱天冬酶-3(caspase-3)凋亡蛋白酶活性;倒置显微镜观察细胞形态改变;Western blotting和Real-time PCR技术分别用于检测CHOP(C/EBP homology protein)蛋白和mRNA表达。结果MTT结果显示,SSD浓度和时间依赖性抑制Hep3B细胞生长;流式细胞术结果表明SSD诱导Hep3B细胞死亡;Hoechst 33258染色后在荧光显微镜下观察,发现SSD处理组的细胞核出现凋亡细胞特征性的核染色体凝集、核固缩和碎裂;SSD可明显激活关键的凋亡执行分子caspase-3;通过倒置显微镜观察到SSD处理的细胞内出现大量空泡样改变——类凋亡的发生;总caspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理能够有效抑制caspase-3活性,但仅能部分抑制SSD诱导的细胞死亡,且不能减少SSD诱导的细胞内空泡形成;SSD诱导应激诱导性分子CHOP蛋白和mRNA表达上调,该作用不能被Z-VAD-FMK抑制。结论SSD可诱导人肝癌Hep3B细胞同时发生caspase依赖性凋亡和非caspase依赖性类凋亡,其中CHOP表达升高可能是参与SSD诱导类凋亡的分子机制之一。

关键词：柴胡皂甙D 细胞凋亡类凋亡肝癌 CHOP

LIM激酶1对肝癌细胞增殖与转移的调控作用

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中华肝脏病杂志 2021年第5期29卷 427-432页

作者：郭丹李雅睿陈昳菲王如画张丹朱萌和水祥卢新兰西安交通大学第一附属医院消化内科 710061

目的研究LIM激酶1(LIMK1)在肝癌组织及细胞中的表达情况,以及LIMK1对肝癌细胞增殖与转移的调控作用。方法通过在线数据库starBase v3.0和GEPIA分析LIMK1在肝癌组织和肝脏正常组织中的表达情况,并进行相关生存分析;蛋白质印迹(Western bl... 详细信息

目的研究LIM激酶1(LIMK1)在肝癌组织及细胞中的表达情况,以及LIMK1对肝癌细胞增殖与转移的调控作用。方法通过在线数据库starBase v3.0和GEPIA分析LIMK1在肝癌组织和肝脏正常组织中的表达情况,并进行相关生存分析;蛋白质印迹(Western blot)技术分析LIMK1在肝癌细胞株中的表达情况;用小干扰RNA(siRNA)技术下调LIMK1的表达,瞬时转染肝癌细胞Hep3B和Huh7,通过四甲基偶氮唑盐实验及克隆形成实验观察其对肝癌细胞增殖的调控作用;Transwell实验检测LIMK1的表达下调后肝癌细胞转移能力的变化;下调LIMK1的表达后,Western blot技术检测上皮-间质转化进程中相关指标的改变。对数据进行单因素方差分析。结果LIMK1在肝癌组织中的表达水平明显高于正常肝组织,而且与预后相关(P值均<0.01);进一步研究表明,与永生化的肝细胞L02相比,LIMK1在肝癌细胞株中的表达明显升高(P值均<0.05)。功能相关实验表明,在LIMK1表达下调后,肝癌细胞的增殖与转移能力明显受到抑制(P值均<0.05);同时发现LIMK1参与上皮-间质转化进程。结论LIMK1在肝癌组织及细胞中表达水平明显升高,可调控肝癌细胞的增殖与转移并且参与上皮-间质转化进程。

关键词：肝细胞癌细胞增殖肿瘤转移 LIM激酶1 上皮-间质转化进程

从福尔马林固定-石蜡包埋样本中抽提RNA的方法与可行性

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临床与实验病理学杂志 2013年第3期29卷 301-305页

作者：朱萌张宁任牡丹卢新兰和水祥西安交通大学医学院第一附属医院消化内科西安710061 宁夏医科大学总医院病理科银川750004

目的探讨从福尔马林固定-石蜡包埋(formalin-fixed paraffin-embedded,FFPE)组织中抽提RNA的可行性和有效性。方法收集胃癌和癌旁FFPE样本各41例,10μm厚连续切片3张,采用蛋白酶消化盐析法抽提纯化RNA,检测提取RNA的产量和质量并分析其... 详细信息

