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CEPT技术处理草浆造纸废水的研究

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2004年第B11期32卷 116-120页

作者：冯贵颖王正林呼世斌杨正亮单丽伟西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100 无锡市自来水总公司江苏无锡214031

采用化学强化一级处理(CEPT)技术对草浆造纸废水进行处理。试验结果表明,FeCl3,AlCl3和PAC的混凝效果受pH影响显著,3种混凝剂的最适pH分别为5,4和6。3种混凝剂初投入废水时,化学需氧量(COD)和色度的去除率增幅较大,以后随投加量的增加... 详细信息

采用化学强化一级处理(CEPT)技术对草浆造纸废水进行处理。试验结果表明,FeCl3,AlCl3和PAC的混凝效果受pH影响显著,3种混凝剂的最适pH分别为5,4和6。3种混凝剂初投入废水时,化学需氧量(COD)和色度的去除率增幅较大,以后随投加量的增加其变化不甚明显。每升废水中投加FeCl3,AlCl3和PAM的最适量分别为46,33和40 mL。另外,通过3种混凝剂与有机助凝剂复配的L9(34)正交试验,得出每组复配中4因子影响大小的排序及最优试验条件。最后,根据试验结果给出了以混凝、沉淀为主的废水处理工艺流程。

关键词：比学强化处理草浆造纸废水化学需氧量色度

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核酸酶P1的原核表达、纯化及酶学特性分析

生物工程学报 2012年第11期28卷 1388-1397页

作者：王亚楠魏爱云王美艳卫晓彬张超单丽伟范三红西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学理学院陕西杨凌712100

为了建立一种核酸酶P1(Nuclease P1,NP1)的原核表达纯化系统,首先采用重叠延伸PCR将22段寡核苷酸拼接,获得人工合成的NP1基因。将其克隆至分泌型表达载体pMAL-p4X获得重组质粒pMAL-p4X-NP1,然后将重组载体转化T7 Express和Origami B(DE3... 详细信息

为了建立一种核酸酶P1(Nuclease P1,NP1)的原核表达纯化系统,首先采用重叠延伸PCR将22段寡核苷酸拼接,获得人工合成的NP1基因。将其克隆至分泌型表达载体pMAL-p4X获得重组质粒pMAL-p4X-NP1,然后将重组载体转化T7 Express和Origami B(DE3)菌株诱导表达,利用Amylose亲和层析柱纯化获得重组蛋白,并对其活性、热稳定性和金属离子依赖性进行系统分析。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白MBP-NP1(Maltose binding protein-NP1)在T7 Express和Origami B(DE3)菌株中均可表达,且以可溶性形式存在。活性检测表明Origami B(DE3)菌株中获得的重组蛋白活性高于T7 Express菌株(75.48 U/mg:51.50 U/mg);利用蛋白酶Factor Xa切除MBP标签后,两种重组蛋白的比活力均有提高,分别为258.13 U/mg和139.20 U/mg。重组NP1表现出良好的热稳定性,80℃温浴30 min后重组酶仍具有90%以上的活力。2.0 mmol/L Zn2+对NP1有比较明显的激活作用,相同浓度的Cu2+则对该酶有强烈的抑制作用。该研究实现了NP1在大肠杆菌系统中的功能性表达,为NP1纯酶的制备提供一个替代途径。

关键词：核酸酶P1 原核表达亲和纯化热稳定性

范式酵母Wss1金属蛋白酶的原核表达与理化性质

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2017年第4期45卷 173-179,188页

作者：罗亦欣奚绪光单丽伟范三红西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学理学院陕西杨凌712100

【目的】建立范式酵母(Vanderwaltozyma polyspora)Wss1(VpWss1)金属蛋白酶的原核表达纯化系统,对该蛋白酶的均一性和自切活性进行初步分析,为VpWss1的晶体制备及结构解析奠定基础。【方法】构建VpWss1基因的融合表达载体,将其转化入***... 详细信息

【目的】建立范式酵母(Vanderwaltozyma polyspora)Wss1(VpWss1)金属蛋白酶的原核表达纯化系统,对该蛋白酶的均一性和自切活性进行初步分析,为VpWss1的晶体制备及结构解析奠定基础。【方法】构建VpWss1基因的融合表达载体,将其转化入*** 2566菌株中进行诱导表达,利用Ni-NTA亲和柱和SP阳离子交换柱对融合蛋白进行纯化。通过动态激光散射仪(DLS)和Superdex 200分子筛对该蛋白酶的均一性和聚集状态进行分析,同时与不同类型和长度的DNA底物孵育,分析野生型和突变型SUMO VpWss1蛋白的自切活性。【结果】表达纯化的目的蛋白SUMO VpWss1/SUMO VpWss1^(E96Q)为可溶性蛋白,分子质量约为50ku,纯度>95%。野生型SUMO VpWss1蛋白均一性较差,呈现多种状态,但突变型SUMO VpWss1^(E96Q)蛋白的均一性较好,其主要单一状态(Mass)的含量达到93.2%。在不同类型和长度DNA下,野生型SUMO VpWss1均可发生自切,且随DNA长度的延长呈现出先增强后减弱的趋势,而突变型SUMO VpWss1^(E96Q)的自切活性显著减弱。【结论】成功表达纯化了金属蛋白酶SUMO VpWss1及其突变体SUMO VpWss1^(E96Q),明晰了两者的均一性和自切活性。

