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人PdxK和PNPO基因启动子的鉴定和分析

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人PdxK和PNPO基因启动子的鉴定和分析

作者：刘正青安徽农业大学

学位级别：硕士

维生素B6(Vitamin B6,VB6)是维持机体正常生理代谢活动所必需的重要营养素,其主要的生物活性形式为磷酸吡哆醛(Pyridoxal-5’-phosphate,PLP),参与体内氨基酸、糖原、神经递质、鞘磷脂、血红素和核酸的合成与代谢。吡哆醛激酶(Pyridoxal... 详细信息

维生素B6(Vitamin B6,VB6)是维持机体正常生理代谢活动所必需的重要营养素,其主要的生物活性形式为磷酸吡哆醛(Pyridoxal-5’-phosphate,PLP),参与体内氨基酸、糖原、神经递质、鞘磷脂、血红素和核酸的合成与代谢。吡哆醛激酶(Pyridoxal kinase,Pdx K)和磷酸吡哆醇氧化酶(Pyridoxine 5’-phosphate oxidase,PNPO)是PLP的合成酶,在磷酸酶的共同作用下调节着细胞、血浆和组织内PLP的动态平衡。细胞内PLP的缺乏会引起严重的神经系统疾病,而过量的PLP会对机体产生毒性作用,导致运动和感觉神经出现障碍。因此,细胞内Pdx K和PNPO的活性必须受到严格调控,以满足新合成的缺辅基酶对PLP的动态需求。Pdx K和PNPO的活性调节可以发生在结构水平上,也可以发生在合成水平上。目前,研究人员已从大肠杆菌、植物、昆虫和哺乳动物中鉴定出Pdx K和PNPO,阐明了Pdx K和PNPO的晶体结构、活性调节机制和不同底物下的酶动力学特征。蛋白质是基因表达的产物,转录水平的调控是基因表达过程中重要的环节。启动子控制着基因转录的起始和频率,是深入理解基因转录调控机制的关键。人Pdx K和PNPO基因已被克隆和鉴定,但对其启动子的研究还未见报道。本研究在生物信息学分析的基础上,克隆和构建人Pdx K和PNPO基因不同长度的启动子荧光素酶报告质粒,分析其活性,确定Pdx K和PNPO基因的转录调控区域。进一步对转录调控区内潜在的顺式作用元件进行了缺失突变分析,为深入研究Pdx K和PNPO基因的转录奠定基础。1.生物信息学预测结果显示,人Pdx K和PNPO基因的转录起始位点分别位于翻译起始位点上游198bp和153bp(标记为+1);综合启动子预测软件的结果,确定人Pdx K和PNPO基因的基本启动子区域为-930243和-996421,该区域内没有典型的TATA-box和CAAT-box元件,但是在转录起始位点附近含有多拷贝的GC-box和Cp G岛;2.利用Primer Premier 5.0设计特异性引物,以人基因组DNA为模板,PCR扩增PdxK和PNPO基因5’端缺失截短片段,连接到含萤火虫荧光素酶基因的p GL3-basic载体上,构建不同长度的启动子-荧光素酶重组质粒。双荧光素酶试验结果表明,人Pdx K基因的转录调控区域为-665443,缺失该区域将导致启动子的活性降低66%。人PNPO基因的转录调控区域为-996851和-41285,缺失该区域会导致启动子的活性分别降低25.8%和58.1%。3.通过JASPAR和Gene Regulation数据库分析PdxK基因-665443转录调控区,发现3个潜在的Sp1和1个USF结合位点;而PNPO基因-996851和-41285的转录调控区发现多个Sp1、E2F1和USF结合位点。设计特异性引物扩增顺式作用元件依次缺失的片段,连接到p GL3-basic载体,构建缺失突变重组质粒。双荧光素酶试验结果显示,Pdx K基因转录调控区内的Sp1结合位点(-552542)对维持其高转录活性起着重要作用,缺失会导致启动子活性降低61.1%;而PNPO基因转录调控区内E2F1(-867857)和USF(-6959)结合位点是重要的顺式作用元件,缺失将导致启动子的活性分别降低26.7%和32.5%。

关键词：吡哆醛激酶磷酸吡哆醇氧化酶 VB6 启动子转录调控

EMI滤波器在反激式开关电源中的研究与实现

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电子器件 2006年第2期29卷 462-465页

作者：刘正青曾志刚湖南工程学院电气与信息工程系湖南湘潭411101

电源技术的发展使得体积小、高效能、高可靠性“绿色电源”成为下一代电源的发展趋势。但开关电源由于本身工作特性使得电磁干扰问题相当突出,电源作为一个电子系统中重要的部件,其可靠性决定了整个系统的可靠性。EMI(Electromagnet-icI... 详细信息

电源技术的发展使得体积小、高效能、高可靠性“绿色电源”成为下一代电源的发展趋势。但开关电源由于本身工作特性使得电磁干扰问题相当突出,电源作为一个电子系统中重要的部件,其可靠性决定了整个系统的可靠性。EMI(Electromagnet-icInterference)滤波器是由电感、电容等构成的无源双向多端口网络,能衰减共模和差模干扰,提高电子仪器、计算机和测控系统的抗干扰能力及可靠性。在研究了EMI滤波器原理基础上,提出了EMI滤波器在反激式开关电源中的设计与实现。

