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肝纤维化的治疗策略

中国中西医结合杂志 2006年第1期26卷 8-9页

作者：刘克洲侯伟浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所杭州310003

肝纤维化是肝脏受到慢性损伤的一种修复反应，是多种慢性肝病共有的病理改变，是细胞外基质（extracellular matrix，ECM）过度沉积的结果。肝纤维化为一动态过程，属可逆性病变。阻断、抑制或逆转肝纤维化是治疗慢性肝病的重要目标。

关键词：肝纤维化治疗慢性肝病细胞外基质

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第四讲酒精性肝病发病机制若干进展

中华消化杂志 2002年第4期22卷 230-232页

作者：刘克洲浙江大学医学院第一医院 310003

酒精性肝病发病机制较复杂，由多种因素造成，长期大量饮酒是酒精性肝病的发病基础，酒精及其代谢产物乙醛等直接或通过免疫机制损害肝细胞，发生肝细胞脂肪变性、酒精性肝炎、肝纤维化、肝硬化。

关键词：酒精性肝病发病机制细胞色素P4502E1 氧应激细胞因子

10-23 DNA enzyme对乙型肝炎病毒C基因体外转录产物的切割活性

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浙江大学学报（医学版） 2006年第5期35卷 507-511页

作者：侯伟沃健儿刘克洲李敏伟浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所卫生部传染病重点实验室浙江杭州310003

目的:探讨10-23 DNA enzym e对乙型肝炎病毒C基因体外转录产物的特异切割活性。方法:设计并合成3种能针对乙型肝炎病毒C基因开放阅读框A1816UG的特异性脱氧核酶,分别命名为D rzBC-7、D rzBC-8和D rzBC-9。应用体外转录的方法获得相应的... 详细信息

目的:探讨10-23 DNA enzym e对乙型肝炎病毒C基因体外转录产物的特异切割活性。方法:设计并合成3种能针对乙型肝炎病毒C基因开放阅读框A1816UG的特异性脱氧核酶,分别命名为D rzBC-7、D rzBC-8和D rzBC-9。应用体外转录的方法获得相应的底物RNA,观察D rzBC-7、D rzBC-8和D rzBC-9对其的体外切割效应。以D rzBC-9为例,观察不同浓度的M gC l2对体外切割效率的影响,根据L inew eaver Burk作图法,计算相关的酶动力学参数Km、K cat和K cat/Km。结果:通过体外转录获得用于切割反应的底物RNA,其大小为300 nt。在特定的切割条件下,D rzBC-7、D rzBC-8和D rzBC-9均能对相应的底物RNA进行有效的切割,切割产物分别为109 nt和191 n。t以D rzBC-9为例,在切割反应体系中缺乏M gC l2时,未见有切割反应。M gC l2浓度在150 mm o.lL-1时达到最高切割效率,再提高M gC l2的浓度,切割效率未见明显增大。酶动力学参数Km、K cat和K cat/Km分别为1.4×10-9m o.lL-1,1.6 m in-1和1.1×109m o.lL-1.m in-1。结论:针对乙型肝炎病毒C基因的10-23 DNA enzym e在体外对相应的转录产物有特异切割作用。

关键词： DNA催化性 DNA,单es,链肝炎病毒,乙型/遗传学基因组,病毒/遗传学重组,遗传转染

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肝炎门诊第2版

HCV结构区基因重组体免疫大鼠抗体反应的各种影响因素

丛书名：专家门诊丛书

1999年

作者：马亦林刘克洲

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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免疫学杂志 1999年第3期15卷 151-155页

作者：窦骏刘克洲

为寻求丙型肝炎病毒基因免疫的最佳动物实验方法，探讨不同方式对重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１诱发Ｂａｌｂｈ／ｃ小鼠产生抗体的影响。采用分子生物学技术构建了ＨＣＶ重组体，用不同免疫次数，途径，剂量和不同处理方式将其免疫小鼠。结果... 详细信息