关键词： VpWss1金属蛋白酶 DNA-蛋白交联物均一性自切活性

拟南芥Antiquitin基因的原核表达和生物信息学分析

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西北植物学报 2009年第12期29卷 2378-2384页

作者：安瑞魏少华范三红单丽伟西北农林科技大学生命科学学院陕西杨陵712100 陕西省农业分子生物学重点实验室陕西杨陵712100

将拟南芥Antiquitin基因重组到原核表达载体pMAL-c4x和pET41中,在T7 Express菌株中诱导表达,经Amylose和Ni-NTA亲和层析柱纯化获得重组蛋白。SDS-PAGE结果表明:MBP和His-tag融合的拟南芥An-tiquitin主要以可溶性形式存在,表达量分别占... 详细信息

将拟南芥Antiquitin基因重组到原核表达载体pMAL-c4x和pET41中,在T7 Express菌株中诱导表达,经Amylose和Ni-NTA亲和层析柱纯化获得重组蛋白。SDS-PAGE结果表明:MBP和His-tag融合的拟南芥An-tiquitin主要以可溶性形式存在,表达量分别占细胞总蛋白的25.1%和39.4%。以乙醛和NAD+为底物测定融合蛋白活性,结果显示:His-tag融合的Antiquitin具有醛脱氢酶活性,比活力为8.98 U/mg,乙醛的表观Km和Vmax值分别为0.98 mmol/L和12.75 U/mg。序列比对和结构预测结果显示:拟南芥Antiquitin包含该家族蛋白典型的催化结构域、NADH结合结构域和寡聚化结构域,活性中心残基为Gly238、Gly291、Glu391、Phe393。

关键词：拟南芥 Antiquitin 重组表达亲和纯化 NADH

小麦β-胡萝卜素异构酶基因定位克隆及表达分析

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西北植物学报 2016年第7期36卷 1315-1320页

作者：张朋贾笑邓帅单丽伟范三红西北农林科技大学生命科学学院陕西杨陵712100 西北农林科技大学理学院陕西杨陵712100

β-胡萝卜素异构酶（D27）是独脚金内酯（SLs）合成通路的第一个酶。该研究以普通小麦‘中国春’为材料,通过RT-PCR克隆了小麦β-胡萝卜素异构酶对应cDNA（TaD27）,并对其在不同组织和低磷胁迫下的表达进行分析。结果显示：（1）克隆获... 详细信息

β-胡萝卜素异构酶（D27）是独脚金内酯（SLs）合成通路的第一个酶。该研究以普通小麦‘中国春’为材料,通过RT-PCR克隆了小麦β-胡萝卜素异构酶对应cDNA（TaD27）,并对其在不同组织和低磷胁迫下的表达进行分析。结果显示：（1）克隆获得2个高度同源cDNA片段,分别定位于7A、7D染色体的长臂,命名为TaD27-7AL和TaD27-7 DL;序列分析发现,7B染色体长臂上还存在另一个同源基因TaD27-7BL。（2）3个TaD27基因均包含7个外显子,编码区长度分别为828bp（7AL）、840bp（7BL）和843bp（7DL）,编码蛋白的N-端均含有叶绿体转运肽;进化分析表明,植物D27蛋白主要聚集在3个进化枝中,小麦、水稻和玉米等单子叶植物的D27高度同源,聚集在同一进化分枝。（3）组织表达分析表明,TaD27基因在叶、叶鞘和茎中的表达量较高,在幼穗中的表达量相对较低,在根中的表达量最低;低磷胁迫下,TaD27在根中的表达量先下降后升高,胁迫至6~12h时,表达量达到最低,96h时基本恢复至初始状态,而在叶中表达量则是先升高后下降,6h达到峰值,12h基本恢复到初始水平,随后表达量继续下降。

关键词：小麦 D27 染色体定位基因结构表达模式

健康宣教在抽动宁颗粒治疗抽动障碍患儿中的应用

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光明中医 2022年第19期37卷 3589-3592页

作者：单丽伟河南大学第一附属医院儿科河南开封475001

目的探讨给予抽动障碍患儿抽动宁颗粒治疗期间同时强化健康教育的措施及效果。方法选取2018年3月—2020年3月在河南大学第一附属医院接受诊治的抽动障碍患儿100例作为研究对象。根据随机数字表法将纳入患儿进行分组,各组患儿50例。对照... 详细信息