关键词：电磁干扰 EMI滤波器共模差模

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高速PCB设计中的串扰分析与控制研究

湖南工程学院学报（自然科学版） 2004年第4期14卷 16-19页

作者：刘正青湖南工程学院电子与信息工程系湖南湘潭411101

在当今快速朝着大规模、小体积、高速度的方向发展的电子设计领域中,体积减小导致电路的布局布线密度变大,同时信号的频率还在提高,使得串扰成为高速、高密度PCB设计中值得关注的问题,就串扰的机理,分析了影响串扰的因素。

关键词：串扰串扰分析串扰控制

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一例早期犬瘟热病的诊断与治疗

畜牧兽医科技信息 2012年第1期28卷 102-103页

作者：刘正青江苏省淮安市淮阴区动物疫病预防控制中心淮安223001

德国牧羊犬，3个月，体重10kg，主诉生病3d，饮食不佳：临床症状表现为精神沉郁，轻微咳嗽，流鼻涕，鼻镜干燥，眼角有少量脓样分泌物。直肠体温39．8℃，肺部听诊有罗音等肺炎症状，触摸脚垫粗糙，变厚变硬。

关键词：犬瘟热病治疗诊断早期症状表现德国牧羊犬分泌物鼻镜

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带电粒子在电场中的运动问题归类例析

高中数理化 2012年第10期 41-42页

作者：刘正青刁小琴江苏省泰兴市第四高级中学

带电粒子在电场中由于受到电场力作用，所以产生加速度，其速度大小和方向都会发生变化，利用电场来改变或控制带电粒子的运动，是在电子仪器设备中常用的方法和手段．对带电粒子在电场中的运动，从受力的角度来看，遵循着牛顿运动定律... 详细信息

带电粒子在电场中由于受到电场力作用，所以产生加速度，其速度大小和方向都会发生变化，利用电场来改变或控制带电粒子的运动，是在电子仪器设备中常用的方法和手段．对带电粒子在电场中的运动，从受力的角度来看，遵循着牛顿运动定律，从做功的角度来看，遵循着能的转化和守恒定律．

关键词：带电粒子运动问题电场归类例析电子仪器设备牛顿运动定律守恒定律加速度

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电子设备中PCB板的抗ESD设计方法研究

湖南工程学院学报（自然科学版） 2003年第4期13卷 30-32,63页

作者：刘正青严明湖南工程学院电气与信息工程系湖南湘潭411101

在电子产品设计中必须遵循抗静电释放的设计规则,从静电释放(ESD)产生的原理、危害以及PCB板的抗ESD设计方法等方面讨论了PCB板设计中遇到的ESD问题及其解决方法.

关键词：静电释放(ESD) PCB设计优化ESD防护

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基于CPLD和VHDL的现代数字系统设计

湖南工程学院学报（自然科学版） 2001年第1期11卷 40-43页

作者：郭照南刘正青湖南工程学院电气系湖南湘潭411101

介绍了以CPLD/FPGA芯片为核心 ,以VHDL设计语言为手段 ,以EDA软件为平台的现代数字系统设计方法和特点 ,并通过一个实例具体介绍了其自顶向下的设计过程。

关键词： CPLD/FPGA VHDL EDA 自顶向下数字系统设计设计方法可编辑逻辑器件

EMI滤波器在反激式开关电源中的研究与实现

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电子质量 2006年第6期 77-79页

作者：刘正青湖南工程学院电气与信息工程系湘潭411101

EMI滤波器是由电感、电容等构成的无源双向多端口网络,能衰减共模和差模干扰,提高电子仪器、计算机和测控系统的抗干扰能力及可靠性。本文在研究了EMI滤波器原理基础上,提出了EMI滤波器在反激式开关电源中的设计与实现。

关键词：电磁干扰 EMI滤波器共模差模

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基于HFC的宽带接入网关键技术

电信快报 2005年第8期 48-50页

作者：刘正青吴玉萍湖南工程学院电子与信息工程系湖南省湘潭市411101 荆门职业技术学院机电系湖北省荆门市443000

随着通信的发展和“信息高速公路”概念的提出,网络运营商越来越倾向集视频、话音、数据于一体的宽带综合业务,如今世界各国相继开发了基于现有铜缆的接入网技术高比特率数字用户环路(HDSL)和不对称数字用户环路(ADSL)、基于光缆接入技... 详细信息

随着通信的发展和“信息高速公路”概念的提出,网络运营商越来越倾向集视频、话音、数据于一体的宽带综合业务,如今世界各国相继开发了基于现有铜缆的接入网技术高比特率数字用户环路(HDSL)和不对称数字用户环路(ADSL)、基于光缆接入技术的光接入网(OAN)、混合光纤同轴电缆(HFC)网络以及无线接入技术等宽带用户接入网技术,文章详细分析了HFC宽带接入网的网络结构及其关键技术。

关键词：宽带接入网 HFC “信息高速公路” 数字用户环路 ADSL