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企鹅珍珠贝非致死性DNA提取方法的研究

海洋科学 2023年第2期47卷 55-62页

作者：陈一刘二田战欣顾志峰王爱民海南大学海洋学院南海海洋资源利用国家重点实验室海南海口570228

在企鹅珍珠贝遗传育种研究中,为保证在贝类存活的条件下获得其DNA信息,采用企鹅珍珠贝(Pteria penguin)贝壳边缘和足丝研究非致死性DNA提取方法。不同于贝壳获取过程中会对实验贝体产生一定损伤,足丝是无生命的细胞外纤维束,其获取方法... 详细信息

在企鹅珍珠贝遗传育种研究中,为保证在贝类存活的条件下获得其DNA信息,采用企鹅珍珠贝(Pteria penguin)贝壳边缘和足丝研究非致死性DNA提取方法。不同于贝壳获取过程中会对实验贝体产生一定损伤,足丝是无生命的细胞外纤维束,其获取方法简单且属于非损伤性取样,对实验贝几乎无伤害,是潜在的获取具足丝贝类基因组DNA的优良材料。本研究采用脱钙与未脱钙两种处理方式,并结合海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒法及有机溶剂萃取法(OSE)提取贝壳及足丝DNA,对获得的贝壳DNA及足丝DNA进行PCR扩增。结果显示,足丝有机溶剂法(OSE法)提取效率显著高于贝壳DNA提取方法,脱钙足丝与未脱钙足丝的DNA提取效率无显著差异,分别为(0.0167±0.0029)μg/mg和(0.0161±0.0031)μg/mg。未脱钙足丝的OSE法获得的DNA产物纯度最优,A260/280值为1.4000±0.0400,A260/230值显著高于贝壳DNA及足丝DNA的其他提取方法,为0.9100±0.0800。除脱钙贝壳OSE法外,其他所有DNA提取方法均可用于后续PCR扩增,测序结果表明产物DNA来源于企鹅珍珠贝,且贝壳及足丝取样方式均未导致企鹅珍珠贝死亡。综上,未脱钙足丝的OSE法优于其他方法,研究结果可为非致死性DNA提取提供参考,也为企鹅珍珠贝的选择育种研究及珍稀贝类保护奠定前期基础。

关键词：企鹅珍珠贝非致死性贝壳DNA提取足丝DNA提取

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企鹅珍珠贝微卫星标记辅助育种的初步研究

企鹅珍珠贝微卫星标记辅助育种的初步研究

作者：刘二田海南大学

学位级别：硕士

企鹅珍珠贝（Pteria penguin）又称翼形珍珠贝,隶属于软体动物门（Mollusca）,双壳纲（Bivalbia）,珍珠贝属（Pteria）,因企鹅珍珠贝体型大、生长速度快、病害少、环境适应能力强、珍珠质分泌旺盛等特点,已成为我国热带亚热带地区培育... 详细信息

