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作者：冯知涛南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种常见的以关节组织慢性炎症为主要表现的系统性自身免疫性疾病。病变关节主要表现为炎症细胞浸润、滑膜增生、血管翳形成以及由此引发的软骨和骨的损伤。RA呈全球分布,全世界的发病... 详细信息

研究背景类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种常见的以关节组织慢性炎症为主要表现的系统性自身免疫性疾病。病变关节主要表现为炎症细胞浸润、滑膜增生、血管翳形成以及由此引发的软骨和骨的损伤。RA呈全球分布,全世界的发病率平均为1%,在我国的发病率为0.26%～0.5%,男女比例为1：3,可发生于任何年龄,发病的高峰为45～50岁。RA是主要的致残性疾病之一,造成关节活动功能丧失,给社会和家庭带来巨大的压力和负担。RA的发病机制复杂,其中有多种免疫细胞和细胞因子的参与。RA发生时CD4+T细胞活化并增殖,分泌多种细胞因子,如白介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子(TNF),继之巨噬细胞、B细胞、内皮细胞等被激活,激活的B细胞可以产生类风湿因子(RF)和抗环瓜氨酸肽抗体(anti-CCP)。其中IL-1、TNF-α等炎性或促炎细胞因子在发病中起着“中心犯罪”的作用。最近,有研究表明一类小分子RNA-microRNA(miRNA,即微小RNA)参与T、B淋巴细胞的分化,参与固有免疫应答和适应性免疫应答,可能在自身免疫性疾病如RA中发挥重要作用。miRNA是一类长度约21～25碱基的非编码蛋白质的单链小分子RNA,广泛存在于多细胞生物和病毒体内,主要通过核酸序列互补匹配结合到特定的靶mRNA上,抑制靶mRNA翻译过程或降解靶mRNA,是一种起负调控作用的分子。预测约有30%的基因编码序列受相关的miRNAs调控。miR-146a和miR-16就是其中的两个。在RA中,miR-146a通过对其靶基因的调控,影响转录因子(NF-κB)依赖的细胞因子如IL-1β、TNF-a等的分泌及滑膜细胞增殖,介导RA患者炎症反应。miR-16能快速降解在3’非编码区含有AU的调控元件,包括TNF-a、IL-8、IL-6等,可抑制过度的炎症反应。研究miR-146a及miR-16在RA患者外周血的表达水平及与疾病活动程度、临床指标的关系,有助于进一步探讨其在RA发病及疾病进展中的意义。RA属于祖国传统医学“痹证”范畴。痹证的发生主要是由于正气不足,感受风、寒、湿、热之邪所致。内因是基础,素体虚弱、正气不足、腠理不密、卫外不固,是引起痹证的内在因素,如再感受外邪,使肌肉、关节、经络痹阻而形成痹证。痹证的治疗以祛风通络为基本大法,治以祛风、除湿、舒筋活络。青藤碱制剂(清风痛胶囊)具有祛风化湿、温经散寒、活血通络的功效,既往药理及临床研究显示对急、慢性炎症具有良好的抗炎镇痛效果。甲氨蝶呤(MTX)目前仍是应用最广泛的RA改善病情药物,具有抗炎、免疫抑制作用。二者联合治疗活动性RA具有较好的疗效。研究青藤碱制剂(清风痛胶囊)联合MTX对miR-146a及miR-16表达水平的影响有助于了进一步探讨青藤碱制剂(清风痛胶囊)联合MTX对RA的作用机理。辨证论治是中医学的基本特点之一,是中医确立治法、谴方用药的依据。中医在诊治疾病的过程中,理法方药必一气贯通,才能体现中医辨证论治的精髓,而证正是理法方药一气贯通的桥梁和关键。目前国内外对RA诊断学研究很多,祖国医学多从整体观念出发,从宏观角度进行辨证论治,而现代医学多从实验室检测方法入手,从微观角度进行研究,二者各有所长亦各有所短。关于miRNAs与中医证型的关系未见研究报道。探讨miRNAs与RA中医证型的相关性,对RA辨证的客观化研究和指导临床治疗均有重要意义。研究目的1.研究RA患者外周血miR-146a、miR-16的表达,分析miR-146a、miR-16的表达与RA疾病活动的相关关系;2.观察青藤碱制剂(清风痛胶囊)联合MTX对RA患者外周血miR-146a及miR-16表达水平的影响;3.探讨RA患者外周血miR-146a、miR-16的表达与中医证型的关系。方法1.研究对象2009年6月至2010年3月在南方医科大学附属南方医院中医风湿科门诊及病房确诊的RA患者40例,男性8例,女性32例,活动期患者24例,其中男性4例,女性20人。缓解期患者16例,男性4例,女性12例。健康对照组为同期医院门诊健康体检者16人,男性4例,女性12例。2.研究方法2.1RA患者外周血miR-146a、miR-16的表达与疾病活动的关系采用实时荧光定量PCR法检测RA患者外周血单个核细胞miR-146a、miR-16的相对表达,以U6snRNA为内参,采用2-△△CT分析方法对miR-146a、miR-16的表达量进行相对定量。收集患者肿胀关节数(Swollen0-28)、压痛关节数(Tender0-28)、整体健康状况评分、类风湿因子(RF)、C-反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)等临

