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基于自噬探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎模型大鼠肠黏膜保护的作用机制

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中药新药与临床药理 2024年第6期35卷 814-821页

作者：刘琴周赛男刘杰民蔺晓源湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 贵州省人民医院贵州贵阳550002

目的通过观察健脾益肠散对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠自噬相关分子表达的影响,探讨其肠黏膜保护的作用机制。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、健脾益肠散组和柳氮磺吡啶组。采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)-乙醇溶液复合法建立溃疡性... 详细信息

目的通过观察健脾益肠散对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠自噬相关分子表达的影响,探讨其肠黏膜保护的作用机制。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、健脾益肠散组和柳氮磺吡啶组。采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)-乙醇溶液复合法建立溃疡性结肠炎大鼠模型;模型复制成功后灌胃给药,每日1次,持续14 d。观察大鼠一般状况,计算疾病活动指数(DAI)评分;苏木素-伊红(HE)染色法观察结肠组织病理形态;透射电镜观察结肠上皮细胞自噬情况;免疫荧光染色法、蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测结肠组织肌球蛋白样BCL2结合蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测自噬蛋白5(Atg5)、自噬蛋白7(Atg7)、泛素结合蛋白62(p62)mRNA表达。结果与正常组比较,模型组一般情况较差,DAI评分明显升高(P<0.0001);结肠组织出现明显的上皮细胞损伤,电镜下自噬体的数量明显减少;结肠组织Beclin1、LC3-II/LC3-I蛋白及Atg5、Atg7 mRNA表达明显降低(P<0.0001),p62 mRNA表达明显升高(P<0.0001)。与模型组比较,健脾益肠散组大鼠一般情况明显恢复,DAI评分明显降低(P<0.0001);结肠组织病理损伤有不同程度的改善,电镜下自噬体的数量明显增多;结肠组织Beclin1、LC3-II/LC3-I蛋白及Atg5、Atg7 mRNA表达明显升高(P<0.01,P<0.001,P<0.0001),p62 mRNA表达明显降低(P<0.01)。结论健脾益肠散可通过上调自噬相关分子Beclin1、LC3、Atg5及Atg7的表达,下调p62的表达,增强自噬以达到保护溃疡性结肠炎模型大鼠结肠黏膜损伤的作用。

关键词：健脾益肠散溃疡性结肠炎自噬 Beclin1 LC3 Atg5 Atg7 p62 大鼠

四神丸对腹泻型肠易激综合征大鼠结肠MCT、c-fos表达的影响

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中成药 2024年第5期46卷 1658-1661页

作者：蔺晓源邓娜夏旭婷刘富林刘杰民湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007 湖南中医药大学湖南长沙410208 贵州省人民医院贵州贵阳550002

目的观察四神丸对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠结肠MCT、c-fos表达的影响。方法将40只大鼠随机分为正常组、模型组、匹维溴铵组(15.23 mg/kg)和四神丸组(7.32 mg/kg),每组10只,采用番泻叶灌胃联合避水应激法造模,灌胃给药14 d后,... 详细信息

目的观察四神丸对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠结肠MCT、c-fos表达的影响。方法将40只大鼠随机分为正常组、模型组、匹维溴铵组(15.23 mg/kg)和四神丸组(7.32 mg/kg),每组10只,采用番泻叶灌胃联合避水应激法造模,灌胃给药14 d后,观察一般状态,测定体质量、粪便含水量和AWR评分,ELISA法检测血清MCT、c-fos水平,免疫组织化学法、Western blot法分别检测结肠组织MCT、c-fos蛋白定位及表达,RT-qPCR法检测结肠组织MCT、c-fos mRNA表达。结果与模型组比较,四神丸组和匹维溴铵组大鼠一般状态明显好转,体质量升高(P<0.01),粪便含水量、AWR评分以及血清中MCT、c-fos水平均降低(P<0.05,P<0.01),结肠组织MCT、c-fos蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05,P<0.01);四神丸组结肠组织MCT蛋白表达及c-fos蛋白表达均低于匹维溴铵组(P<0.05)。结论四神丸对IBS-D大鼠内脏敏感的保护机制可能与调节结肠肥大细胞活化指标MCT、c-fos的表达有关。