企鹅珍珠贝（Pteria penguin）又称翼形珍珠贝,隶属于软体动物门（Mollusca）,双壳纲（Bivalbia）,珍珠贝属（Pteria）,因企鹅珍珠贝体型大、生长速度快、病害少、环境适应能力强、珍珠质分泌旺盛等特点,已成为我国热带亚热带地区培育大型海水附壳珍珠的主要贝种。本研究以1龄企鹅珍珠贝为研究对象,对其生长性状和质量性状的相关性进行研究,然后进行基因组DNA获取方法的选择与优化。以获得的高质量DNA为模板,在基于前人已开发的微卫星标记和转录组文库的基础上开发具有高度多态性的企鹅珍珠贝微卫星位点,并对微卫星标记与表型性状进行关联分析,为企鹅珍珠贝分子遗传标记辅助选择育种提供理论依据和参考,对促进我国珍珠产业持续健康发展具有重要意义。主要研究结果如下:1.建立了企鹅珍珠贝贝壳基因组DNA提取方法—试剂盒-OSE结合法,虽然新开发的基因组DNA提取方法在提取效率和纯度方面逊色于外套膜DNA,但是该方法可获得纯度较高的企鹅珍珠贝壳基因组DNA,而且不影响个体的成活率。2.企鹅珍珠贝生长性状的相关与通径分析结果表明:企鹅珍珠贝的壳长和壳高与总重均具有显著相关性（P壳高X（0.3426）)>壳宽X（0.3256）;对体重间接作用最大是壳宽通过壳长的间接作用（0.2516）,其次是壳高通过壳长的间接作用（0.2267）,最小的是壳高通过壳宽的间接作用（0.1943）。以企鹅珍珠贝形态性状（壳长、壳宽、壳高）为自变量、总重为因变量进行多元回归分析,得到各形态性状对总重的多元线性回归方程:Y=-20.79279+0.2059*X+0.3413*X+0.6314*X（R=0.8237）。故在企鹅珍珠贝人工选育以总重为选育目标时,1龄贝应以壳宽作为首选性状,同时加强对壳长的协同选择。3.企鹅珍珠贝SSR微卫星标记的开发与筛选结果:基于前人开发的SSR标记中筛选获得3个高度多态性微卫星位点（QEB-D15,QEB-C54和QEB-C65）,基于转录组文库筛选获得2个高度多态性微卫星位点（CL-232和UN-4652）。利用5个微卫星位点对企鹅珍珠贝生长性状的相关性分析发现,位点QEB-D15与壳宽的相关系数为0.021（p<0.01）呈极显著相关;位点CL-232与壳宽的相关系数为0.167（p<0.01）呈极显著相关。对5个微卫星位点基因型与生长性状相关性分析发现,位点QEB-C54中推测基因型为219/219为优势基因型。位点QEB-C65中推测优势基因型是174/180,与表型性状壳长、壳宽和总重呈正相关。推测基因型为174/174为劣势基因型,与表型性状壳长、壳宽和总重呈负相关。位点CL-232中推测基因型为157/174为优势基因型,与表型性状壳长、壳宽和总重呈正相关。推测基因型为177/192为劣势基因型,与表型性状壳长、壳宽、壳高和总重呈负相关。位点UN-4652中推测基因型为249/249为优势基因型,与表型性状壳长、壳宽、壳高和总重呈正相关。推测基因型为252/273为劣势基因型,与表型性状壳长、壳宽和总重呈负相关。

关键词：企鹅珍珠贝表型性状多元统计分析 DNA提取微卫星

番红砗磲外套膜颜色多态性及其与生长性状相关性研究

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渔业科学进展 2020年第2期41卷 176-182页

作者：何园园刘二田顾志峰石耀华王爱民刘春胜海南大学海洋学院海口570228 海南大学南海海洋资源利用国家重点实验室海口570228

本研究以南海西沙海域番红砗磲(Tridacna crocea)为实验对象,通过CSE-1成像色度检测分析系统和聚类分析方法研究其外套膜颜色多态性,同时,比较外套膜颜色与形态性状的相关性。结果显示,大部分番红砗磲外套膜颜色分布在蓝原色和红原色区... 详细信息

本研究以南海西沙海域番红砗磲(Tridacna crocea)为实验对象,通过CSE-1成像色度检测分析系统和聚类分析方法研究其外套膜颜色多态性,同时,比较外套膜颜色与形态性状的相关性。结果显示,大部分番红砗磲外套膜颜色分布在蓝原色和红原色区域,少部分个体分布在绿原色区域,且偏亮绿色;番红砗磲外套膜颜色共聚为6个颜色类群,各类群间颜色色差均>15,其中,第4类深蓝色和第6类黄色色差最大,为74.68;第3类浅蓝色和第4类深蓝色色差最小,为18.98;番红砗磲外套膜颜色L、a、b值与壳高呈显著正相关(P<0.05),相关系数分别为0.2080、0.2210和0.2375。本研究结果可为砗磲资源保护和珊瑚礁生态系统恢复提供参考。

关键词：番红砗磲外套膜颜色多态性相关性

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光照强度对番红砗磲外套膜颜色变化的影响

海洋科学 2021年第1期45卷 70-75页

作者：刘二田何园园顾志峰石耀华王爱民刘春胜海南大学海洋学院海南海口570228 海南大学南海海洋资源利用国家重点实验室海南海口570228

以蓝色、棕黄色和绿色三种不同外套膜颜色的番红砗磲(Tridacna crocea)为实验对象,设置5000 lx、10000 lx和15000 lx三组光照强度,探究了番红砗磲外套膜颜色变化与光照强度的相关性。结果表明:(1)在不同光照强度下,蓝色个体外套膜颜色加... 详细信息

