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检测猪捷申病毒抗体的间接免疫荧光方法的建立与初步应用

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中国预防兽医学报 2011年第1期33卷 70-72页

作者：刘芹防刘杉杉张超范崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为建立检测猪捷申病毒(PTV)抗体的方法,本研究利用PTV-8 Jilin/2003株为抗原,建立了检测PTV抗体的的间接免疫荧光技术(IFA)方法。该方法工作浓度分别是:一抗最适稀释度为1∶10;FITC标记二抗最适稀释度为1∶100;二抗中伊文氏兰最适稀释度... 详细信息

为建立检测猪捷申病毒(PTV)抗体的方法,本研究利用PTV-8 Jilin/2003株为抗原,建立了检测PTV抗体的的间接免疫荧光技术(IFA)方法。该方法工作浓度分别是:一抗最适稀释度为1∶10;FITC标记二抗最适稀释度为1∶100;二抗中伊文氏兰最适稀释度为1∶30 000。敏感性试验、特异性试验表明该抗原板可以检出包含PTV-8型和1型在内的的所有PTV阳性血清,方法敏感、特异。与SN符合率94.0%。用该方法对黑龙江、山东、天津和河南等地的1 500份临床血清样品进行检测,阳性检出率为55.8%,表明我国猪群中PTV的感染已经非常普遍。该方法做为PTV的血清学诊断新技术,为开展PTV分子流行病学调查奠定了基础。

关键词：猪捷申病毒间接免疫荧光抗体检测

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猪捷申病毒的感染、流行及防制

畜牧兽医科技信息 2010年第1期26卷 10-12页

作者：刘芹防张超范崔尚金中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪病研究室哈尔滨150001

猪捷申病由小RNA病毒科捷申病毒属中的猪捷申病毒（PTV）所致，主要引起猪脑脊髓炎、母猪繁殖障碍、肺炎、下痢、心包炎和心肌炎。目前在我国主要和猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）、猪圆环病毒（PCV2）混合感染，主要引起流产、仔猪... 详细信息

猪捷申病由小RNA病毒科捷申病毒属中的猪捷申病毒（PTV）所致，主要引起猪脑脊髓炎、母猪繁殖障碍、肺炎、下痢、心包炎和心肌炎。目前在我国主要和猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）、猪圆环病毒（PCV2）混合感染，主要引起流产、仔猪死亡以及腹泻、肠炎等。

关键词：母猪繁殖障碍小RNA病毒混合感染猪繁殖与呼吸综合症病毒防制猪圆环病毒脑脊髓炎仔猪死亡

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猪细小病毒BQ株灭活疫苗免疫剂量及免疫持续期的初步研究

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中国预防兽医学报 2010年第5期32卷 394-397页

作者：张振梅张超范崔尚金刘芹防祝超姚贵哲中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118

为确定猪细小病毒(PPV)BQ株灭活疫苗(PPV-BQ)的免疫剂量及免疫持续期,本研究与市场上销售的2种PPV灭活疫苗A和B进行了比较。试验分6组,每组免疫3头PPV抗体阴性猪,1组～3组分别免疫BQ株灭活疫苗1mL、2mL、4mL,4组～5组按照说明书免疫A、... 详细信息

为确定猪细小病毒(PPV)BQ株灭活疫苗(PPV-BQ)的免疫剂量及免疫持续期,本研究与市场上销售的2种PPV灭活疫苗A和B进行了比较。试验分6组,每组免疫3头PPV抗体阴性猪,1组～3组分别免疫BQ株灭活疫苗1mL、2mL、4mL,4组～5组按照说明书免疫A、B两种PPV灭活疫苗,6组为阴性对照组(免疫油佐剂)。两周后进行二免,定期检测血清抗体水平。结果表明,注射疫苗组均产生了PPV抗体,都能持续到免疫后24周。免疫不同剂量PPV-BQ各组间抗体水平差异不显著(p>0.05),PPV-BQ与PPV-A抗体水平差异不显著(p>0.05),与PPV-B抗体水平差异极显著(p<0.01),显著优于PPV-B。PPV-BQ1mL免疫剂量即可达到或超过同类产品的免疫效果,是较为理想的PPV灭活疫苗。

关键词：猪细小病毒灭活疫苗免疫剂量免疫期

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新型鸡心包炎—包涵体肝炎病毒的分离及鉴定

中国动物传染病学报 2016年第4期24卷 1-6页

作者：汪凯蔡骁垚叶建强刘红梅张泉刘芹防李泽君陈鸿军中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 安徽农业大学动物科技学院合肥230036 扬州大学兽医学院扬州225009

2015年在江苏省某养鸡场疑似心包炎-包涵体肝炎病死鸡肝脏中分离获得1株病毒,经SPF鸡胚4代纯化,并针对其hexon基因设计特异性引物进行PCR扩增,测序结果表明该分离株属于I群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)血清4型,命名为JS7株。ORF29和f... 详细信息