关键词：类风湿关节炎 miR-146a miR-16 青藤碱中医证型

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类风湿关节炎患者外周血miR-146a及miR-16的表达及与病情活动的相关性研究

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南方医科大学学报 2011年第2期31卷 320-323页

作者：冯知涛李娟任洁吕卓南方医科大学南方医院中医科广东广州510515

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中miR-146a及miR-16的表达及与RA病情活动的相关性。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应检测RA患者活动组24例、缓解组16例及健康对照16例PBMCs-miR-146a、miR-16的表达水平,并且与R... 详细信息

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中miR-146a及miR-16的表达及与RA病情活动的相关性。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应检测RA患者活动组24例、缓解组16例及健康对照16例PBMCs-miR-146a、miR-16的表达水平,并且与RA患者临床指标进行相关性分析。结果 RA患者组miR-146a、miR-16的表达高于健康对照组(P0.05)。结论 RA患者外周血miR-146a和miR-16表达上调,其表达水平与RA病情活动相关,提示miR-146a和miR-16的检测可作为RA病情活动的判断指标。

关键词：关节炎,类风湿 miR-146a miR-16

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RA患者外周血HLA-DR4、PAD4、STAT4 mRNA表达及与疾病活动的相关性

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南方医科大学学报 2010年第6期30卷 1349-1353页

作者：吕卓李娟冯知涛任洁南方医科大学附属南方医院中医风湿科广州广东510515

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血人类白细胞抗原(HLA)-DR4、Ⅳ型肽精氨酸脱亚氨基酶(PAD4)、信号转导与转录激活因子4(STAT4)的表达及与RA病情活动的关系。方法患者来源于南方医院中医风湿科专科门诊及病房,根据DAS28评分分为活动... 详细信息

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血人类白细胞抗原(HLA)-DR4、Ⅳ型肽精氨酸脱亚氨基酶(PAD4)、信号转导与转录激活因子4(STAT4)的表达及与RA病情活动的关系。方法患者来源于南方医院中医风湿科专科门诊及病房,根据DAS28评分分为活动期RA患者24例(DAS28≥2.6),缓解期RA患者14例(DAS280.05);活动期RA PAD4 mRNA表达水平高于缓解期RA和对照组(P0.05);RA患者HLA-DR4 mRNA表达与DAS28、抗-CCP抗体、RF均无相关性(P>0.05);PAD4 mRNA表达与DAS28、抗-CCP抗体水平呈正相关(P<0.05),STAT4 mRNA表达与DAS28、RF呈正相关((P<0.05)。结论 1、RA患者外周血HLA-DR4、PAD4、STAT4基因表达上调;2、HLA-DR4 mRNA表达水平与RA活动性无明显相关;PAD4、STAT4 mRNA表达水平与疾病活动密切相关。检测PAD4、STAT4 mRNA表达水平有助于对RA疾病活动的判断。

关键词：类风湿关节炎 HLA-DR4 Ⅳ型肽精氨酸脱亚氨基酶信号转导与转录激活因子4 mRNA

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类风湿关节炎患者滑液NK-22细胞对成纤维样滑膜细胞增殖的影响及其机制研究

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南方医科大学学报 2011年第4期31卷 661-664页

作者：任洁李娟冯知涛吕卓南方医科大学南方医院风湿免疫科广东广州510515

目的探讨类风湿关节炎患者滑液NK-22细胞对成纤维样滑膜细胞增殖的影响及其可能机制。方法采用流式细胞术检测20例RA患者及20例健康对照外周血(peripheral blood,PB)、10例RA患者滑液(synovial fluid,SF)中NK-22细胞(NKp44+CCR6+NK细胞... 详细信息