目的探讨从福尔马林固定-石蜡包埋(formalin-fixed paraffin-embedded,FFPE)组织中抽提RNA的可行性和有效性。方法收集胃癌和癌旁FFPE样本各41例,10μm厚连续切片3张,采用蛋白酶消化盐析法抽提纯化RNA,检测提取RNA的产量和质量并分析其应用价值。结果 41对胃癌和癌旁FFPE样本中抽提的RNA纯度为1.578～3.175,平均2.022±0.190,其中癌组织为1.578～3.175,平均2.033±0.240,癌旁组织为1.726～2.329,平均2.011±0.123;RNA浓度为(26.8～1 087)ng/μl,平均(267.062±210.435)ng/μl,其中癌组织为(50.5～1 087)ng/μl,平均(336.5±228.927)ng/μl,癌旁组织为(26.8～820)ng/μl,平均(197.62±165.47)ng/μl;琼脂糖凝胶电泳条带弥散分布,约300 bp;胃癌和癌旁RNA的纯度比较P=0.564,尚不能认为胃癌和癌旁FFPE样本中抽提的RNA纯度有不同,但浓度比较P=0.001,可认为胃癌和癌旁FFPE样本中抽提的RNA浓度有所不同,癌组织中较高。结论从FFPE样本中抽提的RNA在不可避免地出现降解的情况下仍然具有很高的纯度和合适的浓度;在确保扩增产物大小处于一定范围内的前提下从FFPE样本中抽提的RNA具有可以满足下游应用的纯度、浓度和完整性;建立从FFPE样本中抽提RNA的方法在各种影响因素符合要求后完全可行。

关键词：福尔马林固定-石蜡包埋 RNA抽提方法

胶囊内镜在不明原因腹痛患者中的临床诊断价值

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西安交通大学学报（医学版） 2023年第3期44卷 448-451页

作者：罗玉梅卢桂芳任牡丹孙焕焕卢新兰任莉和水祥西安交通大学第一附属医院消化内科陕西西安710061

目的本研究旨在评价胶囊内镜在不明原因腹痛患者中的临床诊断价值。方法回顾性研究了2019年1月-2020年11月因腹痛就诊于西安交通大学第一附属医院并行胶囊内镜检查的患者及正常对照人群,评估胶囊内镜在腹痛中的诊断价值,并分析两组人群... 详细信息

目的本研究旨在评价胶囊内镜在不明原因腹痛患者中的临床诊断价值。方法回顾性研究了2019年1月-2020年11月因腹痛就诊于西安交通大学第一附属医院并行胶囊内镜检查的患者及正常对照人群,评估胶囊内镜在腹痛中的诊断价值,并分析两组人群在胶囊内镜检查结果上的差异。结果共有191例不明原因腹痛患者及25例正常对照纳入研究,均正常完成胶囊内镜检查。在腹痛组患者中,腹痛相关的阳性病变检出率为52.87%(101/191),正常组人群阳性率为20%(5/25)(P<0.01)。进一步分析,腹痛组患者中腹痛相关的重要阳性发现(溃疡、糜烂、憩室、寄生虫、肿瘤)检出率为16.23%(31/191);次要阳性结果(息肉、血管畸形、毛细血管扩张、淋巴滤泡增生、淋巴管扩张)中,息肉、血管畸形、毛细血管扩张、淋巴滤泡增生等病变在腹痛组及对照组之间无统计学差异,而小肠淋巴管扩张在腹痛患者组的检出率明显高于正常对照组(23.56%vs.4%,P<0.05,OR=7.089)。结论胶囊内镜对不明原因腹痛病因的确诊有一定的价值,但部分阳性结果与腹痛的关系有待进一步研究。

关键词：胶囊内镜腹痛小肠淋巴管扩张

盐酸青藤碱通过C/EBPβ-COX-2通路抑制LPA诱导的肝癌细胞增殖

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安徽医科大学学报 2021年第5期56卷 786-789页

作者：王新卢朝辉李雅睿郭丹张旭曹琰李皓瑞和水祥卢新兰西安交通大学医学部第一附属医院消化内科西安710061 西安交通大学基础医学院病原生物学与免疫学系西安710061 渭南市第一人民医院消化内科渭南714000 渭南市合阳县中医院内镜中心渭南714000

目的观察溶血磷脂酸(LPA)对肝癌细胞CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)和环氧合酶-2(COX-2)表达及增殖的影响,并进一步探讨抗炎药物盐酸青藤碱(SIN)对其可能的作用。方法采用人肝癌Huh7细胞系,分别用Real-time PCR和Western blot检测基因... 详细信息

目的观察溶血磷脂酸(LPA)对肝癌细胞CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)和环氧合酶-2(COX-2)表达及增殖的影响,并进一步探讨抗炎药物盐酸青藤碱(SIN)对其可能的作用。方法采用人肝癌Huh7细胞系,分别用Real-time PCR和Western blot检测基因mRNA和蛋白表达水平;MTT法检测细胞增殖。结果用10μmol/L LPA处理Huh7细胞不同时间(0~6 h)后,C/EBPβ、COX-2的蛋白和mRNA表达水平呈时间依赖性升高;分别用不同浓度的LPA(0~10μmol/L)处理Huh7细胞6 h后,C/EBPβ、COX-2的蛋白和mRNA表达均呈浓度依赖性升高;SIN浓度依赖性抑制LPA所诱导的C/EBPβ、COX-2表达及细胞增殖。结论LPA通过诱导C/EBPβ-COX-2通路表达促进人肝癌Huh7细胞增殖,而SIN能够通过下调C/EBPβ-COX-2表达抑制LPA所诱导的细胞增殖。

关键词：溶血磷脂酸 CCAAT/增强子结合蛋白β 环氧合酶-2 盐酸青藤碱肝癌