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双氢青蒿素对胃癌SGC-7901细胞凋亡和侵袭能力的影响

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吉林医药学院学报 2024年第1期45卷 5-9页

作者：刘师兵董长松朱文赫于洋林松高金昌吉林医药学院科研实验室吉林吉林132013 吉林医药学院附属四六五医院消化内科吉林吉林132013

目的初步探讨检测双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)对胃癌SGC-7901细胞凋亡和侵袭能力作用的可能机制。方法以胃癌SGC-7901细胞为研究对象,实验分为空白组和DHA低(40μmol/L)、中(80μmol/L)、高剂量组(120μmol/L)。CCK-8检测法检... 详细信息

目的初步探讨检测双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)对胃癌SGC-7901细胞凋亡和侵袭能力作用的可能机制。方法以胃癌SGC-7901细胞为研究对象,实验分为空白组和DHA低(40μmol/L)、中(80μmol/L)、高剂量组(120μmol/L)。CCK-8检测法检测不同浓度DHA对SGC-7901细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色法观察各组细胞形态变化;采用流式细胞术检测不同给药组的细胞凋亡情况;Transwell法检测不同浓度DHA对SGC-7901细胞侵袭能力的影响;Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3和VEGF蛋白表达。结果CCK-8检测法显示,与空白组相比,DHA各浓度组的细胞增殖受到明显抑制,且随着药物浓度的增加呈现剂量依赖性;Hoechst 33258染色结果显示,DHA各浓度组的SGC-7901细胞核内出现明显固缩,且着色增强;流式细胞术结果显示,给药组凋亡细胞数量明显增多,且与给药浓度成正比;Transwell检测结果显示,DHA各浓度组中穿透基质膜的细胞数量明显下降;Western blot检测结果显示,与空白组相比,DHA各浓度组Bax和cleaved caspase-3蛋白表达显著上升(P<0.05),Bcl-2、VEGF蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论DHA可能通过调控Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3表达,抑制SGC-7901细胞增殖并诱导细胞凋亡,通过调控VEGF表达降低SGC-7901细胞的侵袭能力。

关键词：双氢青蒿素胃癌凋亡侵袭能力

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衣霉素对顺铂诱导人宫颈癌细胞凋亡的影响

解放军医学杂志 2013年第4期38卷 283-287页

作者：徐冶李质馨曹慧玲于洋刘师兵王晓军吉林医药学院组织胚胎学教研室 132013 医学科研实验室

目的探讨内质网应激在顺铂诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用。方法取人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象,实验分为衣霉素(5mg/L)组、顺铂(6mg/L)组、衣霉素(5mg/L)与顺铂(6mg/L)联合给药组、阴性对照组,处理12h后采用MTT法观察细胞生长情况,... 详细信息

目的探讨内质网应激在顺铂诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用。方法取人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象,实验分为衣霉素(5mg/L)组、顺铂(6mg/L)组、衣霉素(5mg/L)与顺铂(6mg/L)联合给药组、阴性对照组,处理12h后采用MTT法观察细胞生长情况,Hoechst荧光染色检测细胞核形态的变化,免疫印迹法检测凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-4活化情况,间接免疫荧光法检测蛋白质二硫键异构酶(PDI)、磷酸化H2AX组蛋白(γ-H2AX)的表达变化。结果 MTT法检测显示衣霉素组、顺铂组、联合给药组和阴性对照组的细胞增殖抑制率分别为2.65%±2.71%、19.60%±4.34%、44.69%±7.07%、0,除衣霉素组与对照组外其余各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。Hoechst染色显示,阴性对照组荧光较弱且均匀,顺铂组和联合给药组部分HeLa细胞核明显变小并呈现致密强荧光,部分细胞核呈碎块状,联合给药组核碎裂细胞比例(44.5%±5.1%)显著高于顺铂组(22.7%±3.9%,P<0.05)。免疫印迹法检测显示,顺铂组裂解Caspase-3、Caspase-4蛋白表达明显高于对照组和衣霉素组,但显著低于联合给药组(P<0.05)。间接免疫荧光法检测显示:顺铂组胞质内无PDI表达,荧光较弱;衣霉素组、顺铂组PDI蛋白均呈颗粒状,分布于核周,荧光较强;联合给药组大部分细胞内PDI呈现明显强荧光,荧光强度明显高于衣霉素组和顺铂组。阴性对照组和衣霉素组细胞核内未见γ-H2AX表达,而顺铂组与联合给药组均可见部分细胞核内出现明显绿色荧光,但两组无明显差异。结论衣霉素可增加内质网应激水平,促进顺铂诱导HeLa细胞发生凋亡。