目的探讨类风湿关节炎患者滑液NK-22细胞对成纤维样滑膜细胞增殖的影响及其可能机制。方法采用流式细胞术检测20例RA患者及20例健康对照外周血(peripheral blood,PB)、10例RA患者滑液(synovial fluid,SF)中NK-22细胞(NKp44+CCR6+NK细胞)比例。流式细胞术分选滑液NK-22细胞,鉴定细胞纯度;体外悬浮培养2周,佛波酯(PMA()20ng/ml)和ionomycin(0.5μmol/L)刺激后NK-22细胞培养上清液分别作用于成纤维样滑膜细胞(fibroblastlike synoviocytes,FLS)24 h、48 h、72 h、96 h,MTT法检测成纤维样滑膜细胞增殖情况。ELISA检测NK-22细胞培养上清中IL-22、T0.N05F)-;αR浓A度患。者结滑果液①NKR-A22患细者胞外比周例血为N4K.5-62%2细,明胞显比高例于为自0身.9外56周%,血明比显例高1于.31健5%康(对P90%。③PMA和ionomycin刺激后NK-22细胞培养上清作用于成纤维样滑膜细胞24 h、48 h、72 h、96 h可明显刺激成纤维样滑膜细胞增殖(P<0.05)。④PMA和ionomycin刺激后NK-22细胞培养上清中IL-22、TNF-α浓度分别为941.82 pg/ml和368.10 pg/ml。结论类风湿关节炎患者关节液NK-22细胞可明显刺激成纤维样滑膜细胞增殖,其可能机制与NK-22细胞能分泌白介素-22(IL-22)、肿瘤坏死因子(TNF-α)有关。

关键词：类风湿关节炎 NK-22细胞成纤维样滑膜细胞增殖

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乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白调控胶原诱导性关节炎小鼠肠系膜淋巴结Treg/Th17平衡

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南方医科大学学报 2014年第5期34卷 622-626页

作者：王浩冯知涛朱俊卿李娟南方医科大学南方医院中医科广东广州510515

目的探讨乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白(Zaocys typeⅡcollagen,ZCⅡ)对胶原诱导性关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞(mesenteric lymph node lymphocytes,MLNLs)Treg/Th17细胞及其细胞因子的影响。方法鸡Ⅱ型胶原蛋白小鼠尾根部皮下注射,诱导CIA模型;胃蛋白酶消化法提取ZCⅡ,口服高、中、低剂量ZCⅡ干预。视觉评分法评价关节肿胀,HE染色评价膝关节组织病理学;分离小鼠MLNLs,流式细胞术(FCM)检测Treg和Th17细胞的比率;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测MLNLs培养上清中TGF-β和IL-17的活性。结果与正常组比较,CIA小鼠关节炎及组织病理学评分升高(P<0.05),MLNLs中Treg和Th17的比率及其分泌TGF-β和IL-17水平上升(P<0.05)。与CIA模型组比较,不同剂量ZCⅡ干预组关节炎及组织病理学评分降低(P<0.05),MLNLs中Treg细胞的比率上升,Th17细胞的比率下降(P<0.05),MLNLs分泌TGF-β水平上升,分泌IL-17水平下降(P<0.05)。结论口服ZCⅡ能够改善CIA小鼠关节炎及组织病理学评分;ZCⅡ可能通过调节MLNLs中Treg/Th17比率及其细胞因子的水平,重新诱导CIA小鼠的免疫平衡,缓解关节炎症。

关键词： Ⅱ型胶原蛋白类风湿关节炎胶原诱导性关节炎 Treg Th17 口服免疫耐受

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蓝布正总鞣质提取纯化工艺的优化

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中成药 2021年第5期43卷 1291-1295页

作者：王凯黄亚光陶薇何毓敏梅志刚冯知涛三峡大学医学院湖北宜昌443002 天水市卫生学校甘肃天水741099 湖南中医药大学中西医结合学院湖南长沙410208

目的优化蓝布正总鞣质提取纯化工艺。方法以料液比、乙醇体积分数、超声温度、超声时间为影响因素,总鞣质提取率为评价指标,正交试验优化提取工艺;以洗脱剂(乙醇)体积分数、洗脱剂用量、上样质量浓度、上样量为影响因素,总鞣质吸附量和... 详细信息

