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斑节对虾miR-145与miR-454介导的TRIAP1应答哈维弧菌胁迫的作用机制研究

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斑节对虾miR-145与miR-454介导的TRIAP1应答哈维弧菌胁迫的作用机...

作者：刘恩瑞上海海洋大学

学位级别：硕士

斑节对虾(Penaeus monodon)具有口味出众、营养丰富、生长发育快的特点,在东南亚和我国南方是最具商业价值的物种之一。近年来因为环境压力越来越大,导致感染斑节对虾的情况越来越严重,致使斑节对虾的养殖产业受到严重打击。其中哈维弧... 详细信息

斑节对虾(Penaeus monodon)具有口味出众、营养丰富、生长发育快的特点,在东南亚和我国南方是最具商业价值的物种之一。近年来因为环境压力越来越大,导致感染斑节对虾的情况越来越严重,致使斑节对虾的养殖产业受到严重打击。其中哈维弧菌(Vibrio harveyi)是一种广泛存在于海洋环境中的可以感染甲壳类、鱼类、贝类的致病菌,易引发突眼、慢性皮肤溃疡、败血症等动物病症。研究发现致病菌感染可引起斑节对虾发生细胞凋亡。miRNA是调控基因表达的重要因子,在细胞凋亡调控中发挥重要作用。肿瘤蛋白p53调控的凋亡抑制因子(TRIAP1)可通过抑制细胞凋亡参与体内免疫反应,其基因表达受miRNA调控。本研究通过RACE技术克隆了斑节对虾TRIAP1基因cDNA全长;确定了斑节对虾TRIAP1基因(PmTRIAP1)在不同组织中的表达模式;对靶向调控PmTRIAP1的miRNA进行了筛选,并利用双荧光素酶报告实验验证其作用靶位点;利用荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western Blot)等方法研究了斑节对虾在哈维弧菌应激情况下血细胞中miR-454、miR-145对PmTRIAP1基因表达调控的影响;初步掌握了由哈维弧菌应激所产生的细胞凋亡与miR-454、miR-145及PmTRIAP1之间的关系,具体研究内容如下:(1)斑节对虾中的PmTRIAP1的全长cDNA序列共2522 bp,包含11 bp的5’-UTR,2289 bp的3’-UTR,222 bp的ORF,共编码73个氨基酸,分子量为8.6kDa,理论等电点(PI)为4.9。PmTRIAP1在所有检测的组织中都有表达,在血细胞中的表达最高,是卵巢中的18.58倍,其次在肝胰腺和肠中表达较高,分别是卵巢的4.37倍和3.49倍,在胸神经中表达量最低。序列比对结果显示,斑节对虾中的TRIAP1与柑橘木虱(Diaphorina citri)TRIAP1的相似度最高为61%,在进化上保守性较高。(2)miRNA的筛选:为了找出与PmTRIAP1-3’UTR结合的miRNA,使用Mireap、Miranda、Targetscan软件共同进行预测得到16种潜在调控PmTRIAP1的miRNA。当斑节对虾受到哈维弧菌刺激时,miR-145、miR-454的相对表达量在6 h、24 h、48 h、72 h均有显著上调。PmTRIAP1的相对表达量在24、48、72h显著下降,miRNA的表达与PmTRIAP1的表达呈负相关。双荧光素酶报告结果显示,miR-454可以调控PmTRIAP1基因3’UTR的荧光素(luciferase)表达(p=0.0047);而在结合位点突变后未检测到luciferase活性显著变化。miR-145可以调控带有PmTRIAP1 3’UTR的luciferase的表达;而在结合位点突变后未检测到luciferase活性显著变化。miR-145和miR-454可以调控带有PmTRIAP1 3’UTR的luciferase的表达(3)miRNA与PmTRIAP1调控关系研究:分别注射miR-145、miR-454的类似物过表达miRNA和注射miR-145、miR-454的抑制物沉默miRNA。过表达miR-145后可在24 h和48 h降低斑节对虾血细胞中PmTRIAP1的相对表达量,分别下降0.82和0.54倍;过表达miR-454后可在24 h降低斑节对虾血细胞中PmTRIAP1的相对表达量;沉默miR-145可在24 h和48 h增加斑节对虾血细胞中PmTRIAP1的相对表达量,沉默miR-454可在24 h和48 h增加斑节对虾血细胞中PmTRIAP1的相对表达量。通过TUNEL法检测细胞凋亡发现:在过表达miR-145和miR-454的第24 h斑节对虾血细胞的细胞凋亡相较对照组增多;在沉默miR-145和miR-454后的第24 h斑节对虾血细胞的细胞凋亡相较对照组减少。miR-145和miR-454可通过调节PmTRIAP1的表达调控斑节对虾血细胞的细胞凋亡。(4)哈维弧菌刺激下,miR-454、miR-145对PmTRIAP1和细胞凋亡的影响:斑节对虾受到哈维弧菌刺激后,使用siRNA干扰PmTRIAP1基因的表达可显著降低斑节对虾血细胞中TRIAP1蛋白的表达量;过表达斑节对虾miR-145(注射miR-145-agomir)6 h、24 h、48 h后其血细胞中PmTRIAP1的相对表达量显著下调;过表达斑节对虾miR-454(注射miR-454-agomir)6 h、24 h后其血细胞中PmTRIAP1的相对表达量显著下调;沉默斑节对虾miR-145(注射miR-145-antagomir)6 h、24 h、48 h后其