关键词：宫颈肿瘤衣霉素顺铂内质网应激细胞凋亡

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苦参总黄酮对D-半乳糖致衰老小鼠的影响

中国中药杂志 2015年第21期40卷 4240-4244页

作者：范红艳顾饶胜任旷王艳春姚祯沈楠刘师兵吉林医药学院基础医学院吉林吉林132013 哈尔滨医科大学药理教研室黑龙江哈尔滨150081

该文研究了苦参总黄酮(flavonoids from Sophora flavescens)对D-半乳糖致衰老小鼠的影响,并探讨其作用机制。将60只小鼠随机分为对照组、模型组、脑复康组(阳性对照组)、苦参总黄酮低、中、高剂量组。采用D-半乳糖(160 mg·kg-1)颈背... 详细信息

该文研究了苦参总黄酮(flavonoids from Sophora flavescens)对D-半乳糖致衰老小鼠的影响,并探讨其作用机制。将60只小鼠随机分为对照组、模型组、脑复康组(阳性对照组)、苦参总黄酮低、中、高剂量组。采用D-半乳糖(160 mg·kg-1)颈背部皮下注射连续30 d建立亚急性衰老小鼠模型,造模同时,苦参总黄酮低、中、高剂量组分别灌胃苦参总黄酮(150,300,600mg·kg-1),连续30 d。采用跳台试验、避暗试验来检测小鼠的学习记忆能力,检测脑组织中丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量与超氧化物歧化酶(SOD)、单胺氧化酶-B(MAO-B)、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性,检测血清中乳酸脱氢酶(LDH)的活性,并且HE染色,光镜下观察脑海马齿状回区组织结构的变化。结果发现,与模型组比较,苦参总黄酮中、高剂量组及脑复康组能明显延长避暗潜伏期、跳台潜伏期,苦参总黄酮各剂量组及脑复康组均减少避暗错误次数,苦参总黄酮高剂量组及脑复康组可减少跳台错误次数(P<0.05或P<0.01)。苦参总黄酮中、高剂量组及脑复康组能提高衰老小鼠脑组织中SOD和Na+-K+-ATP酶活性,降低脑组织中MAO-B的活性、MDA及TNF-α含量,降低衰老小鼠血清中LDH活性(P<0.05或P<0.01)。苦参总黄酮各剂量组及脑复康组脑组织中Ca2+-ATP酶活性增强,同模型组比较有统计学差异(P<0.05或P<0.01)。病理可见模型组海马齿状回细胞数目减少,细胞排列稀疏,细胞形态欠完整,胞浆稀少,胞核与胞浆界限欠清晰,细胞核深染,固缩不规则形,核仁不明显。苦参总黄酮组及脑复康组海马组织形态较模型组改善。可见,苦参总黄酮能改善D-半乳糖致衰老小鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与通过减少TNF-α含量而增强抗氧化作用,从而稳定细胞膜、降低脑内MAO-B活性有关。

关键词：苦参总黄酮 D-半乳糖抗氧化 MAO-B TNF-α

胞浆内的Ca^(2+)浓度变化在五味子乙素诱导HepG2细胞凋亡过程中的作用

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毒理学杂志 2017年第1期31卷 14-19,24页

作者：董长松刘师兵徐冶吉林医药学院附属四六五医院吉林吉林132013 吉林医药学院科技处吉林医药学院基础医学院

目的探讨五味子乙素在诱导HepG2细胞凋亡过程中Ca^(2+)浓度变化的作用和可能机制。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,分为空白对照组、2-APB(2-Aminoethyl diphenylborinate)组、五味子乙素组和联合用药组(五味子乙素与2-APB合加),加药48和7... 详细信息

