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雷公藤发状根的鉴定和培养及其次生代谢物调控初步研究

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雷公藤发状根的鉴定和培养及其次生代谢物调控初步研究

作者：冯慧娜西北农林科技大学

学位级别：硕士

雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.f.）为木质藤本植物，系卫矛科雷公藤属，具有良好的农用活性和医药价值，其主要活性成分为萜类和生物碱类。近年来随着对雷公藤需求的增加和人们长期过度性采挖，雷公藤的生存受到严重威胁造成资... 详细信息

雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.f.）为木质藤本植物，系卫矛科雷公藤属，具有良好的农用活性和医药价值，其主要活性成分为萜类和生物碱类。近年来随着对雷公藤需求的增加和人们长期过度性采挖，雷公藤的生存受到严重威胁造成资源的日益减少。此外，雷公藤生长周期长，活性物质化学合成困难、成本高，远远不能满足人类对其需求。因此，开展雷公藤组织培养对解决雷公藤自然资源有限性这一问题具有十分重要的意义。发状根具有生长速度快、合成次生物质含量高且稳定等优点，在生产植物次生代谢产物方面具有极大的潜力。本文在前期研究基础上就雷公藤发状根的PCR鉴定、液体培养体系的建立及前体和诱导子对次生代谢物质含量的影响三个方面进行研究，旨在为利用发状根生产雷公藤中活性物质奠定基础。主要研究结果如下：1.雷公藤发状根的鉴定。采用PCR技术，对前期所诱导的雷公藤发状根的DNA进行特异性扩增，得到了rolB（506bp）、rolC（487bp）、aux1（815bp）3个基因，说明发根农杆菌A4的Ri质粒中的T-DNA已转入雷公藤根系中，由此证明该根系为雷公藤发状根。2.筛选得到较适于雷公藤发状根生长的固体培养基。通过雷公藤发状根在常用培养基上的培养研究，并附加50ml/l椰子汁和1mg/L IBA，筛选出了雷公藤发状根生长的较佳固体培养基：1/2MS+50ml/l椰子汁+1mg/L IBA；应用该培养基对雷公藤发状根进行继代培养（100ml三角瓶），50d后其鲜重和干重分别达5.37g和0.5g。3.初步进行了雷公藤发状根的液体培养。雷公藤发状根在1/2MS（并附加50ml/l椰子汁、1mg/L IBA）液体培养基中静止培养30d后，再转入摇床（120rpm）中液体培养（250ml三角瓶），其生长良好，经过多次继代，生长状况趋于稳定。4.初步测试了前体物质和诱导子对雷公藤发状根中内酯醇和次碱含量的影响。结果表明不同前体和诱导子对雷公藤发状根中次级代谢产物的影响不同：（1）茉莉酸甲酯（MeJA）可显著促进内酯醇和次碱的产生，50μM的MeJA处理15d可使培养物总的内酯醇和次碱含量分别达1448.0μg/瓶和3851.4μg/瓶，分别是同期对照的1.9和6.7倍；MeJA的添加可显著促进内酯醇向培养液中分泌，添加15d后其分泌量增加了1.1倍；（2）烟酸和水杨酸亦可明显促进总的次碱产生；（3）烟酸、异亮氨酸、天冬氨酸和水杨酸对内酯醇的产生，以及异亮氨酸和天冬氨酸对总的次碱的产生则具有不同程度的抑制作用。

关键词：雷公藤发状根 PCR鉴定液体培养 MeJA

寡克隆区带阳性的神经型布鲁菌病患者的临床、影像学及脑脊液特点分析

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中华医学杂志 2024年第19期104卷 1707-1712页

作者：冯慧娜刘艳茹李京红郝洪军郑州大学第一附属医院神经内科郑州450052 郑州大学第一附属医院神经内科实验室郑州450052 北京大学第一医院神经内科和神经免疫室北京100034

目的探讨寡克隆区带(OCB)阳性的神经型布鲁菌病(NB)患者的临床、影像学及脑脊液特点。方法回顾性分析郑州大学第一附属医院2020年1月至2023年6月间确诊为NB的23例患者,男9例,女14例,年龄47(34,59)岁。根据血清及脑脊液IgG电泳结果将NB... 详细信息