目的优化蓝布正总鞣质提取纯化工艺。方法以料液比、乙醇体积分数、超声温度、超声时间为影响因素,总鞣质提取率为评价指标,正交试验优化提取工艺;以洗脱剂(乙醇)体积分数、洗脱剂用量、上样质量浓度、上样量为影响因素,总鞣质吸附量和洗脱率为评价指标,单因素试验优化纯化工艺。HPLC法测定纯化前后鞣花酸含量变化。结果最优提取工艺为料液比1∶10,乙醇体积分数40%,超声温度60℃,超声时间60 min,总鞣质提取率为3.16%;最优纯化工艺为取HPD100型大孔吸附树脂,加入20 mL 1.15 mg/mL上样液,40 mL 50%乙醇洗脱。纯化后,鞣花酸含量大幅提高至纯化前的2倍。结论该方法可靠稳定,可用于蓝布正总鞣质的提取纯化。

关键词：蓝布正总鞣质提取纯化正交试验单因素试验 HPLC

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小乌桂颗粒剂联合DMARDs治疗类风湿关节炎的临床研究

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中药材 2014年第4期37卷 710-713页

作者：陈湘南朱俊卿冯知涛黄文辉李娟南方医科大学中医药学院广东广州510515 南方医科大学南方医院广东广州510515

目的：评价小乌桂颗粒剂联合DMARDs治疗类风湿关节炎（RA）的疗效和安全性。方法：2011年12月~2013年1月南方医院风湿专科RA（寒湿痹阻型）患者87例,纳入对照组37例给予NSAIDs和DMARDs治疗,观察组50例在对照组的基础上加用小乌桂颗粒剂... 详细信息

目的：评价小乌桂颗粒剂联合DMARDs治疗类风湿关节炎（RA）的疗效和安全性。方法：2011年12月~2013年1月南方医院风湿专科RA（寒湿痹阻型）患者87例,纳入对照组37例给予NSAIDs和DMARDs治疗,观察组50例在对照组的基础上加用小乌桂颗粒剂;主要疗效评价指标为DAS28-CRP、ACR20、ACR50、中医痹病（寒湿痹阻型：关节疼痛、关节肿胀、关节畏冷、晨僵、肢体沉重）总改善率;次要疗效评价指标为ACR70、HAQ、疼痛VAS评分、疲乏VAS评分、晨僵时间及实验室指标ESR、RF、抗CCP。安全性评价：肝功能、血常规等实验室指标及疗程中出现的不良反应。疗程12周。结果：主要疗效评价指标ACR20、ACR50,12周时观察组分别为68%、36%,对照组分别为32.43%、16.22%,两组间差异有统计学意义（P〈0.05）;在4、8、12周时DAS28-CRP改善总有效率两组间差异有统计学意义（P〈0.05）;12周时中医痹病总改善率观察组为98%,对照组为91.89%,两组间差异有统计学意义（P〈0.05）。两组次要疗效评价指标（疼痛VAS、疲劳VAS、晨僵时间及ACR70、HAQ变化）比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）,两组在实验室指标比较除ACPA差异无统计学意义外,其余指标差异均有统计学意义（P〈0.05）。不良反应发生例次对照组为5例,观察组为2例,两组比较差异无统计学意义。结论：小乌桂颗粒剂联合DMARDs能提高RA患者ACR20、ACR50,改善DAS28-CRP,在炎症和病情的控制及中医症状的关节疼痛、肿胀、畏冷和晨僵、肢体沉重的改善优于未联合用药,具有较好的应用前景。

关键词：类风湿关节炎小乌桂颗粒剂 DMARDs 联合治疗

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类风湿关节炎患者外周血及滑液NKp44＋自然杀伤细胞的表达和临床意义探讨

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中华风湿病学杂志 2011年第3期15卷 159-163页

作者：任洁冯知涛吕卓李娟南方医科大学南方医院风湿免疫科广州510515

目的探讨类风湿关节炎（RA）患者外周血及滑液NKp44＋自然杀伤细胞的临床意义。方法采用流式细胞术检测20例活动期RA患者[疾病活动指数（DAS）28≥2．6]、15例缓解期RA患者（DAS28〈2．6）及20名健康对照者外周血NKp44＋自然杀伤细胞比... 详细信息