目的探讨五味子乙素在诱导HepG2细胞凋亡过程中Ca^(2+)浓度变化的作用和可能机制。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,分为空白对照组、2-APB(2-Aminoethyl diphenylborinate)组、五味子乙素组和联合用药组(五味子乙素与2-APB合加),加药48和72 h后,MTT检测细胞存活率,激光共聚焦显微镜、免疫印迹法检测内质网相关蛋白Grp78、Cleaved caspase-4和CHOP蛋白含量,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。结果与单加五味子乙素组相比,联合用药组的细胞生存率明显升高(P<0.05),Ca^(2+)浓度、Grp78、Cleaved caspase-4、CHOP蛋白的含量明显降低(P<0.05)。结论五味子乙素能诱导人肝癌HepG2细胞内质网应激,导致细胞内Ca^(2+)浓度显著升高,并进一步诱导细胞凋亡。

关键词：五味子乙素 HepG2细胞 Ca2+ 内质网应激

ABT-737通过线粒体凋亡途径增加HepG2细胞对顺铂的敏感性

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中国老年学杂志 2018年第6期38卷 1442-1445页

作者：刘师兵于洋谢奇赵国艳徐冶吉林医药学院科技处河南省人民医院病理科吉林医药学院科研实验室吉林吉林132013 吉林医药学院基础医学院

目的探讨ABT-737通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡的机制。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法确定给药浓度,分为对照组、顺铂组、ABT737组和联合用药组,加药后常规培养24 h,用激光共聚焦显微镜观察细胞核的形... 详细信息

目的探讨ABT-737通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡的机制。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法确定给药浓度,分为对照组、顺铂组、ABT737组和联合用药组,加药后常规培养24 h,用激光共聚焦显微镜观察细胞核的形态变化、DCFH-DA染色检测细胞内RBE ROS水平、JC-1染色观察线粒体膜电位变化、流式细胞术检测细胞凋亡。结果顺铂抑制了HepG2细胞活力并能促进其凋亡,当加入无毒剂量的ABT-737后,从细胞核的形态改变、RBE ROS水平和JC-1检测的数据来看,联合用药组对HepG2细胞的毒性更为明显,细胞凋亡率明显上升。结论 ABT-737能够通过线粒体凋亡途径增加HepG2细胞对顺铂的敏感性。

关键词：线粒体 ABT-737 HepG2细胞顺铂

2.45 GHz微波非热效应诱导人宫颈癌细胞凋亡及其机制

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中华放射医学与防护杂志 2014年第12期34卷 908-911页

作者：于洋曹慧玲徐冶刘师兵 132013吉林吉林医药学院

目的观察2.45 GHz微波非热效应对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响,探讨不同照射功率与凋亡诱导效应之间是否存在量效关系及其机制.方法 HeLa细胞随机分为对照组、假照射组和低、中、高（10、15和20 mW/cm2）3个功率照射组,2.45 GHz微波照射... 详细信息

目的观察2.45 GHz微波非热效应对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响,探讨不同照射功率与凋亡诱导效应之间是否存在量效关系及其机制.方法 HeLa细胞随机分为对照组、假照射组和低、中、高（10、15和20 mW/cm2）3个功率照射组,2.45 GHz微波照射10 ***法检测HeLa细胞存活率;激光共聚焦显微镜观察各组HeLa细胞核形态变化,并统计异常细胞核比率;流式细胞仪检测细胞周期并分析sub-G1期细胞所占比例;免疫印迹法观察Bax、Bcl-2和Caspase-3凋亡相关蛋白表达变化并以B-肌动蛋白为内参比较各组蛋白表达灰度变化.结果 MTT结果显示,对照组与假照射组、低功率照射组之间细胞存活率无明显变化,中、高功率照射组HeLa细胞存活率较假照射组明显降低（t=-16.47、-14.23,P＜0.05）;激光共聚焦观察经Hoechst单染的细胞核显示,低、中、高功率照射组异常细胞核比率与假照射组相比明显增高（t=9.37、11.25、8.47,P＜0.05）,且高功率组细胞核异常比率高于低、中功率组（t=15.32、10.25,P＜0.05）;流式细胞术结果显示低、中、高功率照射组sub-G1期细胞所占比例均比假照射组升高（t=15.24、22.31、10.69,P＜0.05）;免疫组织化学结果显示Bcl-2的表达随着微波照射功率的增大而减弱,Bax和Caspase-3的表达随着照射功率的增强而加强.结论 2.45 GHz微波可诱导HeLa细胞凋亡,且与其功率密度增加呈正相关.

