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鸡IL-2 mRNA SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

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中国兽医学报 2013年第7期33卷 1073-1077页

作者：王衡刘博奇宁章勇华南农业大学兽医学院广东广州510642 广东海大畜牧兽医研究院有限公司广东广州510630

根据GenBank提供的ChIL-2参考序列设计了特异性引物,并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,以二者标准质粒为模板,应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术,并采用双标准曲线相对定量方法建立了ChIL-2mRNA荧光定量RT-PCR检测方法。结... 详细信息

根据GenBank提供的ChIL-2参考序列设计了特异性引物,并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,以二者标准质粒为模板,应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术,并采用双标准曲线相对定量方法建立了ChIL-2mRNA荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法该可以在3h左右对低拷贝量的模板(200copy/μL)进行检测,同时该检测方法具有很好的特异性和重复性。雏鸡免疫试验IL-2mRNA检测结果显示,该方法可有效应用于鸡体内IL-2在核酸水平的检测,并为今后IL-2相对定量的检测研究提供参考依据。

关键词：鸡白细胞介素2 时荧光定量RT—PCR 检测方法双标准曲线

2021-2022年我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因变异分析

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畜牧兽医学报 2023年第9期54卷 3812-3823页

作者：王志远刘博奇许志颖徐思佳邢家宝张桂红王衡孙彦阔华南农业大学兽医学院广东省临床重大疾病综合防控重点实验室广州510642 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心茂名525000 华南农业大学国家生猪种业工程技术研究中心广州510642 广东海大畜牧兽医研究院有限公司广州511400

为深入了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行和遗传变异情况,2021—2022年,本课题组在我国13个省份约50个养殖场收集了117份临床疑似猪繁殖与呼吸综合征患猪样品,针对PRRS... 详细信息

为深入了解我国猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的流行和遗传变异情况,2021—2022年,本课题组在我国13个省份约50个养殖场收集了117份临床疑似猪繁殖与呼吸综合征患猪样品,针对PRRSV的ORF5基因进行了遗传变异分析。通过实时荧光定量PCR鉴定PRRSV阳性样品和基因型,应用RT-PCR扩增PRRSV ORF5和ORF7基因,将阳性样本进行测序并开展系统发育学分群和GP5氨基酸突变分析。结果显示,共检出PRRSV-2阳性样品48份(总体阳性率约41%),经测序共获取38条ORF5序列和10条ORF7序列。所有ORF5序列间核苷酸相似性为77.1%~99.8%,ORF7序列间核苷酸相似性为83.3%~98.7%。系统发育学分群显示,谱系1占比60%(29/48,28株NADC30-like毒株,1株NADC34-like毒株),谱系3占比25%(12/48),谱系5.1占比5%(2/48),谱系8.7占比10%(5/48)。GP5氨基酸分析表明,信号肽(aa 1—26)、中和表位C(aa 52—61)及潜在的N-糖基化位点(aa 32—35、aa 44、aa 51)3个区域氨基酸存在显著变异。研究结果表明:多个谱系PRRSV同时在我国流行,谱系1已替代谱系8.7成为主要流行谱系,并分布于我国大多数省份;谱系3仅次于谱系1,主要在华南局部地区流行;谱系8.7毒株检出率较低。需要注意的是,在广东省惠州市检出1株NADC34-like毒株,说明该毒株可能已在华南地区潜在流行。近几年来,PRRSV在我国的流行日趋复杂,谱系1毒株的广泛流行增加了PRRSV的遗传多样性。本研究结果将为制定PRRSV防控策略提供参考。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 系统发育学分析 NADC30 NADC34

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猪氨肽酶N多抗血清的制备及活性分析

中国兽医科学 2011年第8期41卷 821-825页

作者：王衡刘博奇任晓峰宁章勇华南农业大学兽医学院广东广州510642 广州中医药大学科技产业园有限公司新南方药物安全性评价中心广东广州510540 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为进一步研究猪氨肽酶N(pAPN)介导TGEV与靶细胞相互作用的机制,将编码猪氨肽酶N成熟肽基因(105～2889bp)克隆至原核表达载体pET-30a,将重组质粒pET-30a-pAPN转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后进行SDS-PAGE分析,利用蛋白切胶纯化技术对... 详细信息