2015年在江苏省某养鸡场疑似心包炎-包涵体肝炎病死鸡肝脏中分离获得1株病毒,经SPF鸡胚4代纯化,并针对其hexon基因设计特异性引物进行PCR扩增,测序结果表明该分离株属于I群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)血清4型,命名为JS7株。ORF29和fiber2基因测序分析表明,该毒株为最近在国内流行的新型突变株。JS7株以1000 ELD_(50)病毒量肌肉接种21日龄雏鸡,5 d内呈现80%死亡率,剖检可见典型的心包炎、肝炎症状,在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、气管、法氏囊、脑、小肠、盲肠、腺胃、胸腺、胰脏中均能检测到病毒分布;H&E染色结果显示,在组织切片中,肝脏呈现典型的嗜碱性核染色,其他组织脏器也呈现不同程度的病理变化。可见JS7株在雏鸡中具有较强的致病性及广泛的组织嗜性。

关键词：包涵体肝炎禽腺病毒 fiber2 分离鉴定

变异型禽呼肠孤病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国动物传染病学报 2022年

作者：牛世奇武子华马天馨李雪松滕巧泱苑纯秀李泽君刘芹防中国农业科学院上海兽医研究所

随着变异型禽呼肠孤病毒（ARV）不断分离出来，其严重威胁着我国养鸡产业发展，目前尚没有针对变异型ARV的血清学检测方法，且商品化试剂盒（INDEXX）检测不出变异株感染鸡后的阳性血清，因此为了建立能快速检测ARV血清抗体的ELISA检测...

随着变异型禽呼肠孤病毒（ARV）不断分离出来，其严重威胁着我国养鸡产业发展，目前尚没有针对变异型ARV的血清学检测方法，且商品化试剂盒（INDEXX）检测不出变异株感染鸡后的阳性血清，因此为了建立能快速检测ARV血清抗体的ELISA检测方法。本实验利用分离到的ARV变异株在LMH细胞上增殖，对病毒进行灭活浓缩后作为包被抗原，对各种条件进行了优化，建立了检测ARV血清抗体的间接ELISA方法。实验数据显示ARV的最佳包被浓度为1.25 μg/mL，血清最佳稀释倍数为1:800，最佳包被条件为37℃ 2 h后4℃过夜进行孵育，封闭液用1% BSA，血清最佳孵育条件为37℃ 1.5 h，HRP标记羊抗鸡二抗的最佳稀释倍数为1:8000，最佳孵育条件为37℃ 1.5 h，并确定了临界值为0.442。该检测方法的ARV特异性和敏感性较好，批内、批间重复率变异系数最大在5%左右，具有良好的重复性。变异型禽呼肠孤病毒抗体间接ELISA检测方法的建立为临床快速检测变异型ARV的抗体及疫苗免疫效价评估奠定基础。

关键词：

禽呼肠孤病毒变异株σC蛋白的原核表达及其抗体ELISA检测方法的建立

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中国动物传染病学报 2023年

作者：武子华牛世奇马天馨王晨阳潘晟辉苑纯秀滕巧泱李泽君刘芹防中国农业科学院上海兽医研究所

为建立禽呼肠孤病毒（ARV）变异株σC蛋白的抗体间接ELISA检测方法，本研究通过RT-PCR扩增了ARV变异株G4的σC蛋白基因，将其构建至原核表达pET28a(+)载体，经IPTG诱导表达和SDS-PAGE、Western Blotting验证。结果显示，大肠杆菌BL21能... 详细信息

为建立禽呼肠孤病毒（ARV）变异株σC蛋白的抗体间接ELISA检测方法，本研究通过RT-PCR扩增了ARV变异株G4的σC蛋白基因，将其构建至原核表达pET28a(+)载体，经IPTG诱导表达和SDS-PAGE、Western Blotting验证。结果显示，大肠杆菌BL21能够可溶性表达G4-σC蛋白，通过切胶回收对诱导表达的σC蛋白进行纯化，回收的σC蛋白纯净且具有良好抗原性，将其作为包被抗原建立了变异ARV血清抗体的间接ELISA检测方法。检测结果表明，蛋白包被浓度7.81 ng/mL，最佳包被条件 37℃孵育2 h后4℃过夜；血清1600倍稀释最佳反应时间1.5 h；酶标二抗最佳稀释度1：2000，最佳反应时间1 h；阴阳性临界值为0.487；批内变异系数1.52%-6.75%，批间变异系数8.13%-9.50%，说明包被的ELISA板稳定且可重复；血清稀释6400倍检测为阳性，敏感性良好，并且经检测该方法具有良好的特异性和实用性，与试剂盒阳性符合率达91.07%。成功建立的ARV变异株ELISA检测方法为变异ARV的疾病诊断及疫苗研发提供了工具与支持。