关键词：微波非热效应 HeLa细胞细胞凋亡

杨梅素通过促进DRP1依赖性线粒体分裂诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡

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吉林大学学报（医学版） 2018年第5期44卷 903-907页

作者：于洋徐路刘师兵李松岩徐冶吉林医药学院基础医学院肿瘤靶向治疗与转化医学实验室吉林吉林132013

目的:观察杨梅素与mdivi-1分别或联合作用于人卵巢癌SKOV3细胞后细胞凋亡和线粒体分裂情况,探讨杨梅素诱导SKOV3细胞凋亡的机制。方法:体外培养SKOV3细胞,随机分为对照组、mdivi-1组、杨梅素组和联合给药组,mdivi-1组以50μmol·L^(-1) ... 详细信息

目的:观察杨梅素与mdivi-1分别或联合作用于人卵巢癌SKOV3细胞后细胞凋亡和线粒体分裂情况,探讨杨梅素诱导SKOV3细胞凋亡的机制。方法:体外培养SKOV3细胞,随机分为对照组、mdivi-1组、杨梅素组和联合给药组,mdivi-1组以50μmol·L^(-1) mdivi-1作用1h后更换普通细胞培养液继续培养23h,杨梅素组以50g·L^(-1)杨梅素作用24h,联合给药组以50μmol·L^(-1) mdivi-1作用1h后更换含50g·L^(-1)杨梅素的细胞培养液继续培养23h。MTT法检测各组细胞存活率;Muse~凋亡检测试剂盒检测各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blotting)观察细胞色素C(Cyt C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)、动力相关蛋白1(DRP1)和分裂蛋白1(FIS1)表达水平;MitoTracker~ Red荧光探针特异性标记线粒体观察各组细胞线粒体分裂情况。结果:与对照组比较,杨梅素组细胞存活率明显降低(P<0.05);与杨梅素组比较,联合给药组细胞存活率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,杨梅素组细胞凋亡率升高(P<0.05);与杨梅素组比较,联合用药组细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与对照组比较,杨梅素组细胞中Cyt C和caspase3蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与杨梅素组比较,联合用药组Cyt C和caspase3蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与对照组比较,杨梅素组细胞线粒体分裂程度增强;与杨梅素组比较,联合用药组线粒体分裂程度下降。与对照组比较,杨梅素组细胞中DRP1和FIS1蛋白表达水平升高(P<0.05);与杨梅素组比较,联合用药组DRP1和FIS1蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:杨梅素可通过促进DRP1依赖性线粒体分裂诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡。

关键词：杨梅素 mdivi-1 动力相关蛋白1 线粒体分裂细胞凋亡 SKOV3细胞

白藜芦醇通过Sirt3-SOD2-ROS途径诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡

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中国病理生理杂志 2020年第2期36卷 229-233页

作者：李松岩于洋刘师兵徐路孙奇徐冶吉林医药学院基础医学院吉林吉林132013 吉林医药学院科研实验室吉林吉林132013

目的:观察白藜芦醇是否通过Sirt3-SOD2-ROS途径诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡。方法:体外培养SKOV3细胞,分别加入2.5、5、10、20、40和80 mg/L白藜芦醇,作用24 h后,MTT法检测白藜芦醇对SKOV3细胞活力的影响。将SKOV3细胞随机分为空白对照... 详细信息