关键词：四神丸腹泻型肠易激综合征内脏敏感性 MCT c-fos

基于Notch1信号通路的中医药干预溃疡性结肠炎的研究进展

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中国中药杂志 2024年第7期49卷 1741-1748页

作者：宁杭易梦妮黄心雨刘杰民蔺晓源湖南中医药大学湖南长沙410208 贵州省人民医院贵州贵阳550002 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是世界范围内常见的消化道疑难疾病之一,近年来患病率不断上升,已严重威胁到全球人类的生活健康,成为一个亟需解决的难题。有研究证明包括肠干细胞分泌谱系改变、黏液层破坏、细胞间连接紊乱、免疫... 详细信息

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是世界范围内常见的消化道疑难疾病之一,近年来患病率不断上升,已严重威胁到全球人类的生活健康,成为一个亟需解决的难题。有研究证明包括肠干细胞分泌谱系改变、黏液层破坏、细胞间连接紊乱、免疫功能亢进、肠道菌群失衡在内的肠黏膜屏障功能障碍是UC的重要发病因素和分子基础。Notch信号通路是真核生物种系进化中高度保守的信号通路,通过相邻细胞的细胞连接传递信号,影响细胞增殖、分化、发育、迁移、凋亡等一系列过程。因此,Notch信号通路可调节肠干细胞、CD4^(+)T细胞、先天淋巴样细胞(innate lymphoid cells,ILCs)、巨噬细胞(macrophages,Mø)、肠道微生态等,进而影响肠道黏膜化学、物理、免疫、生物黏膜屏障。其作用广泛且独特,区别于作用集中于抗炎、抗氧化应激的信号通路,可以从不同角度阐释中医药的治疗效应。该文综述了近年来国内外有关Notch1信号通路在UC发病机制中的作用以及中医药靶向Notch1信号通路防治UC的相关文献,意在为进一步研究UC的有效防治提供新靶标及理论支持。

关键词：溃疡性结肠炎 Notch1 黏膜屏障中医药研究进展

大黄素通过糖酵解代谢途径抑制胃癌细胞FOXD1基因表达的研究

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中药药理与临床 2024年

作者：刘春宏钱薇张飞朱艳秋刘杰民褚明亮贵州省人民医院消化内镜科贵州中医药大学研究生院贵州中医药大学第一附属医院贵州中医药大学第一附属医院检验科

目的：探讨大黄素通过糖酵解代谢途径抑制胃癌细胞致癌基因叉头框蛋白D1（FOXD1）基因表达的可能机制。方法：以大黄素干预胃癌MGC803细胞，运用CCK8实验、划痕实验、Transwell小室实验检测细胞生物学特性的变化，葡萄糖和乳酸试剂盒检... 详细信息

目的：探讨大黄素通过糖酵解代谢途径抑制胃癌细胞致癌基因叉头框蛋白D1（FOXD1）基因表达的可能机制。方法：以大黄素干预胃癌MGC803细胞，运用CCK8实验、划痕实验、Transwell小室实验检测细胞生物学特性的变化，葡萄糖和乳酸试剂盒检测细胞代谢的变化。基于基因表达水平值的交互式分析平台（GEPIA）数据库分析己糖激酶Ⅱ（HK2）、乳酸脱氢酶A（LDHA）和FOXD1在胃癌组织中的表达情况。蛋白免疫印迹（Western blot）法检测大黄素对HK2、LDHA和FOXD1蛋白的表达影响。添加丙酮酸，检测是否可逆转大黄素的抑制作用。结果：与空白对照组比较，大黄素组胃癌MGC803细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显降低（P<0.05），葡萄糖的消耗及乳酸的生成明显降低（P<0.05）。GEPIA数据库分析显示与正常胃组织比较，胃癌组织中HK2、LDHA和FOXD1的表达明显上调（P<0.05）。与空白对照组比较，大黄素组对胃癌MGC803细胞的HK2 和FOXD1蛋白表达明显下调（P<0.05）；与大黄素组比较，大黄素+丙酮酸组对胃癌MGC803细胞的HK2和FOXD1蛋白表达明显上调（P<0.05）。结论：大黄素可能通过糖酵解代谢途径，抑制胃癌细胞致癌基因FOXD1的表达，达到抗肿瘤的作用。

