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致病性坏死梭杆菌天然白细胞毒素毒性研究

吉林农业大学学报 2013年第4期35卷 484-489页

作者：冯二凯陈立志刘晓颖姚志利王艳中国农业科学院特产研究所长春130112 江苏科技大学生物与化学工程学院镇江212018

为研究坏死梭杆菌白细胞毒素毒性及其致病机理,通过超滤截留技术从细菌培养物上清液分离获得坏死梭杆菌天然白细胞毒素,并通过细胞毒性试验、动物试验以及透射电镜观察等手段对分离获得的白细胞毒素的毒性进行研究。结果表明:坏死梭杆... 详细信息

为研究坏死梭杆菌白细胞毒素毒性及其致病机理,通过超滤截留技术从细菌培养物上清液分离获得坏死梭杆菌天然白细胞毒素,并通过细胞毒性试验、动物试验以及透射电镜观察等手段对分离获得的白细胞毒素的毒性进行研究。结果表明:坏死梭杆菌白细胞毒素对牛外周血白细胞具有细胞毒性作用,毒素毒性强弱与剂量呈正相关性,高浓度白细胞毒素能裂解白细胞,低浓度白细胞毒素则可诱导细胞凋亡。坏死梭杆菌白细胞毒素一方面能诱导宿主形成坏死病灶,另一方面也能诱导宿主产生对抗坏死梭杆菌感染的免疫保护力。

关键词：坏死梭杆菌白细胞毒素毒性凋亡致病机制

Vero细胞生物反应器微载体悬浮培养工艺的建立

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黑龙江畜牧兽医 2018年第1期 186-189,257-258页

作者：盛程程冯二凯任飞李文娟陈立志吉林农业大学动物科学技术学院吉林特研生物技术有限责任公司

为了实现非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)在生物反应器中的大规模生产,并使其可在以Vero细胞为细胞基质的病毒疫苗生产中应用,试验采用控制变量法对Vero细胞微载体悬浮培养相关参数进行逐一摸索研究。结果表明:在3~5 g微载体、1 L培养体系中,... 详细信息

为了实现非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)在生物反应器中的大规模生产,并使其可在以Vero细胞为细胞基质的病毒疫苗生产中应用,试验采用控制变量法对Vero细胞微载体悬浮培养相关参数进行逐一摸索研究。结果表明:在3~5 g微载体、1 L培养体系中,使用DMEM培养基、血清浓度为8%~10%、初始接种密度为30~50个/球,采用灌流式培养方式可使细胞达到最佳状态。说明成功建立了Vero细胞生物反应器的微载体悬浮培养工艺。

关键词：非洲绿猴肾细胞大规模微载体悬浮培养生物反应器疫苗培养工艺

以斑马鱼为模式动物的病原微生物感染模型的研究进展

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吉林农业大学学报 2010年第S1期32卷 49-52页

作者：王燕陈立志刘晓颖冯二凯姚志利江苏科技大学生物与环境工程学院镇江212018 中国农业科学院特产研究所吉林132109

斑马鱼作为一种模式动物,已经被广泛地应用于遗传学和发育生物学研究,随着对该生物免疫系统的深入研究,人们发现斑马鱼有较为完整的特异性免疫系统,并具备血液系统发育过程透明和对特异性免疫系统依赖性低等特点,从而使这种新型模式动... 详细信息

斑马鱼作为一种模式动物,已经被广泛地应用于遗传学和发育生物学研究,随着对该生物免疫系统的深入研究,人们发现斑马鱼有较为完整的特异性免疫系统,并具备血液系统发育过程透明和对特异性免疫系统依赖性低等特点,从而使这种新型模式动物在免疫学研究中的应用开始为人们所重视。已有报道将斑马鱼用于研究多种病原菌和病毒引起的哺乳动物急性感染过程。现对以斑马鱼为模式动物的病原微生物感染模型的研究作一概述。