关键词：细胞凋亡相关基因 miR-145 miR-454 哈维弧菌斑节对虾

基于遗传算法KMV模型的我国商业银行信用风险分析

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基于遗传算法KMV模型的我国商业银行信用风险分析

作者：刘恩瑞贵州财经大学

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我国商业银行主要利润来源——存贷利差,由于利率市场化的完成而逐渐缩小,同时产业转型升级加速,部分行业中企业资金链偏紧,特别是在2015年产能过剩和低端制造业偿债能力下降、违约风险急增,使得银行资产质量下降。银行由于其经营的的... 详细信息

我国商业银行主要利润来源——存贷利差,由于利率市场化的完成而逐渐缩小,同时产业转型升级加速,部分行业中企业资金链偏紧,特别是在2015年产能过剩和低端制造业偿债能力下降、违约风险急增,使得银行资产质量下降。银行由于其经营的的特殊性,决定了信用风险是银行所面临的所有风险中最主要的风险。通常认为我国商业银行所面临信用风险主要集中在贷款业务上,但随着中间业务的发展,信用风险也蕴藏在商业银行资金、应收款项、表外信用等各项业务中。截止到2016年年末,据中国银行业监督管理委员会网站公布的数据,我国商业银行不良贷款率达1.74%,同时这一指标在过去几年中持续上升。2008年的金融危机表明,商业银行的信用风险会对社会各方面产生巨大的影响,同时也对一个国家的宏观经济决策、未来发展造成影响。随着我国国内产业结构进一步调整优化,商业银行将面临更大的信用风险,所以能否及时判断和管控银行的信用风险对于我国金融业甚至经济发展而言都是至关重要的。本文首先对我国商业银行信用风险现状进行了多角度、综合的分析,然后对传统、现代信用风险度量模型进行了对比,在此基础上选择KMV模型,同时为提高KMV模型测算的准确性,引入人工智能模型——遗传算法(GA)。其次,选取16家上市商业银行2012-2017年中期、年度财务数据以及股票交易数据进行实证研究。将16家银行总体违约距离与我国实际经济发展情况结合分析,验证了GA-KMV模型测算的结果与经济发展走势较为吻合,说明模型具有较好的适用性;与KMV模型测算的结果相对比GA-KMV模型的绝对误差均小于10%,说明模型预测能力比较理想;对违约距离与预期违约率做了拟合性分析说明模型拟合较好;对违约距离敏感性检验分析表明,股权价值、违约点和股权价值波动率这三个变量共同影响银行的违约距离,其中股权价值波动率对违约距离的影响最大。最后,根据实证结果提出相关建议。

关键词：信用风险 KMV模型遗传算法上市商业银行

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空客不断得势,波音正在受挫

国际技术经济导报 2000年第3期 6-11页

作者：刘恩瑞

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第三方支付对货币乘数的影响

商场现代化 2016年第27期 145-146页

作者：刘恩瑞贵州财经大学

联网技术的迅速发展以及电子设备在生活中的广泛运用,第三方支付平台因此而出现,它的出现改变了人们传统的生活、消费模式。而又由于其对资金运用的简单、方便、快捷,改变了传统货币形态以及支付方式。本文以狭义货币乘数为研究点,分析... 详细信息

联网技术的迅速发展以及电子设备在生活中的广泛运用,第三方支付平台因此而出现,它的出现改变了人们传统的生活、消费模式。而又由于其对资金运用的简单、方便、快捷,改变了传统货币形态以及支付方式。本文以狭义货币乘数为研究点,分析第三方支付创造的电子货币对货币乘数的影响。研究表明,第三方支付机构间接地通过货币创造机制增大了狭义货币乘数。

关键词：第三方支付电子货币货币乘数

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发展中国家加强对基因资源的控制

国际技术经济导报 2000年第2期 12-16页

作者：刘恩瑞

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高技术推动的美国农业革命

国际技术经济导报 2001年第1期 6-9页

作者：刘恩瑞

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多措并举莱芜加强外派监事会建设

山东国资 2018年第7期 60-62页

作者：刘恩瑞莱芜市国资委监事会

监事会是公司治理结构的组成部分,《中华人民共和国公司法》赋予了监事会在有限责任公司和股份有限公司中的法定地位及法定职权,国有企业的监事会在《公司法》中有着特别的规定。目前,我国国有企业监事会是依照《中华人民共和国企业国... 详细信息