以蓝色、棕黄色和绿色三种不同外套膜颜色的番红砗磲(Tridacna crocea)为实验对象,设置5000 lx、10000 lx和15000 lx三组光照强度,探究了番红砗磲外套膜颜色变化与光照强度的相关性。结果表明:(1)在不同光照强度下,蓝色个体外套膜颜色加深,棕黄色个体颜色变化不大,而绿色个体外套膜颜色变浅。(2)蓝色个体在光照刺激2周后外套膜颜色即出现显著变化,0~2周色差为13.81~21.59;在不同光照强度刺激下,棕黄色和绿色个体的外套膜颜色的色差随时间延长而逐渐增强,4~6周外套膜颜色色差最大。(3)番红砗磲原外套膜颜色类别对其外套膜颜色红绿特征数值(a)和黄蓝特征数值(b)影响显著(P<0.05);光照强度对番红砗磲外套膜颜色黄蓝特征数值(b)影响显著(P<0.05);光照强度和番红砗磲原外套膜颜色类别的交互作用对红绿特征数值(a)的影响显著。上述结果可为定向培育外套膜颜色鲜艳的番红砗磲以及解析砗磲环境适应机制提供参考。

关键词：番红砗磲光照强度外套膜颜色色差

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番红砗磲外套膜色素提取条件优化及成分分析

海洋科学 2019年第6期43卷 71-77页

作者：付正祎刘二田顾志峰石耀华王爱民吴川良刘春胜海南大学海洋学院海南海口570228 海南大学南海海洋资源利用国家重点实验室海南海口570228 三亚珊瑚礁生态研究所海南三亚572000

以番红砗磲(Tridacna crocea)为实验对象,通过单因素对比实验对其外套膜色素的提取条件进行了优化,并利用薄层层析色谱法对色素组成进行了初步分析。结果表明:丙酮和乙醇为适宜的番红砗磲外套膜色素提取剂;使用丙酮为提取剂时,浸提时间... 详细信息

以番红砗磲(Tridacna crocea)为实验对象,通过单因素对比实验对其外套膜色素的提取条件进行了优化,并利用薄层层析色谱法对色素组成进行了初步分析。结果表明:丙酮和乙醇为适宜的番红砗磲外套膜色素提取剂;使用丙酮为提取剂时,浸提时间为 4 h,提取温度为 25℃,料液比为 1 40。使用乙醇为提取剂时,浸提时间为 4 h,提取温度为 30℃,料液比为 1 200;利用薄层色谱法分离外套膜颜色为蓝色和红棕色的番红砗磲外套膜色素后发现,蓝色番红砗磲外套膜色素由 9 种色素组分构成,红棕色个体番红砗磲外套膜色素由 10 种色素组分构成。

关键词：番红砗磲(Tridacna crocea) 外套膜色素提取条件薄层层析色谱

支架沉降对分层浇筑的PC异型连续箱梁桥受力影响分析

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公路 2024年第1期69卷 208-211页

作者：刘四田北京市市政专业设计院股份公司北京市100037

PC异型连续箱梁桥一般比较宽,混凝土方量大,会采用支架分层浇筑施工方法。当支架刚度不足或地基处理存在缺陷时,在箱梁浇筑过程中支架会产生沉降,可导致箱梁产生裂缝。在处理这类问题时,关注点易集中在裂缝的处理上,而忽视箱梁截面应力... 详细信息

PC异型连续箱梁桥一般比较宽,混凝土方量大,会采用支架分层浇筑施工方法。当支架刚度不足或地基处理存在缺陷时,在箱梁浇筑过程中支架会产生沉降,可导致箱梁产生裂缝。在处理这类问题时,关注点易集中在裂缝的处理上,而忽视箱梁截面应力重分布。现以某实桥为例,对支架无沉降和有沉降施工状态进行了比较计算,就裂缝成因及梁体应力重分布进行了探讨,进而对后续加固重点提出了建议。

关键词：桥梁工程异型箱梁桥支架分层浇筑支架沉降应力重分布加固

农民专业合作社盈余分配影响因素的实证分析——基于黑龙江省13个地级市403家合作社的调研数据

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中国农业资源与区划 2024年

作者：刘雨欣王子怡刘二阳郑州大学政治与公共管理学院东北农业大学工程学院中共黑龙江省委党校经济学教研室

【目的】合理公正的分配盈余是农民专业合作社可持续发展的关键，理清合作社盈余分配的影响因素及其内在逻辑，对合作社的高质量发展以及乡村振兴战略的实施具有重要意义。【方法】文章从农民专业合作社内部运营视角出发，依据黑龙江省1... 详细信息