关键词：兽医学感染模型斑马鱼

坏死梭杆菌44.5ku外膜蛋白的免疫原性分析

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中国兽医科学 2016年第4期46卷 512-515页

作者：徐晶陈立志李淑艳冯二凯齐齐哈尔医学院生化教研室黑龙江齐齐哈尔161006 中国农业科学院特产研究所吉林省特种经济动物分子生物学省部共建实验室吉林长春130112

为分析从坏死梭杆菌中获得的44.5 ku外膜蛋白(OMP)免疫小鼠后的免疫原性,用SLS和LDS等试剂从坏死梭杆菌中提取44.5 ku外膜蛋白,将其作为免疫抗原经弗氏不完全佐剂乳化免疫小鼠,3次免疫后采血,获取血清并进行抗体效价、Western-blotting... 详细信息

为分析从坏死梭杆菌中获得的44.5 ku外膜蛋白(OMP)免疫小鼠后的免疫原性,用SLS和LDS等试剂从坏死梭杆菌中提取44.5 ku外膜蛋白,将其作为免疫抗原经弗氏不完全佐剂乳化免疫小鼠,3次免疫后采血,获取血清并进行抗体效价、Western-blotting免疫原性和保护力检测。结果显示,三免后试验组小鼠血清抗体效价高,同时在攻毒试验中具有较好的保护力,Western-blot显示具有较好的反应特异性。结果表明,坏死梭杆菌44.5 ku外膜蛋白具有较好的免疫应答水平,为坏死梭杆菌亚单位疫苗的研究提供了基础数据。

关键词：坏死梭杆菌外膜蛋白抗原性

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坏死梭杆菌白细胞毒素研究进展

动物医学进展 2009年第7期30卷 68-71页

作者：冯二凯陈立志刘晓颖中国农业科学院特产研究所吉林吉林132109 江苏科技大学生物与环境工程学院江苏镇江212018

坏死梭杆菌白细胞毒素(Lkt)是一组对反刍动物白细胞特别是多形性白细胞(PMNs)有特异性毒性作用的细胞外毒素,被认为是坏死梭杆菌感染动物的主要毒力因子。白细胞毒素的物理稳定性较低,高温或极端pH环境中都能使白细胞毒素活性丧失。研... 详细信息

坏死梭杆菌白细胞毒素(Lkt)是一组对反刍动物白细胞特别是多形性白细胞(PMNs)有特异性毒性作用的细胞外毒素,被认为是坏死梭杆菌感染动物的主要毒力因子。白细胞毒素的物理稳定性较低,高温或极端pH环境中都能使白细胞毒素活性丧失。研究发现,白细胞毒素开放阅读框(ORF)全长9 726bp,由3个基因(lktB、A和C)组成,结构基因是第2个基因(lktA)。白细胞毒素对白细胞的毒性作用有剂量依赖性,并且溶血活性较低,不能在豚鼠猪皮肤上形成皮肤坏死症状。

关键词：坏死梭杆菌白细胞毒素开放阅读框溶血活性

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水貂阿留申病抗体检测技术研究及应用进展

病毒学报 2015年第1期31卷 85-90页

作者：万洪理冯二凯吴洪超杨艳玲倪佳陈立志吉林农业大学长春130118 中国农业科学院特产研究所长春130112 吉林特研生物技术有限责任公司长春130112

水貂阿留申病严重危害毛皮动物产业发展,其病毒中和抗体不能提供保护能力,相反可造成水貂持续性感染,迄今尚无特异的防治方法。因此世界各国主要通过抗体检测技术筛选并淘汰阳性水貂以达到阿留申病的净化清除。本文介绍了阿留申抗体检... 详细信息

水貂阿留申病严重危害毛皮动物产业发展,其病毒中和抗体不能提供保护能力,相反可造成水貂持续性感染,迄今尚无特异的防治方法。因此世界各国主要通过抗体检测技术筛选并淘汰阳性水貂以达到阿留申病的净化清除。本文介绍了阿留申抗体检测的经典技术,常规检测技术对流免疫电泳及一些有潜在应用价值的新兴技术,并对其发展趋势做了展望。