监事会是公司治理结构的组成部分,《中华人民共和国公司法》赋予了监事会在有限责任公司和股份有限公司中的法定地位及法定职权,国有企业的监事会在《公司法》中有着特别的规定。目前,我国国有企业监事会是依照《中华人民共和国企业国有资产法》及国务院《国有企业监事会暂行条例》来运行,实行外派制度,监事会主席和专职监事由政府和国资监管部门分别任命,组成外派监事会。

关键词：外派监事会市国资委董事长总经理负责人莱芜市企业监事会

斑节对虾TRIAP1基因的克隆、表达分析以及调控其表达的miRNAs的筛选

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南方水产科学 2019年第4期15卷 88-98页

作者：刘恩瑞赵超王鹏飞范嗣刚闫路路邱丽华中国水产科学研究院南海水产研究所农业农村部南海渔业资源开发利用重点实验室广东广州510300 上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306 农业农村部水生动物基因组学重点实验室北京100141

凋亡抑制因子1 (tumor protein p53 regulated inhibitor of apoptosis 1, TRIAP1)可以通过抑制细胞凋亡参与生物体内应激反应。为探究TRIAP1 基因及调控其表达的miRNAs 在斑节对虾(Penaeus monodon)应对哈氏弧菌(Vibrio harveyi)刺激时的表达调控情况,该研究通过RACE 技术获得了斑节对虾TRIAP1 基因(PmTRIAP1)cDNA 全长序列,并利用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)技术,对PmTRIAP1 在斑节对虾不同组织中的表达分布模式,以及哈氏弧菌刺激下PmTRIAP1 与相关miRNAs 的表达关联情况进行了探究。结果显示,PmTRIAP1cDNA 全长2 522 bp,包括11 bp 的5'非编码区(UTR)、2 289 bp 的3'UTR 和222 bp 的开放阅读框(ORF),共编码73 个氨基酸。PmTRIAP1 基因在各组织中均有表达,其中在血细胞中表达量最高;哈氏弧菌刺激下,PmTRIAP1表达量显著降低,而Pm-miR-145-3p 和Pm-miR-454-3p 表达量显著升高,表明PmTRIAP1 和Pm-miR-145-3p、Pm-miR-454-3p 的表达量呈负相关关系;双荧光素酶报告实验结果显示,Pm-miR-145-3p 和Pm-miR-454-3p 可通过结合PmTRIAP1 3'UTR 降低荧光素酶活性,表明Pm-miR-145-3p 和Pm-miR-454-3p 均可靶向调控PmTRIAP1 的表达。

关键词：斑节对虾 TRIAP1 Pm-miR-145-3p Pm-miR-454-3p 哈氏弧菌

中国结直肠癌骨转移多学科综合治疗专家共识(2020版)

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中华肿瘤杂志 2020年第6期42卷 433-437页

作者：无于胜吉王锡山黄镜武爱文刘正许宋锋刘恩瑞王鲁强黄海洋中国医师协会结直肠肿瘤专业委员会国家癌症中心国家肿瘤临床医学研究中心中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院骨与软组织肿瘤科100021 国家癌症中心国家肿瘤临床医学研究中心中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院结直肠外科100021 中国医学科学院肿瘤医院内科北京大学肿瘤医院胃肠肿瘤中心中国医学科学院肿瘤医院结直肠外科中国医学科学院肿瘤医院骨与软组织肿瘤科

随着结直肠癌患者生存时间的延长,影像学技术的进步,结直肠癌骨转移的发生率逐渐上升。在控制原发灶的同时,骨转移的早期诊断与治疗不容忽视。目前,关于结直肠癌骨转移可供参考的证据非常有限,在此背景下,中国医师协会结直肠肿瘤专业委... 详细信息

随着结直肠癌患者生存时间的延长,影像学技术的进步,结直肠癌骨转移的发生率逐渐上升。在控制原发灶的同时,骨转移的早期诊断与治疗不容忽视。目前,关于结直肠癌骨转移可供参考的证据非常有限,在此背景下,中国医师协会结直肠肿瘤专业委员会针对结直肠癌骨转移的临床特点、诊断治疗、随访监测等方面的问题和争议,组织多学科专家综合国内外相关研究,结合临床实践,经过讨论和投票,最终形成中国结直肠癌骨转移多学科综合治疗专家共识(2020版),旨在为临床医师处理结直肠癌骨转移提供更为详细的多学科治疗策略。

关键词：结直肠肿瘤骨转移共识多学科