为进一步研究猪氨肽酶N(pAPN)介导TGEV与靶细胞相互作用的机制,将编码猪氨肽酶N成熟肽基因(105～2889bp)克隆至原核表达载体pET-30a,将重组质粒pET-30a-pAPN转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后进行SDS-PAGE分析,利用蛋白切胶纯化技术对目的蛋白进行纯化,制备其多抗血清,并通过琼扩试验、Western-blot分析、病毒抑制试验及体外瞬时转染试验分析该多抗血清的生物活性。结果,获得了大小为112ku的目的蛋白,多抗血清效价为1∶32,该血清在低浓度时仍具有抑制病毒的活性。结果证实,制备的多抗血清具有较高的抗体效价、较强的特异性及良好的生物活性。

关键词：猪氨肽酶N(pAPN) 多抗血清活性检测

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模拟氮沉降对云冷杉红松林土壤呼吸的影响

林业科学研究 2012年第6期25卷 767-772页

作者：刘博奇牟长城邢亚娟王庆贵东北林业大学生态研究中心黑龙江哈尔滨150026 黑龙江大学农业资源与环境学院黑龙江哈尔滨150080

2011年5月至2011年10月在黑龙江省小兴安岭云冷杉红松林内进行模拟氮沉降试验,使用便携式土壤CO2通量观测仪LI-8100测定不同氮沉降浓度CK(0)、TL(50 ***-2.a-1)、TM(100 ***-2.a-1)和TH(150 ***-2.a-1)对土壤呼吸的影响。结果表明,氮沉... 详细信息

2011年5月至2011年10月在黑龙江省小兴安岭云冷杉红松林内进行模拟氮沉降试验,使用便携式土壤CO2通量观测仪LI-8100测定不同氮沉降浓度CK(0)、TL(50 ***-2.a-1)、TM(100 ***-2.a-1)和TH(150 ***-2.a-1)对土壤呼吸的影响。结果表明,氮沉降未显著改变土壤呼吸的日变化和季节性变化规律;对比CK,TL、TM和TH处理,分别使土壤日呼吸速率提高了13.72%、23.22%和5.12%,年呼吸速率提高了13.98%、18.26%和1.12%;土壤呼吸与温度呈极显著的指数相关(P<0.001),与土壤湿度无显著相关;CK,TL、TM和TH处理下,土壤呼吸温度敏感系数Q10分别为4.77、5.71、6.62和5.49,氮沉降处理提高了小兴安岭云冷杉红松林的土壤呼吸速率和温度敏感性。

关键词：氮沉降土壤呼吸 Q10值云冷杉红松林

雏鸡免疫鸡IL-15基因质粒和新城疫病毒F基因质粒后免疫细胞数量的动态变化

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畜牧与兽医 2009年第5期41卷 88-91页

作者：王衡郭明明刘博奇李广兴东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

鸡白细胞介素15(ChIL-15)是一种新发现的细胞因子,在禽类疫苗领域中具有很大的研究潜力。本试验以新城疫病毒(NDV)F基因质粒为参照对象,借助酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)染色法及甲基绿-派络宁染色法(PMG)对ChIL-15基因质粒与NDV F基因质粒... 详细信息

鸡白细胞介素15(ChIL-15)是一种新发现的细胞因子,在禽类疫苗领域中具有很大的研究潜力。本试验以新城疫病毒(NDV)F基因质粒为参照对象,借助酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)染色法及甲基绿-派络宁染色法(PMG)对ChIL-15基因质粒与NDV F基因质粒联合免疫组(I组)以及NDV F基因质粒单独免疫组(F组)试验鸡免疫细胞数量进行检测,以研究ChIL-15是否具有免疫增强作用。试验结果表明:不同质粒免疫后,28日龄时I组鸡免疫器官中的ANAE+T细胞数量及PMG+浆细胞数量均高于F组试验鸡,说明ChIL-15对于T淋巴细胞及浆细胞具有增强作用。

关键词：鸡白细胞介素15 ANAE PMG 细胞因子

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工程机械施工设备管理与维护

中文科技期刊数据库（引文版）工程技术 2020年第11期 169-170页

作者：刘博奇首创爱华(天津)市政环境工程有限公司天津300380

机械设备的管理和维护是公路建设管理的重要组成部分,也是保证道路施工安全和质量的关键因素。施工管理的理念提高了公路施工设备的管理和维护,降低了机械故障的发生率,提高了工程效率,缩短了工期,从而提高了公路建设的经济效益。笔者... 详细信息

机械设备的管理和维护是公路建设管理的重要组成部分,也是保证道路施工安全和质量的关键因素。施工管理的理念提高了公路施工设备的管理和维护,降低了机械故障的发生率,提高了工程效率,缩短了工期,从而提高了公路建设的经济效益。笔者结合自身多年设备管理工作经验,本次主要针对工程机械施工设备管理与维护展开深入论述,所得文献与同行业管理人员共同分享,望对行业的发展起到促进作用。