关键词：大黄素胃癌糖酵解代谢叉头框蛋白D1 己糖激酶Ⅱ 乳酸脱氢酶A

贵州省典型铅锌矿区和贵阳市居民汞暴露以及健康风险评估

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生态学杂志 2024年第3期43卷 869-877页

作者：王达卫孔林徐晓航韩佳良刘杰民仇广乐中国科学院地球化学研究所环境地球化学国家重点实验室贵阳550081 中国科学院大学北京100049 贵州医科大学公共卫生学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵阳550025 贵州省人民医院贵阳550025

选择贵州省赫章县铅锌矿区和贵阳市居民区,采集了居民日用食物(大米、土豆、鸡蛋、蔬菜、鱼肉、猪肉)、饮用水和农作物根际土壤,共计503个,测定了总汞和甲基汞的含量,并结合蒙特卡洛模拟评估了居民无机汞和甲基汞暴露风险。结果如下:(1... 详细信息

选择贵州省赫章县铅锌矿区和贵阳市居民区,采集了居民日用食物(大米、土豆、鸡蛋、蔬菜、鱼肉、猪肉)、饮用水和农作物根际土壤,共计503个,测定了总汞和甲基汞的含量,并结合蒙特卡洛模拟评估了居民无机汞和甲基汞暴露风险。结果如下:(1)铅锌矿区的样品总汞和甲基汞的范围分别为0.11~39和0.028~1.7 ng·g^(-1),城市居民区的样品总汞和甲基汞的范围分别为0.07~18和0.01~7.7 ng·g^(-1),除蔬菜外的样品总汞含量低于我国食品限量标准,蔬菜总汞含量分别有14.7%(铅锌矿区)和17.7%(城市居民区)的样品超过我国《食品安全国家标准》(GB 2672—2017)规定的10 ng·g^(-1)。(2)两个地区无机汞日暴露量无差异(城市居民区:0.031μg·kg^(-1)·d-1,铅锌矿区:0.032μg·kg^(-1)·d-1),但城市居民区的甲基汞日暴露量(0.006μg·kg^(-1)·d-1)高出铅锌矿区(0.0032μg·kg^(-1)·d-1)近1倍。(3)两个地区居民无机汞和甲基汞的平均日暴露量分别低于联合国粮农组织/世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会(JECFA)推荐的人体安全无机汞的临时容许每周摄入量(PTWI)4μg·kg^(-1)·week-1和美国环境保护署(USEPA)推荐的甲基汞参考剂量(RfD)0.1μg·kg^(-1)·d-1,暴露风险指数均小于1,表明处于健康安全水平。

关键词：铅锌矿区贵阳市居民区无机汞甲基汞风险评估

健脾益肠散对TNF-α诱导的树突状细胞NLRP3炎症小体信号通路表达的影响

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中国中医药信息杂志 2024年

作者：蔺晓源陈龙彪罗沛文周赛男刘杰民湖南中医药大学第一附属医院贵州省人民医院

目的观察健脾益肠散对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的树突状细胞（DCs）NLRP3炎症小体信号通路相关蛋白表达的影响，进一步探讨其治疗溃疡性结肠炎的作用机制。方法分离培养C57BL/6小鼠原代DCs，分为正常组、模型组、阴性对照组、阳... 详细信息