目的探讨给予抽动障碍患儿抽动宁颗粒治疗期间同时强化健康教育的措施及效果。方法选取2018年3月—2020年3月在河南大学第一附属医院接受诊治的抽动障碍患儿100例作为研究对象。根据随机数字表法将纳入患儿进行分组,各组患儿50例。对照组治疗过程中行常规健康宣教,观察组则进一步强化健康宣教,观察家属健康知识知晓情况、患儿服药依从性、药物治疗效果。结果干预后观察组家属健康知识知晓评分相比对照组明显更高,知晓率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);干预后观察组患儿服药、时间、剂量、是否坚持依从性评分及总评分均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后症状总积分低于对照组,临床总有效率相比对照组更高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论抽动宁颗粒治疗期间加强健康宣教,可有效提高抽动障碍患儿家属的健康知识知晓率,提高患儿服药依从性,进而保证药物治疗获得更好效果。

关键词：抽动障碍抽动宁颗粒健康宣教健康知识

絮凝剂产生菌的筛选及产生絮凝剂的影响因素研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2003年第2期31卷 99-104页

作者：王正林冯贵颖岳晓勤单丽伟王月红刘晓荣西北农林科技大学生命科学学院陕西杨陵712100 西安市污水处理厂陕西西安710077 西北农林科技大学资源环境学院陕西杨陵712100

从活性污泥中分离出 6 3株菌株 ,培养、筛选得到具有絮凝活性的菌株 17株 ,其中 2株絮凝活性较高。研究了这 2株菌在不同培养时间的生长情况及其絮凝活性等 ,得出絮凝活性与菌生长量呈正相关关系。通过改变培养基的碳源、氮源、无机盐... 详细信息

从活性污泥中分离出 6 3株菌株 ,培养、筛选得到具有絮凝活性的菌株 17株 ,其中 2株絮凝活性较高。研究了这 2株菌在不同培养时间的生长情况及其絮凝活性等 ,得出絮凝活性与菌生长量呈正相关关系。通过改变培养基的碳源、氮源、无机盐等因素 ,得出 2株絮凝活性较高的菌株产生絮凝剂的最佳条件 :真菌 IV- 2 1,以蔗糖为碳源 ,蛋白胨为氮源 ,Na Cl为无机盐 ,p H为 6 .0 ,培养温度为 30℃时 ,絮凝效果最好 ;细菌 I- 9,以葡萄糖为碳源 ,尿素为氮源 ,K2 HPO4 为无机盐 ,培养基初始 p H偏碱性 ,培养温度为 30℃时 ,絮凝效果最好。

关键词：微生物絮凝剂絮凝菌株筛选絮凝活性影响因素菌生长量培养基活性污泥

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拟南芥基因密码子偏爱性分析

生物化学与生物物理进展 2003年第2期30卷 221-225页

作者：范三红郭蔼光单丽伟胡小平西北农林科技大学

密码子偏爱性对外源基因的表达强度有一定影响 ,特别是编码蛋白质N端 7～ 8个氨基酸残基的密码子 .通过对拟南芥染色体中 2 6 82 7个蛋白质对应的基因密码子进行分析 ,得到了编码氨基酸的 6 1种密码子在拟南芥中的使用频率 ,并与大肠杆... 详细信息

密码子偏爱性对外源基因的表达强度有一定影响 ,特别是编码蛋白质N端 7～ 8个氨基酸残基的密码子 .通过对拟南芥染色体中 2 6 82 7个蛋白质对应的基因密码子进行分析 ,得到了编码氨基酸的 6 1种密码子在拟南芥中的使用频率 ,并与大肠杆菌和哺乳动物进行了比较 ,结果表明三者间的密码子偏爱性有较大差异 .这一分析结果对于动物基因在植物中的表达 ,及植物基因在微生物中的表达具有一定指导意义 .

关键词：拟南芥基因密码子偏爱性植物 XML

小麦种子过氧化物酶基因wp1的克隆及在大肠杆菌中的表达

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2009年第3期37卷 213-218页

作者：单丽伟罗海霞范三红郭蔼光西北农林科技大学理学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学陕西省农业分子重点实验室陕西杨凌712100

【目的】克隆小麦种子过氧化物酶基因wp1,并利用原核系统表达纯化。【方法】通过RT-PCR从小麦未成熟种子中扩增wp1基因cDNA,构建His-tag和MBP融合表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。使用直链淀粉亲和层析获得MBP-WP1融合蛋白,并以ABTS... 详细信息

【目的】克隆小麦种子过氧化物酶基因wp1,并利用原核系统表达纯化。【方法】通过RT-PCR从小麦未成熟种子中扩增wp1基因cDNA,构建His-tag和MBP融合表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。使用直链淀粉亲和层析获得MBP-WP1融合蛋白,并以ABTS为底物检测酶活性。【结果】获得的wp1基因cDNA编码一种358个氨基酸残基的蛋白产物,其序列与大麦BP1相似性高达89%;空间结构预测结果表明,小麦WP1属于第三类过氧化物酶,具有该家族成员典型的血红素和钙离子结合位点;His-Tag融合的WP1主要以包涵体形式存在,而MBP融合的WP1主要以可溶形式存在,表达量分别达到总蛋白的18.2%和34.6%;纯化获得的MBP-WP1融合蛋白可检测到过氧化物酶活性。【结论】使用原核系统可高效表达出可溶性的、具有部分活性的WP1蛋白。

关键词：小麦种子过氧化物酶高GC含量基因克隆基因表达