目的探讨寡克隆区带(OCB)阳性的神经型布鲁菌病(NB)患者的临床、影像学及脑脊液特点。方法回顾性分析郑州大学第一附属医院2020年1月至2023年6月间确诊为NB的23例患者,男9例,女14例,年龄47(34,59)岁。根据血清及脑脊液IgG电泳结果将NB患者分为OCB阳性组和OCB阴性组,比较两组的临床、影像学及脑脊液特点。结果23例NB中脑脊液OCB阳性者占65.2%(15/23),以Ⅱ型(14/15)为主;阴性组8例。OCB阳性组临床重型占比(11/15)、脑脊液白细胞计数升高占比(15/15)、IgG指数[M(Q_(1),Q_(3)),0.97(0.57,2.11)],24 h鞘内合成率[55.6(15.3,232.2)mg/24 h]显著高于阴性组[1/8,5/8,0.63(0.51,0.69),11.6(-1.6,17.3)mg/24 h,均P0.05)。OCB阳性组可表现为全脑(幕上合并幕下)脑实质多发病灶(5/15),但OCB阴性组均未发现幕下脑实质受累(0/8)。结论NB患者OCB阳性检出率为65.2%。OCB阳性者临床重症患者更多,神经系统鞘内体液免疫炎性反应更严重,较OCB阴性组更易出现幕下脑实质受累。

关键词：布鲁杆菌病神经系统感染脑脊液寡克隆区带免疫球蛋白病例系列研究

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中西医结合治疗原发性三叉神经痛的临床分析

右江民族医学院学报 2015年第1期37卷 106-107页

作者：冯慧娜浙江省杭州市余杭区中医院浙江杭州311106

目的对中西医结合治疗原发性三叉神经痛的临床效果进行分析。方法采取2013年2月～2014年5月期间本院收治的108例原发性三叉神经痛患者,按照随机分配的原则,将这108例患者分成观察组和对照组,每组54例,对照组患者采取西药治疗,观察组患... 详细信息

目的对中西医结合治疗原发性三叉神经痛的临床效果进行分析。方法采取2013年2月～2014年5月期间本院收治的108例原发性三叉神经痛患者,按照随机分配的原则,将这108例患者分成观察组和对照组,每组54例,对照组患者采取西药治疗,观察组患者在西药的基础上结合针灸和中药治疗,治疗结束后对两组患者的疗效进行比较。结果观察组患者治疗后的总有效率为94.44%,对照组患者治疗后的总有效率为74.07%,两组患者的总有效率相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论中西医结合方法在治疗原发性三叉神经痛中取得了较为显著的疗效,有效地促进了患者的健康,提高了患者的生活质量。

关键词：中西医结合疗法三叉神经痛

日本金融业的实践对增强中国金融业竞争力的启示

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管理观察 2005年第1期 54-55页

作者：李革冯慧娜

日本近期金融重组主要是在 20世纪末国际金融加快重组和国内经济金融陷入低迷的背景下进行的.随着金融全球化的发展,欧美金融重组步伐加快,许多对金融市场具有巨大影响力的大型国际金融企业集团初步形成.由于日本经济在泡沫经济破灭后... 详细信息

日本近期金融重组主要是在 20世纪末国际金融加快重组和国内经济金融陷入低迷的背景下进行的.随着金融全球化的发展,欧美金融重组步伐加快,许多对金融市场具有巨大影响力的大型国际金融企业集团初步形成.由于日本经济在泡沫经济破灭后一直处于低迷状态,1997、1998年甚至是负增长,国内企业和金融机构经营十分困难,同时北海道拓殖银行、长期信用银行、日本债券银行、山一证券公司等一批金融机构破产,'银行不倒'的神话被打破,金融机构的信誉急剧下降.另外,由于日本原有的金融市场相对封闭,金融业严格分业经营,金融机构经营效率低、竞争力差,既难以满足日本经济发展的需要,也难以与欧美等国的金融机构竞争.因此,日本朝野及金融界都认识到了金融重组的紧迫性,从而开始了'金融大爆炸'式的金融体系改革和重组.