目的观察健脾益肠散对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的树突状细胞（DCs）NLRP3炎症小体信号通路相关蛋白表达的影响，进一步探讨其治疗溃疡性结肠炎的作用机制。方法分离培养C57BL/6小鼠原代DCs，分为正常组、模型组、阴性对照组、阳性药组和中药组，TNF-α诱导构建DCs炎症微环境模型，各组分别予不同处理后，采用CCK-8法检测细胞增殖能力，免疫荧光、Western blot分别检测DCs中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白表达，Western blot、RT-PCR分别检测DCs中白细胞介素（IL）-1β、IL-18蛋白和m RNA表达。结果与正常组比较，模型组DCs增殖能力显著下降（P<0.01），细胞NLRP3、ASC、Caspase-1阳性表达显著升高，NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18、IL-1β蛋白表达及IL-18、IL-1β mRNA表达显著升高（P<0.01）；与模型组和阴性对照组比较，阳性药组和中药组DCs增殖能力显著上升（P<0.01），细胞NLRP3、ASC、Caspase-1阳性表达显著降低（P<0.01）,NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达显著降低（P<0.05,P<0.01）,IL-1β、IL-18 mRNA表达显著降低（P<0.01），且中药组细胞增殖能力、Caspase-1阳性表达、IL-18 mRNA表达均明显高于阳性药组（P<0.05）,IL-1β mRNA表达明显低于阳性药组（P<0.05）。结论健脾益肠散能抑制TNF-α诱导的DCs炎性反应，其作用机制可能与调控NLRP3炎症小体信号通路NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18、IL-1β表达有关。

关键词：健脾益肠散溃疡性结肠炎树突状细胞 NLRP3炎症小体

基于X-CT扫描技术的泡沫轻质土孔结构分析

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北京工业大学学报 2024年 1228-1236页

作者：刘杰民李辉张宝华刘波郝宝锋姜能栋济青高速铁路有限公司山东大学土建与水利学院中铁九局集团第一建设有限公司山东大学齐鲁交通学院

为研究泡沫轻质土内部孔隙三维空间分布状态和形态特征,采用X射线计算断层扫描技术(X-ray computed tomography,X-CT)获取了3种湿密度等级泡沫轻质土孔结构,并进行定量分析。基于混合高斯模型(Gaussian mixture model),通过解卷积确定... 详细信息

为研究泡沫轻质土内部孔隙三维空间分布状态和形态特征,采用X射线计算断层扫描技术(X-ray computed tomography,X-CT)获取了3种湿密度等级泡沫轻质土孔结构,并进行定量分析。基于混合高斯模型(Gaussian mixture model),通过解卷积确定孔相和固相灰度阈值,根据阈值将灰度图像划分为孔和固体两相材料,定量表征孔隙率、孔径、球度和孔隙形态等孔结构特征参数。将孔结构特征参数与强度进行关联分析,结果表明:随着泡沫轻质土的湿密度增大,孔径分布更加均匀,平均孔径降低,球状孔隙增多,导致泡沫轻质土应力分布更加均匀,抵抗外部荷载能力更强,整体强度更高。

关键词：泡沫轻质土 X射线断层扫描技术孔隙率孔径球度孔隙形态

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肿瘤细胞氨基酸代谢的研究进展

中国当代医药 2024年第6期31卷 189-192页

作者：钟旺佶褚明亮刘杰民贵州中医药大学研究生院贵州贵阳550025 贵州中医药大学第一附属医院检验科贵州贵阳550001 贵州省人民医院消化内镜科贵州贵阳550002

能量代谢重编程是肿瘤细胞最显著的特征之一,其赋予了肿瘤细胞快速增殖的能力,主要体现在“三大营养物质”,即葡萄糖、氨基酸及脂肪酸的代谢异常。其中,氨基酸作为细胞内部仅次于葡萄糖的营养和能量来源,是蛋白质合成的底物。丰富的氨... 详细信息