关键词：水貂阿留申病抗体检测对流免疫电泳 ELISA

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梅花鹿致病性源坏死梭杆菌的分离与鉴定

中国预防兽医学报 2018年第4期40卷 353-356页

作者：孟祥玉佟盼盼冯二凯陈立志中国农业科学院特产研究所吉林长春130122 吉林特研生物技术有限责任公司吉林长春130122

为确定湖北省恩施自治州某鹿场致患病鹿蹄腐烂的病原菌,本研究于患病梅花鹿的前蹄病健结合处采集病料并对其进行细菌分离培养,最终分离到一株厌氧菌。对该细菌进行了形态观察、生化试验、16S rRNA基因序列测定、细菌生化鉴定仪鉴定、药... 详细信息

为确定湖北省恩施自治州某鹿场致患病鹿蹄腐烂的病原菌,本研究于患病梅花鹿的前蹄病健结合处采集病料并对其进行细菌分离培养,最终分离到一株厌氧菌。对该细菌进行了形态观察、生化试验、16S rRNA基因序列测定、细菌生化鉴定仪鉴定、药物敏感性试验以及小鼠致病力试验等。结果显示该细菌在显微镜下呈革兰氏阴性、丝状、长短不一的杆菌。16S rRNA基因序列测定结果显示该分离菌株与多株坏死梭杆菌参考株的同源性均为99%,将其命名为HNFnf;经Vitek细菌鉴定仪鉴定该细菌为坏死梭杆菌;药敏试验结果显示,该菌对青霉素、头孢类等中度敏感,对阿米卡星、链霉素、庆大霉素耐药。本研究为临床治疗由坏死梭杆菌引起的反刍动物"腐蹄病"与"肝脓肿"提供参考依据。

关键词：梅花鹿腐蹄病坏死梭杆菌分离鉴定

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坏死梭杆菌外膜蛋白提取及免疫原性分析

动物医学进展 2016年第6期37卷 26-29页

作者：徐晶陈立志刘晓颖冯二凯齐齐哈尔医学院生化教研室黑龙江齐齐哈尔161006 中国农业科学院特产研究所吉林省部共建特种经济动物分子生物学国家重点实验室吉林长春130112

从坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum,FN)中提取外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)并分析免疫原性。采用无菌心脑浸液(BHI)肉汤培养基培养坏死梭杆菌,用20mmol/L HEPEs-LiCl缓冲液提取外膜蛋白,经SDS-PAGE、Western blot和接种小鼠病理学检测分析表明,具有唯一条带,分子质量为44.5ku,具有良好的免疫活性并有一定毒性,研究结果为坏死梭杆菌亚单位疫苗研制奠定了基础。

关键词：坏死梭杆菌外膜蛋白提取免疫活性

生物反应器中PRRSV TJM株在Marc-145细胞上最佳增殖条件研究

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中国兽药杂志 2016年第9期50卷 1-5页

作者：于竞杰冯二凯尹茉莉任飞盛程程胡桂学陈立志吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林特研生物技术有限责任公司长春130112

为了在Marc-145细胞上获得更高滴度的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）TJM株,对细胞培养条件、细胞接种量、微载体的用量以及病毒培养时间等条件进行了优化。结果表明,利用生物反应器悬浮培养Marc-145细胞在血清为金源康且含量为10%、... 详细信息

为了在Marc-145细胞上获得更高滴度的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）TJM株,对细胞培养条件、细胞接种量、微载体的用量以及病毒培养时间等条件进行了优化。结果表明,利用生物反应器悬浮培养Marc-145细胞在血清为金源康且含量为10%、培养基为DMEM、细胞接种密度为20-30细胞/球、微载体为5 g等条件下生长状态最好;病毒最佳培养时间为27-36 h,病毒增殖效果好且能够达到最高的病毒滴度。本试验为微载体培养条件下大规模生产PRRSV-TJM株疫苗奠定了一定理论基础。

关键词： PRRSV Marc-145细胞微载体生物反应器