为寻求丙型肝炎病毒基因免疫的最佳动物实验方法，探讨不同方式对重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１诱发Ｂａｌｂｈ／ｃ小鼠产生抗体的影响。采用分子生物学技术构建了ＨＣＶ重组体，用不同免疫次数，途径，剂量和不同处理方式将其免疫小鼠。结果显示；重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１（１００μｇ／只／次，ｎ＝１２）经肌肉１次，２次，３次和４次免疫小鼠后，抗体水平分别为０．１８３±０．０６，０．４２８±０．０５，０．７０７±０．

关键词：重组体基因免疫 Bal/c小鼠丙型肝炎

乙型炎和肝癌肝切片HBV DNA检测及与其它HBV标志的关系

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中华实验和临床病毒学杂志 1992年第1期6卷 30-35页

作者：阎辉刘克洲浙江医科大学

核酸探针技术进展及其在感染性疾病中的应用（二）

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中华实验和临床病毒学杂志 1993年第1期7卷 110-117页

作者：阎辉刘克洲浙江医科大学传染病研究所，杭州 310003

HBx-siRNA快速筛选体系的建立和应用

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浙江大学学报（医学版） 2004年第4期33卷 300-305,310页

作者：倪勤刘克洲羊正纲姚航平爱德华李敏伟陈智浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所浙江杭州310003

目的 :建立针对 HBx的小干扰 RNA(si RNA)快速筛选体系。方法 :1构建 HBx与增强型绿色荧光蛋白(EGFP) N端融合表达质粒 ;2用一步 PCR法 ,制备针对 HBx m RNA的 RNA多聚酶启动子 - si RNA表达框(SEC) ;3将 SEC转染 HBx- EGFP瞬时表达的 A... 详细信息

目的 :建立针对 HBx的小干扰 RNA(si RNA)快速筛选体系。方法 :1构建 HBx与增强型绿色荧光蛋白(EGFP) N端融合表达质粒 ;2用一步 PCR法 ,制备针对 HBx m RNA的 RNA多聚酶启动子 - si RNA表达框(SEC) ;3将 SEC转染 HBx- EGFP瞬时表达的 AD2 93细胞 ,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察分析 SEC对 HBx- EGFP荧光表达的抑制效果 ,从而确定有效 si RNA。结果 :1成功构建 HBx- EGFP融合表达质粒 p HBx- EGFP,在瞬时表达细胞中 ,HBx- EGFP绿色荧光主要呈颗粒状 ,聚集在核膜与核膜外周或细胞浆 ;2共转染 SEC能有效抑制 HBx- EGFP的瞬时表达。与 si HBx2 71相比 ,si HBx388是一高效 si RNA位点 ,并且该位点与 t RNAVal和 H1启动子搭配更有效。结论 :成功建立表达 HBx的荧光蛋白报告体系 ,结合快速制备 SEC的方法 ,可用于进行 HBx有效 si

关键词：发光蛋白质类 HBx 增强型绿色荧光蛋白小干扰RNA 筛选

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核酶:肝脏疾病基因治疗的新途径

临床肝胆病杂志 2001年第1期17卷 9-11页

作者：徐峰陈智刘克洲浙江大学医学院附属一院传染病研究所浙江杭州310003

核酶是1981年由Cech和Alfman在研究四膜虫mRNA前体的剪接中首先发现,此二人由此获得1989年的诺贝尔奖.核酶是一类具有酶催化活性的RNA分子,它可与相应的特异序列的RNA底物结合,行使其切割功能[1].核酶切割RNA不仅是其自身的主要功能特点... 详细信息

核酶是1981年由Cech和Alfman在研究四膜虫mRNA前体的剪接中首先发现,此二人由此获得1989年的诺贝尔奖.核酶是一类具有酶催化活性的RNA分子,它可与相应的特异序列的RNA底物结合,行使其切割功能[1].核酶切割RNA不仅是其自身的主要功能特点,也是其用于阻断基因表达和抗病毒治疗的主要依据.核酶作为基因治疗的新方法,已被用于控制多种病毒感染和治疗癌症的研究中.本文着重对核酶的作用机制及其在抗肝脏疾病基因治疗的研究近况及应用前景等做一介绍.

关键词：核酶肝脏疾病基因治疗病毒性肝炎肝癌