能量代谢重编程是肿瘤细胞最显著的特征之一,其赋予了肿瘤细胞快速增殖的能力,主要体现在“三大营养物质”,即葡萄糖、氨基酸及脂肪酸的代谢异常。其中,氨基酸作为细胞内部仅次于葡萄糖的营养和能量来源,是蛋白质合成的底物。丰富的氨基酸供应为肿瘤的快速增殖提供了持续的动力。氨基酸异常代谢过程中的部分关键物质影响着肿瘤细胞的发生发展,参与了癌基因激活、免疫逃逸和相关蛋白表达等多个方面,在临床中也被作为肿瘤诊断和治疗的标志物之一,而肿瘤细胞对不同氨基酸的依赖偏重各有不同,在特定氨基酸缺乏的肿瘤中尤为明显。因此,特定氨基酸缺失或对肿瘤的发生、发展和治疗、预后具有重要影响。本文围绕近年氨基酸代谢重编程在肿瘤发生发展中的进展作一综述,以期为抗癌的后续科学研究及肿瘤临床诊断、治疗与预后提供新思路。

关键词：肿瘤氨基酸代谢研究进展综述

大黄素抑制胃癌AGS细胞YAP1、FOXD1基因表达及相关机制

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实用医学杂志 2024年第1期40卷 59-64,71页

作者：顾天刘春宏张飞钱薇朱艳秋褚明亮刘杰民贵州中医药大学第一附属医院检验科贵阳550001 贵州中医药大学第一附属医院研究生院贵阳550002 贵州省人民医院内镜中心贵阳550002

目的探讨大黄素抑制胃癌AGS细胞增殖、迁移、侵袭及癌基因YAP1、FOXD1基因表达的可能机制。方法培养胃正常上皮细胞GES-1与胃癌细胞AGS,使用不同浓度大黄素进行干预。通过CCK8实验、划痕实验、Transwell小室实验验证大黄素处理后AGS细... 详细信息

目的探讨大黄素抑制胃癌AGS细胞增殖、迁移、侵袭及癌基因YAP1、FOXD1基因表达的可能机制。方法培养胃正常上皮细胞GES-1与胃癌细胞AGS,使用不同浓度大黄素进行干预。通过CCK8实验、划痕实验、Transwell小室实验验证大黄素处理后AGS细胞的生物学表型变化。使用在线软件分析TCGA数据库中糖酵解代谢关键酶HK2和癌基因YAP1、FOXD1在胃癌组织及正常组织中的表达情况。印迹法验证大黄素对AGS中糖酵解代谢关键酶HK2和癌基因YAP1、FOXD1蛋白的影响变化。添加外源性糖酵解代谢产物丙酮酸,增强糖酵解代谢活性,验证癌基因YAP1和FOXD1的相应变化。结果胃正常上皮细胞GES-1与胃癌细胞AGS在不同浓度大黄素干预后,发现GES-1的大黄素半数致死量浓度明显高于AGS(P<0.05)。进一步的CCK8增殖实验、划痕实验、Transwell小室实验结果均发现大黄素可以明显抑制AGS的增殖、迁移、侵袭等肿瘤生物学能力(P<0.05)。TCGA生物信息数据库分析发现糖酵解途径关键酶HK2和癌基因YAP1、FOXD1在胃癌组织中的表达明显高于胃正常组织的表达(P<0.05)。大黄素可以明显抑制糖酵解关键酶HK2和癌基因YAP1、FOXD1的蛋白表达(P<0.05)。补充外源性糖酵解代谢产物丙酮酸后,癌基因YAP1、FOXD1的蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论大黄素对胃癌AGS细胞有显著的药理抑制作用,可以明显抑制其肿瘤生物学表型。大黄素在显著抑制糖酵解代谢关键酶HK2的同时,也显著抑制癌基因YAP1、FOXD1的蛋白表达。当添加外源性丙酮酸增强糖酵解代谢通路后,癌基因YAP1、FOXD1的蛋白表达显著升高。以上提示YAP1、FOXD1和糖酵解代谢的密切相关性,大黄素可能通过抑制胃癌AGS细胞糖酵解代谢,抑制癌基因YAP1和FOXD1。

关键词：大黄素胃癌 HK2 YAP1 FOXD1 糖酵解代谢