目的:观察白藜芦醇是否通过Sirt3-SOD2-ROS途径诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡。方法:体外培养SKOV3细胞,分别加入2.5、5、10、20、40和80 mg/L白藜芦醇,作用24 h后,MTT法检测白藜芦醇对SKOV3细胞活力的影响。将SKOV3细胞随机分为空白对照组、白藜芦醇(10 mg/L)组、白藜芦醇(20 mg/L)组和白藜芦醇(40 mg/L)组,分别处理24 h后,用Hoechst 33342染色,应用激光共聚焦显微镜观察细胞核变化;用荧光探针标记细胞内活性氧(ROS),应用激光共聚焦显微镜观察细胞内ROS变化;采用Western blot检测沉默交配型信息调节因子2同源蛋白3(Sirt3)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达。结果:MTT结果显示,白藜芦醇(2.5、5、10、20、40和80 mg/L)作用SKOV3细胞24 h,SKOV3细胞活力显著降低,IC 50为(47.6±0.1)mg/L。应用激光共聚焦显微镜观察,与空白对照组相比,白藜芦醇各浓度组SKOV3细胞核内出现明显固缩,且着色增强现象。ROS荧光标记显示,与空白对照组相比,白藜芦醇各浓度组中ROS红色荧光数量显著减少。Western blot检测结果表明,与空白对照组相比,白藜芦醇各浓度组Sirt3、SOD2、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达显著上升(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:白藜芦醇可以通过调控Sirt3-SOD2-ROS途径诱导SKOV3细胞凋亡。

关键词：白藜芦醇卵巢癌 Sirt3-SOD2-ROS信号通路细胞凋亡

杨梅素对人卵巢癌SKOV3细胞自噬的诱导作用及线粒体分裂的促进作用

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吉林大学学报（医学版） 2017年第4期43卷 685-689,I0002页

作者：于洋刘师兵李松岩徐路徐冶吉林医药学院医学科研实验室吉林吉林132013 吉林医药学院基础医学院组织与胚胎学教研室吉林吉林132010

目的:观察杨梅素作用于人卵巢癌SKOV3细胞后细胞自噬的发生和线粒体分裂程度,探讨杨梅素对其线粒体分裂的影响及自噬的诱导作用。方法:体外培养SKOV3细胞,杨梅素给药剂量按0、20、40和60g·L^(-1)分为对照组和低、中、高剂量杨梅素组,... 详细信息

目的:观察杨梅素作用于人卵巢癌SKOV3细胞后细胞自噬的发生和线粒体分裂程度,探讨杨梅素对其线粒体分裂的影响及自噬的诱导作用。方法:体外培养SKOV3细胞,杨梅素给药剂量按0、20、40和60g·L^(-1)分为对照组和低、中、高剂量杨梅素组,均作用12h。流式细胞术检测各组细胞线粒体膜电位变化,MitoTracker Red荧光探针特异性标记线粒体观察其形态,Western blotting法检测动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)和自噬相关蛋白LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ蛋白表达水平,采用间接免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3表达强度。结果:与对照组比较,各剂量杨梅素组细胞线粒体膜电位下降比例明显升高(t=3.27,t=6.85,t=5.49,P<0.05)。与对照组比较,各剂量杨梅素组细胞中线粒体数目增加,且线粒体砂砾感增强。与对照组比较,各剂量杨梅素组细胞中Drp1(t=4.35,t=3.28,t=6.17,P<0.05)和Fis1(t=8.32,t=6.74,t=9.27,P<0.05)蛋白表达水平明显升高,中和高剂量杨梅素组细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高(t=3.28,t=4.21,P<0.05)。间接免疫荧光检测,与对照组比较,随着杨梅素给药剂量增加,LC3表达强度逐渐增强。结论:杨梅素能够诱导人卵巢癌SKOV3细胞发生自噬,并对线粒体动分裂有明显促进作用。

关键词：杨梅素 SKOV3细胞自噬线粒体分裂