【目的】合理公正的分配盈余是农民专业合作社可持续发展的关键，理清合作社盈余分配的影响因素及其内在逻辑，对合作社的高质量发展以及乡村振兴战略的实施具有重要意义。【方法】文章从农民专业合作社内部运营视角出发，依据黑龙江省13个地级市403家合作社的调查数据，运用Logistic-ISM模型分析影响农民专业合作社盈余分配的因素及其内在逻辑。【结果】（1）二元Logistic模型结果显示：合作社示范等级、理事长占股比例、社员大会参与率、独立品牌数量、全体成员大会召开频次显著正向影响合作社盈余分配意愿，合作社运营模式中运营主体数量显著负向影响合作社盈余分配意愿。（2）ISM模型结果显示：合作社运营模式为深层根源影响因素，合作社独立品牌数量、全体成员大会召开频次为中间层间接影响因素，合作社示范等级、理事长占股比例、社员大会参与率为表层直接影响因素。【结论】合作社盈余分配影响因素可归纳为“两驱动，两路径”。为改善合作社盈余分配行为，促进合作社的高质量发展，需加强合作社运营方式、治理结构和产权制度三个方面的规范性。

关键词：农民专业合作社普通成员盈余分配二元Logistic模型 ISM模型

新时代旅游资源协同开发对共同富裕影响的组态路径分析

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自然资源学报 2024年第2期39卷 259-273页

作者：张广海董跃蕾刘二恋中国海洋大学管理学院青岛266100

聚焦旅游资源协同开发促进共同富裕的理论逻辑,以中国31个省(市、自治区)为研究对象,运用fsQCA探究旅游资源协同开发对共同富裕影响的组态路径。结果表明:(1)单一前因条件不能构成共同富裕的必要条件,但是人力资本的就业拉动与富民增收... 详细信息

聚焦旅游资源协同开发促进共同富裕的理论逻辑,以中国31个省(市、自治区)为研究对象,运用fsQCA探究旅游资源协同开发对共同富裕影响的组态路径。结果表明:(1)单一前因条件不能构成共同富裕的必要条件,但是人力资本的就业拉动与富民增收对共同富裕的促进作用较其他条件更为重要。(2)高共同富裕水平的组态路径包括“生产资源—人力资本—交通资源协同型”与“品牌资源驱动型”两类核心模式,低共同富裕水平的组态路径包括“人力资本—品牌资源缺失型”与“人力资本—技术资源不足型”两类核心模式。(3)开发路径在中国东中西三大地区存在空间差异,东部地区生产资源优势突出,中部地区旅游品牌资源质量较高,西部地区则主要凭借人力资本与技术资源的深度融合打造共同富裕之路。研究结果丰富了旅游资源协同开发促进共同富裕的研究范式,为推动共同富裕实践提供科学参考。

关键词：旅游资源协同开发共同富裕组态路径 fsQCA

基于凸集比例因子和WOA-Kriging模型的重力坝非概率可靠性分析

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长江科学院院报 2024年

作者：刘要来王堡生周红波赵二峰李章寅中国电建集团中南勘测设计研究院有限公司河海大学水利水电学院

为了实现在统计资料匮乏时也能进行重力坝的可靠性分析，构建了仅需要不确定参数上下限的重力坝非概率可靠度评估方法。通过内切椭球模型描述了不确定参数的相关关系，引入比例因子将非概率可靠度计算模型转化为有约束的优化问题，利用K... 详细信息

为了实现在统计资料匮乏时也能进行重力坝的可靠性分析，构建了仅需要不确定参数上下限的重力坝非概率可靠度评估方法。通过内切椭球模型描述了不确定参数的相关关系，引入比例因子将非概率可靠度计算模型转化为有约束的优化问题，利用Kriging模型对于高度非线性函数的适用性拟合重力坝单元功能函数，在此基础上，通过鲸鱼优化算法进行可靠指标的寻优。经过实例验证，基于凸集比例因子和WOA-Kriging模型的重力坝非概率可靠度计算方法可以有效分析重力坝的可靠性。

关键词：重力坝凸集比例因子 Kriging模型有限元模型非概率可靠度