关键词：风险控制能力城市商业规模经济泡沫经济破灭操作风险利润最大化利率市场化进程规模竞争风险

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论中医特色慢病管理的重要性与中医介入优势

中医药管理杂志 2021年第9期29卷 235-236页

作者：冯慧娜金建明杭州市余杭区中医院浙江杭州311106

目的:探索中医特色慢病管理在中风患者管理中的重要性和优势。方法:选择2017年9月~2019年6月在医院治疗的128例中风患者为研究对象,随机均分为观察组和对照组各64例,对照组使用常规的管理方案,观察组添加中医特色慢病管理方案,比较两组... 详细信息

目的:探索中医特色慢病管理在中风患者管理中的重要性和优势。方法:选择2017年9月~2019年6月在医院治疗的128例中风患者为研究对象,随机均分为观察组和对照组各64例,对照组使用常规的管理方案,观察组添加中医特色慢病管理方案,比较两组患者的管理效果。结果:观察组患者恢复的总有效率,显著高于对照组(P<0.05)。观察组患者的抑郁心理、焦虑心理、紧张心理及恐惧心理等评分,均显著低于对照组(P<0.05)。结论:在中风患者的管理中添加中医特色慢病管理,能够改善患者的临床症状,使并发症的发生风险减少,缓解患者的发病痛苦,对患者的身体康复具有促进作用,提升了患者的生活质量,患者对医院的医疗服务更加满意。

关键词：中医特色慢病管理中风患者管理

成人神经皮肤黑变病一例临床特征分析及文献复习

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郑州大学学报（医学版） 2023年第5期58卷 726-734页

作者：刘艳茹冯慧娜张博爱李京红郑州大学第一附属医院神经内科郑州450052

目的:探讨成人神经皮肤黑变病(NCM)的临床特征、组织病理学、治疗及预后。方法:总结2021年3月就诊于郑州大学第一附属医院的1例成年NCM患者的临床资料,并系统性回顾国内外文献报道的成人NCM病例,对其皮肤特征、临床表现、影像学、组织... 详细信息

目的:探讨成人神经皮肤黑变病(NCM)的临床特征、组织病理学、治疗及预后。方法:总结2021年3月就诊于郑州大学第一附属医院的1例成年NCM患者的临床资料,并系统性回顾国内外文献报道的成人NCM病例,对其皮肤特征、临床表现、影像学、组织病理学、脑脊液、治疗及预后进行分析。结果:本例患者为60岁女性,临床表现为颅高压、脊髓等神经精神障碍,合并多发先天性黑色素细胞痣,MRI示沿脑沟脑回分布的FLAIR序列高信号,脑积水伴弥漫性柔脑膜强化,脑脊液发现黑色素细胞,免疫组化染色阳性,未发现中枢神经系统外肿瘤证据。英文文献中收集成年NCM患者56例,中文文献收集19例。巨大或多发黑色素细胞痣是该类型患者重要的皮肤特征,主要分布于躯干(86.0%;84.2%)。颅高压(66.7%;84.2%)、癫痫(43.1%;52.6%)是主要临床表现,可累及脊髓(17.6%;5.3%)。弥漫性脑脊膜及占位性病变是最常见的影像学特征,可合并Dandy-Walker畸形(7.5%;5.3%)。组织病理恶性比例高,总体死亡率71.4%(40/56)。结论:NCM临床特征具有年龄异质性。颅高压和癫痫及弥漫性脑膜病变和颅内占位性病变分别是成人NCM最常见的临床及影像学特征,恶性比例高,预后差。

关键词：神经皮肤黑变病黑色素细胞痣,先天性脑膜黑色素细胞增多症黑色素肿瘤,中枢神经系统

雷公藤胚状体培养合成雷公藤甲素与总生物碱的初步研究

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农业生物技术学报 2013年第6期21卷 631-640页

作者：祝传书冯慧娜薛璐莎杨广隶冯俊涛张兴西北农林科技大学无公害农药研究服务中心陕西省生物农药工程技术研究中心

雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)是一种多年生的木质藤本植物,生长周期长,次生代谢产物含量低,野生自然资源已经无法满足对其药用与农用的需求。为解决自然资源的短缺并保护雷公藤植物野生资源的生态环境,通过细胞工程技术生产... 详细信息

雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)是一种多年生的木质藤本植物,生长周期长,次生代谢产物含量低,野生自然资源已经无法满足对其药用与农用的需求。为解决自然资源的短缺并保护雷公藤植物野生资源的生态环境,通过细胞工程技术生产雷公藤药用与农用活性物质是解决自然资源短缺,保护生态环境的途径之一。本研究中的雷公藤愈伤组织诱导自扦插一年生雷公藤叶片,将获得的愈伤组织建立细胞悬浮体系,诱导悬浮细胞得到生长稳定的胚状体培养体系。研究结果显示,添加60 mL/L椰汁的1/2 MS液体培养基可诱导愈伤组织形成浅绿色的胚状体,分离后的胚状体在1/2 MS添加0.5 mg/L a-萘乙酸(NAA)的液体培养基中可继续增殖分化。通过对接种量、培养基、装液量和pH值等培养条件的筛选和优化,在1/2MS培养基添加1.0 mg/L NAA和30 g/L蔗糖,胚状体接种量为1.5 g/100 mL,pH值调至5.8,250 mL三角瓶中装液量为120 mL时最适合胚状体的培养生长;添加内生真菌诱导子,以生物量为指标,在1/2MS+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+Y1(叶的内生菌),pH 5.8时雷公藤甲素在胚状体中的含量是叶中的1.07倍,是自然根皮粉中的1.44倍;在1/2MS+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+G4(根的内生菌),pH 5.8时胚状体中总生物碱量17.02倍于叶中总生物碱量,1.46倍于自然根皮粉中总生物碱量。对3龄小菜蛾(Plutella xylostella)的毒杀试验表明,胚状体提取物与根皮粉提取物相似,100 mg处理浓度下,72 h时死亡率均在90%以上。通过雷公藤叶愈伤组织诱导的雷公藤胚状体培养体系,其次生代谢物(雷公藤甲素与雷公藤总生物碱)含量与野生雷公藤叶和根皮中的相当,胚状体提取物的杀虫活性与雷公藤根皮粉的杀虫活性无明显差异,说明雷公藤胚状体可作为解决雷公藤植物资源短缺的一条途径,为进一步研究和利用雷公藤这一植物资源提供基础资料。

关键词：雷公藤胚状体雷公藤甲素雷公藤生物碱

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基于农业全产业链金融协同支农创新研究

当代农村财经 2021年第9期 61-64页

作者：杨子鑫白旭冯慧娜李景波吉林农业大学经济管理学院

为深化金融供给侧结构性改革,深入贯彻落实金融支持乡村振兴战略,实现产业兴旺,本文运用系统集成思想,基于农业产业链原理,围绕价值链及风险链构建担保+信贷+保险+期货的“四元一体”综合金融服务模式,增强多元金融协同支农服务功能,从... 详细信息

为深化金融供给侧结构性改革,深入贯彻落实金融支持乡村振兴战略,实现产业兴旺,本文运用系统集成思想,基于农业产业链原理,围绕价值链及风险链构建担保+信贷+保险+期货的“四元一体”综合金融服务模式,增强多元金融协同支农服务功能,从而完善农村金融服务体系,推动现代农业发展,助力乡村振兴。

关键词：农村金融产业集群全产业链协同支农

复方苦参熏洗液坐浴对混合痔术后创面愈合、肛门功能恢复的影响

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新中医 2024年第8期56卷 171-174页

作者：欧玉红冯慧娜凌晓瑜浙江大学医学院附属第二医院临平院区(杭州市临平区第一人民医院)肛肠科浙江杭州311100 杭州市临平区中医院神经内科浙江杭州311100 浙江大学医学院附属第二医院临平院区(杭州市临平区第一人民医院)内分泌科浙江杭州311100

目的:观察复方苦参熏洗液坐浴对混合痔术后创面愈合、肛门功能恢复的影响。方法:选择接受外剥内扎术治疗的混合痔患者85例,按随机数字表法分组为观察组43例和对照组42例。观察组术后给予复方苦参熏洗液坐浴,对照组术后给予0.5%聚维酮碘... 详细信息

目的:观察复方苦参熏洗液坐浴对混合痔术后创面愈合、肛门功能恢复的影响。方法:选择接受外剥内扎术治疗的混合痔患者85例,按随机数字表法分组为观察组43例和对照组42例。观察组术后给予复方苦参熏洗液坐浴,对照组术后给予0.5%聚维酮碘液坐浴。治疗14 d后,比较2组术后临床疗效,症状缓解时间、肛缘水肿评分及肛门功能恢复情况。结果:观察组总有效率为95.35%,对照组为80.95%,2组比较,差异有统计学意义(P0.05);术后3、5、7 d,观察组肛缘水肿评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组肛管最大收缩压、肛管舒张压、肛管静息压均较治疗前升高(P<0.05),肛管高压带长度较治疗前缩短(P<0.05);且观察组肛管最大收缩压、肛管舒张压、肛管静息压高于对照组(P<0.05),肛管高压带长度短于对照组(P<0.05)。结论:混合痔术后应用复方苦参熏洗液坐浴治疗可明显缓解术后疼痛,减轻水肿,有助于促进创面愈合及肛门功能恢复。

关键词：混合痔围手术期复方苦参熏洗液坐浴创面愈合肛门功能