关键词：公路建设机械设备管理维护

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银保业务的问题对策研究--基于保险科技

老字号品牌营销 2021年第9期 103-104页

作者：刘博奇河北经贸大学金融学院石家庄050061

我国的银行保险业务兴起于20世纪80年代并不断发展完善,目前我国银行保险的发展还正处于起步阶段,采用的合作模式也是比较简单的分销协议模式。随着全球经济一体化与大数据等技术驱动的保险科技产品的不断出现,我国的银行保险业务逐渐... 详细信息

我国的银行保险业务兴起于20世纪80年代并不断发展完善,目前我国银行保险的发展还正处于起步阶段,采用的合作模式也是比较简单的分销协议模式。随着全球经济一体化与大数据等技术驱动的保险科技产品的不断出现,我国的银行保险业务逐渐开始暴露诸多问题。本文针对当下我国银行保险存在的主要问题进行分析,并基于保险科技的角度提出相关的建议对策。

关键词：保险科技银行保险问题与对策

小兴安岭典型温带森林土壤呼吸对强降雨的响应

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北京林业大学学报 2016年第4期38卷 77-85页

作者：刘博奇牟长城邢亚娟韩士杰姜思领王庆贵东北林业大学生态研究中心黑龙江大学农业资源与环境学院中国科学院沈阳应用生态研究所

森林土壤呼吸是全球碳循环的重要组成部分,其对降雨格局的变化如何响应,是当前全球变化研究中的热点问题。本研究以小兴安岭地区原始温带森林(云冷杉红松林)为研究对象,使用SF-3000土壤气体通量自动测量系统,对雨季不同时期4次强降雨前... 详细信息

森林土壤呼吸是全球碳循环的重要组成部分,其对降雨格局的变化如何响应,是当前全球变化研究中的热点问题。本研究以小兴安岭地区原始温带森林(云冷杉红松林)为研究对象,使用SF-3000土壤气体通量自动测量系统,对雨季不同时期4次强降雨前后的土壤呼吸速率、土壤呼吸的组分和相关环境因子进行了连续观测。结果表明:1)土壤温度和含水量协同影响土壤呼吸强度。降雨是影响甚至改变控制土壤呼吸(Rs)的关键环境因子,强降雨使土壤含水量激增,并对土壤温度也有不同程度的影响。雨季初期强降雨对Rs的扰动作用相对较小,雨季中期强降雨可抑制Rs,在雨季结束后强降雨可促进Rs。2)在雨季不同时期的强降雨均不同程度的影响了土壤异养呼吸(Rh)与土壤呼吸的比例(Rh/Rs),相对于土壤自养呼吸(Ra),短时极强降雨对Rh的抑制作用更强。3)加入水分修正系数c的Rs与T5、W5指数关系模型可更好的表征土壤含水量和土壤温度对土壤呼吸的影响,不同雨季时期的强降雨均对土壤的温度敏感系数(Q10)有着显著的影响。强降雨使得土壤对水分的敏感性降低,处于雨季不同时期的土壤水分敏感性表现为:在雨季的开始和结束后,土壤呼吸的水分敏感性较高,而雨季中期的水分敏感性较低。

关键词：小兴安岭强降雨土壤呼吸云冷杉红松林

传染性支气管炎病毒S-ChIL-15融合基因真核表达质粒的构建及其体外表达

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中国兽医科学 2009年第1期39卷 35-40页

作者：王衡李广兴刘博奇任晓峰东北农业大学动物医学学院病理解剖教研室黑龙江哈尔滨150030

通过一段编码(G3S)4多肽的碱基linker将传染性支气管炎病毒(IBV)S基因和鸡IL-15(ChIL-15)基因连接,构建了pcDNA3.1-IBVS-ChIL-15融合基因重组质粒。将该重组质粒转染Vero细胞,并通过RT-PCR、免疫组织化学及免疫荧光试验对重组质粒的体... 详细信息

通过一段编码(G3S)4多肽的碱基linker将传染性支气管炎病毒(IBV)S基因和鸡IL-15(ChIL-15)基因连接,构建了pcDNA3.1-IBVS-ChIL-15融合基因重组质粒。将该重组质粒转染Vero细胞,并通过RT-PCR、免疫组织化学及免疫荧光试验对重组质粒的体外瞬时表达情况进行检测。结果显示,成功构建了S-ChIL-15融合基因,转染24 h后能检测到IBVS-ChIL-15融合基因和该融合基因瞬时表达的产物。

关键词：传染性支气管炎病毒 S基因鸡IL-15基因瞬时表达融合基因