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利用胰蛋白酶冷消化法高效制备胰腺单细胞悬液

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利用胰蛋白酶冷消化法高效制备胰腺单细胞悬液

通过整体消化法分离具有集落形成能力的胰腺上皮样细胞

中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会

作者：李丹冯锐成张振武李璐滕春波东北林业大学生命科学学院

胰腺是一个较为特殊的器官,现有分离方法不能理想地分散胰腺组织获得大量胰腺单细胞,从而阻碍了利用流式细胞术对胰腺细胞进行分析和分选。本研究利用胶原酶和胰酶在不同条件下分离小鼠胰腺组织,摸索建立了利用胰蛋白酶冷消化分离制备... 详细信息

胰腺是一个较为特殊的器官,现有分离方法不能理想地分散胰腺组织获得大量胰腺单细胞,从而阻碍了利用流式细胞术对胰腺细胞进行分析和分选。本研究利用胶原酶和胰酶在不同条件下分离小鼠胰腺组织,摸索建立了利用胰蛋白酶冷消化分离制备胰腺单细胞悬液的最佳方法。与胶原酶37℃温消化以及胶原酶胰蛋白酶联合温消化法比较,胰酶冷消化法分离得到细胞悬液单细胞比率达到95%以上,远远高于胶原酶消化的60%～70%以及联合消化法的86%～89%;胰酶冷消化14～18小时,平均每克组织得到2.53～2.63x10细胞,较胶原酶消化(1.21x10)及联合温消化(2.14x10)的细胞得率显著提高;胰蛋白酶冷消化法分离细胞活性为87.82%～89.34%,远高于胶原酶温消化(65.66%)以及联合消化法(49.66%);将冷消化分离得到的胰腺单细胞进行流式细胞分析,通过Brdu、DBA、Bcrpl等分子标记的检测发现,冷消化获得细胞比例与活体情况相似,而且实验重复结果稳定;在离体培养研究中发现,冷消化分离得到的这群细胞中能够筛选得到具有较强增殖能力的细胞集落。上述结果表明,胰蛋白酶冷消化法是一种适用于小鼠成体胰腺组织的分离方法,通过这种方法能够高效制备小鼠胰腺单细胞悬液,为利用流式细胞术进行胰腺细胞的分离和分析研究奠定了基础。

关键词：胰腺祖细胞分离鉴定诱导分化胰岛素分泌糖尿病

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现代生物医学进展 2014年第12期14卷 2247-2250,2258页

作者：梁杰孔德麟梁洋李丹冯锐成滕春波东北林业大学生命科学学院发育生物学研究室黑龙江哈尔滨150040

目的:胰腺上皮细胞能诱导成表达胰岛素的细胞,成为细胞替代疗法治疗糖尿病的重要来源。胰腺细胞的分离多采用机械剪切后胶原酶消化,本文在以往研究基础上,探索一种能分离得到更纯净的胰腺上皮样细胞的新方法。方法:本研究采用胰腺整体... 详细信息

目的:胰腺上皮细胞能诱导成表达胰岛素的细胞,成为细胞替代疗法治疗糖尿病的重要来源。胰腺细胞的分离多采用机械剪切后胶原酶消化,本文在以往研究基础上,探索一种能分离得到更纯净的胰腺上皮样细胞的新方法。方法:本研究采用胰腺整体消化的方法,将成体小鼠整个胰腺取下,摘除系膜及大的血管,置于胶原酶中消化20min,用PBS吹打胰腺组织,得到的细胞悬液,离心后去除上清与细胞碎片,用培养基重悬实质细胞,接种于6 cm培养皿中,培养7-10天后得到单细胞集落。结果:整体消化法不剪碎胰腺组织,从而避免多种胰腺细胞的参与,得到较为纯净的胰腺上皮细胞悬液,细胞总体数量小于部分消化法,但是单细胞比率远远高于部分消化法,得到的细胞集落更纯净,不需要去除成纤维细胞,方便筛选及进一步扩大培养。结论:整体消化法能够分离纯化出一群在离体条件下具有强增殖能力、形成大的上皮样集落的细胞。该分离方法方便、快捷,为今后进一步研究成体胰腺干细胞增殖与分化调控机制等问题奠定基础。

关键词：整体消化法胰腺上皮样细胞成纤维细胞

Laminin和Fibronectin对胰腺祖细胞增殖分化的调控研究

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Laminin和Fibronectin对胰腺祖细胞增殖分化的调控研究