关键词： ARV变异株 σC蛋白原核表达 ELISA

流感病毒M1蛋白与M2蛋白相互作用以及其在病毒出芽中的作用

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中国动物传染病学报 2016年第6期24卷 1-5页

作者：侯天龙包旦奇李泽君刘芹防刘焕奇青岛农业大学动物科技学院青岛266109 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 内蒙古农业大学呼和浩特010018

流感病毒为囊膜病毒,以出芽的方式释放病毒。M1蛋白是流感病毒的基质蛋白,在维持病毒颗粒形态与病毒的致病性中发挥重要作用。M2蛋白是离子通道蛋白,在病毒出芽过程中发挥重要作用。研究显示M1蛋白与M2蛋白存在相互作用,但是这种互作在... 详细信息

流感病毒为囊膜病毒,以出芽的方式释放病毒。M1蛋白是流感病毒的基质蛋白,在维持病毒颗粒形态与病毒的致病性中发挥重要作用。M2蛋白是离子通道蛋白,在病毒出芽过程中发挥重要作用。研究显示M1蛋白与M2蛋白存在相互作用,但是这种互作在病毒出芽中的功能尚不清楚。根据M1蛋白的结构,M1蛋白分成N端、C端和中间区域3个区域,与M2蛋白相互作用的区域也不清楚。本文利用双分子荧光互补实验与病毒出芽实验方法研究了M1蛋白与M2蛋白互作的区域及这种互作在病毒出芽中的作用。研究结果显示,M2蛋白通过与M1蛋白的N端1～160个氨基酸相互作用,从而帮助M1蛋白出芽;M1蛋白的1～20氨基酸与140～160氨基酸在决定M1蛋白的稳定性与功能发挥中具有重要作用,缺失这2个氨基酸序列可导致M1蛋白N端1～160个氨基酸蛋白不稳定,并不能与M2蛋白互作。本研究揭示了3H1N1流感病毒M1蛋白与M2蛋白互作功能区域、以及他们之间相互作用在流感病毒出芽中发挥的重要作用。

关键词：流感病毒 M1蛋白 M2蛋白出芽

日粮中添加大豆异黄酮对大鼠抗疲劳能力及生长性能的影响

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日粮中添加大豆异黄酮对大鼠抗疲劳能力及生长性能的影响

流感病毒M1与NA蛋白的相互作用及其在病毒出芽中的作用

动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第三次学术研讨会

作者：高峰江芸刘芹防周光宏韩正康南京农业大学动物科技学院南京师范大学金陵女子学院南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室

本实验旨在在大鼠口粮中添加大豆异黄酮,研究其对大鼠抗疲劳能力及生长性能的影响。选30只刚断乳雄性SD大鼠,预饲一周,随机分为3组,1为基础对照组,饲喂全价饲粮,处死前无应激,2为基础应激对照组,饲喂与1组相同的饲料,处死前进行疲劳应激...

本实验旨在在大鼠口粮中添加大豆异黄酮,研究其对大鼠抗疲劳能力及生长性能的影响。选30只刚断乳雄性SD大鼠,预饲一周,随机分为3组,1为基础对照组,饲喂全价饲粮,处死前无应激,2为基础应激对照组,饲喂与1组相同的饲料,处死前进行疲劳应激(游泳),3为试验组,饲喂添加大豆异黄酮的全价料,处死前进行疲劳应激,实验期28天。结果表明,2,3组的大鼠血清中的GSH-PX的活性显著低于1组(对照组)(P<0.01),然而3组大鼠血清中的GSH-PX的活性又

关键词：

来源： cnki会议评论

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中国动物传染病学报 2017年第5期25卷 1-4页

作者：包旦奇侯天龙李泽君刘芹防张七斤内蒙古农业大学呼和浩特010018 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

流感病毒是一种囊膜病毒,各组分在细胞质膜组装并以出芽形式释放病毒。其中基质蛋白1,即M1蛋白,对病毒的致病性和病毒粒子形态的稳定起重要作用。NA蛋白是流感病毒的表面蛋白之一,可启动病毒的出芽。M1蛋白和NA蛋白间是否存在相互作用,... 详细信息

流感病毒是一种囊膜病毒,各组分在细胞质膜组装并以出芽形式释放病毒。其中基质蛋白1,即M1蛋白,对病毒的致病性和病毒粒子形态的稳定起重要作用。NA蛋白是流感病毒的表面蛋白之一,可启动病毒的出芽。M1蛋白和NA蛋白间是否存在相互作用,以及这种相互作用对病毒出芽的影响还存在未知。本研究利用双分子荧光互补实验证明M1蛋白与NA蛋白存在相互作用。利用体外出芽试验发现单独表达的M1蛋白不能出芽,而单独表达的NA蛋白可以完成出芽;共表达NA与M1蛋白时,M1蛋白可以出芽,表明NA蛋白可以与M1蛋白发生互作并协助M1出芽。本研究探明了M1蛋白和NA蛋白的互作并揭示了这种互作在病毒出芽中的作用。

关键词：流感病毒 M1蛋白 NA蛋白病毒出芽双分子荧光互补