目的探讨类风湿关节炎（RA）患者外周血及滑液NKp44＋自然杀伤细胞的临床意义。方法采用流式细胞术检测20例活动期RA患者[疾病活动指数（DAS）28≥2．6]、15例缓解期RA患者（DAS28〈2．6）及20名健康对照者外周血NKp44＋自然杀伤细胞比例及10例活动期RA患者滑液NKp44＋自然杀伤细胞比例。多重非参数检验比较3组间NKp44咱然杀伤细胞比例差异。采用Spearman相关分析NKp44＋自然杀伤细胞与临床指标[DAS28评分、抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体、类风湿因子（RF）]的相关性。结果①活动期、缓解期RA患者及健康对照者外周血NKp44＋自然杀伤细胞比例分别为（1．480±4．750）％、（0．540±0．590）％、（0．000＋0．000）％，活动期RA患者外周血NKp44＋细胞比例明显高于缓解期和健康对照（非=46．708，P=0．000）。②10例活动期RA患者滑液NKp44＋自然杀伤细胞比例为（15．6±11．7）％，明显高于其外周血NKp44＋自然杀伤细胞比例（3．6±2．5）％（z=-3．780，P=-0．000）。③活动期RA患者外周血NKp44＋自然杀伤细胞比例与DAS28评分、抗CCP抗体呈正相关（r=0．777，P=0．000；r=0．967，P=0．000），与RF无相关性（r=--0．343，P=0．138）。滑液NKp44＋自然杀伤细胞比例与DAS28评分、抗CCP抗体呈正相关（r=0．930，P=0．000；r=O．867，P=0．001），与RF无相关性（r=0．564，P=0．09）。结论NKp44＋自然杀伤细胞在RA患者外周血及滑液中明显增高，且与DAS28评分、抗CCP抗体呈正相关，提示NKp44＋自然杀伤细胞与疾病活动度和1府情严重程度相关。

关键词：关节炎类风湿杀伤细胞天然类风湿因子

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氧感知信号通路在类风湿关节炎中的研究进展

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中国免疫学杂志 2023年

作者：刘小曼沈小兰郭响张婧恺侯晓强冯知涛三峡大学健康医学院三峡大学第一临床医学院宜昌市中心人民医院广州中医药大学第二临床医学院

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以滑膜炎、滑膜细胞增殖、新生血管生成、骨与软骨破坏为特征的自身免疫性疾病，其发病机制复杂至今尚未完全阐明，多种细胞、细胞因子及信号通路都参与了RA发病，其中缺氧诱导因子（hyp... 详细信息

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以滑膜炎、滑膜细胞增殖、新生血管生成、骨与软骨破坏为特征的自身免疫性疾病，其发病机制复杂至今尚未完全阐明，多种细胞、细胞因子及信号通路都参与了RA发病，其中缺氧诱导因子（hypoxia inducible factor，HIF）和氧感知信号通路（Prolyl hydroxylase domain - Hypoxia inducible factor - Von Hipple-lindau tumor suppressor protein， PHD-HIF-VHL）与RA的发生发展有密切关联，在滑膜细胞增生、炎症反应和软骨破坏等环节都发挥了重要作用。本研究从氧感知信号通路作用机制、参与RA发病环节方面综述氧感知信号通路在RA中的研究进展，以期以此通路重要分子为靶点为抗RA药物研究提供思路和理论依据。

关键词：氧感知类风湿关节炎缺氧诱导因子信号通路血管生成

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民族药蓝布正化学成分及药理作用研究进展

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中草药 2018年第1期49卷 233-238页

作者：陶薇王凯王金凤冯知涛梅志刚三峡大学医学院国家中医药管理局中药药理科研三级实验室湖北宜昌443002

蓝布正为我国民间传统药物,常用于治疗头痛头晕、小儿惊风、高血压、腰腿疼痛、月经不调等疾病,然而其潜在的药理作用机制尚不明了。截至目前,蓝布正中已发现的化学成分主要有萜类(主要为单萜、倍半萜和三萜类)、鞣质类、苯丙素类等。... 详细信息

蓝布正为我国民间传统药物,常用于治疗头痛头晕、小儿惊风、高血压、腰腿疼痛、月经不调等疾病,然而其潜在的药理作用机制尚不明了。截至目前,蓝布正中已发现的化学成分主要有萜类(主要为单萜、倍半萜和三萜类)、鞣质类、苯丙素类等。研究显示,蓝布正具有抗凝血、抗高血压、抗炎、抗肿瘤和治疗缺血性疾病等多种药理作用。对近40年来国内外关于蓝布正的活性成分、药理作用的研究进展进行综述,为蓝布正临床合理推广应用与相关新药的研发提供参考。

关键词：蓝布正萜类鞣质类苯丙素类抗凝血活性抗高血压活性抗炎活性

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