细胞—生命的基础——中国细胞生物学学会2013年全国学术大会·武汉

作者：冯锐成张振武梁杰梁洋滕春波东北林业大学生命科学学院

Laminin和Fibronectin是两种重要的细胞外基质组分,通过结合到细胞表面integrin受体激活下游信号通路,调节细胞增殖、存活、分化或迁移。Fibronectin和laminin对胰腺祖细胞的调控还不清楚,本实验分析了细胞外基质Laminin和Fibronectin... 详细信息

Laminin和Fibronectin是两种重要的细胞外基质组分,通过结合到细胞表面integrin受体激活下游信号通路,调节细胞增殖、存活、分化或迁移。Fibronectin和laminin对胰腺祖细胞的调控还不清楚,本实验分析了细胞外基质Laminin和Fibronectin对胰腺祖细胞增殖分化的调控及机制。ccK-8和Ki67免疫荧光染色发现,Laminin和Fibronectin能够促进胰腺祖细胞增殖;实

关键词：胰腺祖细胞 Lamninin Fibronectin 增殖分化

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历时6年找到1.8万元现金失主

人民公安 2024年第3期 48-51页

作者：冯锐李子成白静不详

近日,黑龙江省甘南县公安局中兴派出所所长陈晓辉的工作笔记本内画了重重的一笔:耗时6年历经三任所长,终于找到了丢失1.8万元现金的主人。

关键词：陈晓甘南县现金笔记本黑龙江省公安局

新时代出版家培育的时代内涵、价值维度与实现路径

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出版广角 2024年第2期 10-14,29页

作者：高坚冯锐扬州大学新闻与传媒学院

出版家作为一个在当代仍焕发着时代精神的特殊群体,彰显了时代价值。新时代出版家应坚守人民至上的宗旨和信念,坚持思想解放与守正创新,具有高度的文化自觉与文化自信,坚持胸怀天下,立足国际视野。新时代出版家培育,丰富了高层次出版人... 详细信息

出版家作为一个在当代仍焕发着时代精神的特殊群体,彰显了时代价值。新时代出版家应坚守人民至上的宗旨和信念,坚持思想解放与守正创新,具有高度的文化自觉与文化自信,坚持胸怀天下,立足国际视野。新时代出版家培育,丰富了高层次出版人才建设之于出版高质量发展、出版强国建设的价值意涵与维度。新时代出版家培育应坚持党管人才原则,加强高层次出版人才思想引领,完善高层次出版人才战略布局,加强高层次国际出版人才培育,深化高层次出版人才培育机制体制。

关键词：出版家培育高层次出版人才建设培育

一群多能成体小鼠胰腺干细胞的分离、鉴定和分化研究

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一群多能成体小鼠胰腺干细胞的分离、鉴定和分化研究

OFDI对工业绿色全要素生产率的影响机制--基于两阶段Super-SBM-Malmquist指数模型的分析

“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：王法张立新冯锐成张振武赵冶梁洋张彦龙安铁洙滕春波东北林业大学生命科学学院发育生物学研究室东北林业大学野生动物资源学院

本研究通过部分消化结合连续转孔方法从成体小鼠胰腺中分离筛选出了具有强增殖能力、能连续形成单细胞集落的上皮细胞:RT-PCR分析结果表明,这群细胞表达胰腺干/祖细胞相关分子CAⅡ,Cpα-1,Nestin,C-met,CD133及侧群细胞标志分子4bcg2,... 详细信息

本研究通过部分消化结合连续转孔方法从成体小鼠胰腺中分离筛选出了具有强增殖能力、能连续形成单细胞集落的上皮细胞:RT-PCR分析结果表明,这群细胞表达胰腺干/祖细胞相关分子CAⅡ,Cpα-1,Nestin,C-met,CD133及侧群细胞标志分子4bcg2,不表达分化细胞的标志分子;免疫荧光染色发现,这群细胞为E-cadherin阳性、C-met阳性,表明这是一群未分化的胰腺上皮细胞;离体条件下,这群细胞经特定诱导条件的培养,能分化为Insulin、Glucagon、Somatostatin、Amylase阳性的细胞;将这群细胞移植入胚胎胰腺中进行外植体培养,它们能自发向内分泌和外分泌细胞方向分化;定向诱导向内分泌分化的细胞能够对葡萄糖浓度变化发生应答,释放C-Peptide量在高糖刺激下上升1.8倍(5mM葡萄糖为1.63pg/μg.h,25mM葡萄糖为2.93 pg/μg.h);诱导向内分泌分化的细胞移植到糖尿病小鼠中能够治疗糖尿病。这群胰腺干细胞的分离和扩增为进一步研究胰腺干/祖细胞特异的标志性分子及其增殖与定向分化调控机制等问题打下基础。

关键词：胰腺干细胞分离鉴定诱导分化胰岛素分泌糖尿病

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中国管理科学 2024年第5期32卷 229-240页

作者：申晨辛雅儒贾妮莎冯锐浙江理工大学经济管理学院浙江杭州310018 陕西师范大学国际商学院陕西西安710119 广州大学经济与统计学院广东广州510006

中国对外直接投资(outward foreign direct investment,OFDI)在推动中国经济与世界经济的深度融合、形成国内国际双循环发展新格局中有着举足轻重的作用。本文基于中国2005-2017年30个省份的面板数据,运用非期望产出的两阶段Super-SBM网... 详细信息

中国对外直接投资(outward foreign direct investment,OFDI)在推动中国经济与世界经济的深度融合、形成国内国际双循环发展新格局中有着举足轻重的作用。本文基于中国2005-2017年30个省份的面板数据,运用非期望产出的两阶段Super-SBM网络DEA模型以及结合全局ML生产率指数测算了中国各省份的工业绿色全要素生产率、生产效率和治污效率,并从理论和实证上考察了中国OFDI对三大效率的影响。研究发现:OFDI对三大效率的影响均表现为稳健的U型非线性关系;从作用机制看,短期内,OFDI对三大效率的抑制作用主要由于规模效应所致,长期内,OFDI对三大效率的促进作用主要通过结构效应和技术效应实现;从异质性视角看,我国东部和西部地区OFDI与三大效率呈显著的U型关系,中部地区的OFDI作用不显著,“一带一路”沿线省份的OFDI产生的正向效应早于非沿线省份。

关键词：对外直接投资(OFDI) 绿色全要素生产率(GTFP) 两阶段Super-SBM网络模型全局参比的Malmquist-Luenberger(GML)指数

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通过G418处理离体纯化小鼠胰腺上皮细胞

现代生物医学进展 2011年第12期11卷 2242-2246页

作者：李丹冯锐成张丽新郭方琪梁洋滕春波东北林业大学生命科学学院发育生物学研究室黑龙江哈尔滨150040 天津医科大学医学检验学院天津300203

目的:探索一种能有效去除成纤维细胞,筛选有较强增殖能力上皮细胞的方法。方法:本研究利用成纤维细胞对G418敏感的特性,在成体小鼠胰腺细胞分离后,采用悬浮细胞直接接种到含30μg/mL G418的培养基中,或细胞贴壁生长汇合至50-70%后用30至... 详细信息

目的:探索一种能有效去除成纤维细胞,筛选有较强增殖能力上皮细胞的方法。方法:本研究利用成纤维细胞对G418敏感的特性,在成体小鼠胰腺细胞分离后,采用悬浮细胞直接接种到含30μg/mL G418的培养基中,或细胞贴壁生长汇合至50-70%后用30至100μg/mL之间不同浓度G418处理24h、48h或72h两种方案进行上皮细胞的纯化。结果:在直接接种法培养处理中,存活的大部分细胞为成纤维细胞,上皮细胞的生长受到抑制,无法得到纯化的胰腺上皮集落;而在细胞贴壁生长汇合至50-70%后经G418处理,成纤维细胞随着处理浓度的增加死亡率也在逐渐上升,其中50μg/mL G418处理72小时对去除成纤维细胞效果最佳。结论:G418处理能够有效去除成纤维细胞,分离纯化出一群在离体条件下具有强增殖能力、形成大上皮细胞集落的细胞。该分离纯化方法为今后进一步研究成体胰腺干/祖细胞增殖与分化调控机制等问题奠定基础。

关键词： G418 成纤维细胞胰腺上皮细胞

东汉·震古烁今地动仪——漫步地震五千年(6)

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地震科学进展 2024年第4期54卷 299-310页

作者：冯锐中国地震台网中心北京100045

东汉是科技文化迅速发展的时期,以张衡地动仪的发明为杰出代表。简介了地动仪的历史真实性、诞生科学思想的物质基础、张衡的科学贡献。地动仪对19世纪现代地震仪的诞生曾起过重要的思想启迪作用。复原研究旨在搞清原理和结构、得到思... 详细信息

东汉是科技文化迅速发展的时期,以张衡地动仪的发明为杰出代表。简介了地动仪的历史真实性、诞生科学思想的物质基础、张衡的科学贡献。地动仪对19世纪现代地震仪的诞生曾起过重要的思想启迪作用。复原研究旨在搞清原理和结构、得到思想的启迪,有助于普及地震科学知识。对新复原模型的考古依据和科学实验做了简介。

关键词：张衡地动仪工作原理科学复原